不同前處理方法對(duì)青椒農(nóng)殘測(cè)定精密度及回收率的影響分析研究

陳瑋琳， 吳桂君，郭 超

（1.永寧縣質(zhì)量計(jì)量檢測(cè)中心，寧夏 銀川 750000；2.銀川能源學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，寧夏 銀川 750000）

近年來(lái)，農(nóng)產(chǎn)品雖然沒(méi)有出現(xiàn)因農(nóng)藥殘留超標(biāo)而引起的中毒事件，但也常出現(xiàn)農(nóng)藥殘留超標(biāo)及禁限類(lèi)農(nóng)藥殘留超標(biāo)的情況[1-3]。青椒由于其獨(dú)特的食用價(jià)值和較高的投資回報(bào)率得到了快速發(fā)展，但青椒極容易發(fā)生病蟲(chóng)害，據(jù)統(tǒng)計(jì)其常見(jiàn)的病蟲(chóng)害有20余種[4-5]。為了保障青椒的產(chǎn)量及質(zhì)量，其病蟲(chóng)害防治工作貫穿整個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈，在防治過(guò)程中存在不規(guī)范使用農(nóng)藥的行為[6-8]，嚴(yán)重影響了消費(fèi)者健康，同時(shí)也對(duì)當(dāng)?shù)氐那嘟烦隹谫Q(mào)易產(chǎn)生不利影響[9]。而在青椒農(nóng)殘檢測(cè)方法中，前處理技術(shù)是農(nóng)殘分析檢測(cè)的關(guān)鍵步驟[10]，一種恰當(dāng)?shù)臉悠非疤幚矸椒芍苯佑绊懽罱K的農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果。對(duì)青椒農(nóng)殘檢測(cè)前處理方法的分析研究可以完善農(nóng)殘檢測(cè)制度和標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于農(nóng)殘實(shí)際檢測(cè)具有一定的指導(dǎo)意義，同時(shí)也能促進(jìn)青椒的對(duì)外出口，加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量管理和控制，降低農(nóng)殘對(duì)人們身體健康的威脅。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

青椒、乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）、氯化鈉（分析純）、濾膜、二氯甲烷（分析純）、石油醚（分析純）、己烷（分析純）、正己烷（色譜純）、乙酸乙酯（分析純）、無(wú)水硫酸鈉（分析純）、凝結(jié)液、弗羅里矽柱(Florisil)、弗羅里硅土、乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）、石墨化炭黑（GCB）、陶瓷均質(zhì)子。

1.2 儀器與設(shè)備

GC-2010Plus型氣相色譜儀，日本島津公司產(chǎn)品；MX-S型旋渦混合器，大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品；AM-3型勻漿機(jī)，HOMOGFNICER產(chǎn)品；SPT-24型氮吹儀，北京斯珀特有限公司產(chǎn)品；HC-3018型離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；KQ-500DV型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；R-3型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，美國(guó)Waters產(chǎn)品；LC-2010HT型氣相色譜三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津公司產(chǎn)品；XY600-1B型分析天平，常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)內(nèi)容

根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和農(nóng)殘檢測(cè)試驗(yàn)方法的要求，檢測(cè)方法的最低檢出限（LOD值）要能夠達(dá)到該物質(zhì)的最高殘留限量值（MRL值）。采用NY/T 761—2008、GB/T 5009.145—2003、GB/T 5009.146—2008、GB 23200.113—2018（QuEchERS）不同標(biāo)準(zhǔn)中的前處理方法，測(cè)定青椒內(nèi)有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥（速克靈、三氟氯氰菊脂）的農(nóng)藥殘留量，并記錄數(shù)據(jù)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析，計(jì)算其的精密度及回收率，比較3種方法所測(cè)的數(shù)據(jù)，并得出結(jié)論。

1.3.2 有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）的測(cè)定

（1）NY/T 761—2008標(biāo)準(zhǔn)中前處理方法。①試樣制備：將青椒取可食用的部分，打成漿狀，于-20~16℃下保存。②提?。喝?5.0 g青椒樣品于勻漿機(jī)中并加人50.0 mL乙腈，勻漿2 min并過(guò)濾。稱(chēng)取5~7 g氯化鈉放入量筒中，取40~50 mL濾液倒入量筒。振蕩1 min并在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。③凈化：取10.00 mL乙腈溶液并置于燒杯中，放在80℃水浴鍋上。蒸發(fā)至接近干燥，加2.0 mL丙酮。轉(zhuǎn)移至離心管，用約3 mL丙酮沖洗燒杯3次，定容至5.0 mL?；靹蚝笠迫?個(gè)2 mL自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中，供測(cè)定。④測(cè)定：通過(guò)自動(dòng)進(jìn)樣器將1.0μL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和凈化后的樣品溶液分別注入氣相色譜儀中，雙柱保留時(shí)間定性，并將A柱的樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量。⑤色譜條件：預(yù)柱為脫活石英毛細(xì)管柱，1.0 m，0.53 mm內(nèi)徑。兩根色譜柱的具體條件分別為：A柱：50%聚苯基甲基硅氧烷（DB-17或HP-50+）1柱，30 m×0.53 mm×1.0μm。B柱：100%聚甲基硅氧烷（DB-1或HP-1）1柱，30 m×0.53 mm×1.50μm。

（2）GB/T 5009.145—2003標(biāo)準(zhǔn)中前處理方法。①試樣的制備：同（1）中有機(jī)磷（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）的測(cè)定中試樣制備方法。②提?。悍Q(chēng)取10 g青椒試樣放入燒杯中，加入水（要求與試樣含水量和為10 g）和20 mL丙酮。振蕩30 min后，抽濾，取20 mL濾液倒入分液漏斗中。③凈化：首先將4 mL凝結(jié)劑和1 g助濾劑放入分液漏斗中，輕晃后放置5 min。用布氏漏斗進(jìn)行抽濾，并用少量的凝結(jié)液淋洗分液漏斗和布氏漏斗。將濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，并將3 g氯化鈉加入分液漏斗中。用50，50，30 mL二氯甲烷分3次進(jìn)行提取，合并提取液。將其經(jīng)無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾到濃縮瓶，在35℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，氮?dú)獯蹈伞Ｏ驖饪s瓶加少量正己烷。用棉花塞住醫(yī)用注射器出口，將1 g硅膠以正己烷濕法裝入。壓實(shí)后，把過(guò)濾后的液體倒進(jìn)醫(yī)用注射器。濃縮瓶用正已烷+二氧甲烷（9+1）溶液淋洗并倒進(jìn)醫(yī)用注射器中。依次用4 mL正己烷+丙酮（7+3），4 mL乙酸乙酯，8 mL丙酮+乙酸乙酯（1+1），4 mL丙酮+甲醇（1+1）洗柱。收集全部濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45℃水浴濃縮至近干，定容至1 mL。④測(cè)定：將1μL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和凈化后的溶液分別注入氣相色譜儀中。保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。⑤色譜條件：色譜柱為石英彈性毛細(xì)管柱，OV-101 25 m×0.32 mm（內(nèi)徑）。

（3）GB 23200.113—2018（QuEchERS）標(biāo)準(zhǔn)中前處理方法。①試樣制備：同（1）中有機(jī)磷（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）的測(cè)定中試樣制備方法。②提取、凈化：稱(chēng)取10 g青椒試樣到塑料離心管中。向離心管中加10 mL乙腈、4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g擰檬酸鈉、0.5 g檸酸氫二鈉和一顆陶瓷均質(zhì)子。振蕩1 min后離心5 min。準(zhǔn)確吸取6 mL的上清液到含900 mg硫酸鎂和150 mg PSA的塑料離心管中。渦旋混勻1 min再離心5 min。吸取2 mL的上清液到試管中。在40℃水浴條件下氮吹至近干。加入20μL的內(nèi)標(biāo)溶液和1 mL乙酸乙酯復(fù)溶，用微孔濾膜過(guò)濾，待檢測(cè)。③測(cè)定：將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和定性離子定性，測(cè)得定量離子峰面積。④色譜條件：色譜柱為30 m×0.25 mm×0.25μm，14%腈丙基苯基-86%二甲基聚硅氧烷石英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者。

1.3.3 有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥（速克靈、三氟氯氰菊酯）的測(cè)定

（1）NY/T 761—2008標(biāo)準(zhǔn)中前處理方法。①試樣制備：同2.3.1 NY/T 761—2008中有機(jī)磷（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）試樣制備方法。②提取：同（1）中有機(jī)磷（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）的測(cè)定中試樣提取方法。③凈化：吸取10.00 mL乙腈溶液并置于燒杯中后，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱至近干。加入20 mL正己烷。Florisil柱需要第一次用5.0 mL丙酮+正己烷（10+90）溶液，第二次用5.0 mL正已烷預(yù)淋洗。當(dāng)看到溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)倒入待凈化溶液。用5.0 mL丙酮+正己烷（10+90）溶液沖洗燒杯然后淋洗Florisil柱并重復(fù)淋洗一次。最后把盛有淋洗液的離心管放到氮吹儀上，保持水浴溫度50℃，氮吹蒸發(fā)至小于5 mL。然后再使用正己烷定容至5.0 mL?；靹蚝髮⑵浞湃?個(gè)2 mL的自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中，供上機(jī)檢測(cè)。④測(cè)定：同2.3.1中有機(jī)磷（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）的測(cè)定。⑤色譜條件：預(yù)柱為脫活石英毛細(xì)管柱，1.0 m，0.25 mm內(nèi)徑。2根色譜柱的具體條件分別為：A柱：100%聚甲基硅氧烷（DB-1或HP-1）1柱，30 m×0.25 mm×0.25μm。B柱：50%聚苯基甲基硅氧烷（DB-17或HP-50+）1柱，30 m×0.25 mm×0.25μm。

（2）GB/T 5009.146—2008標(biāo)準(zhǔn)中前處理方法。①試樣制備：同2.3.1 NY/T 761—2008中有機(jī)磷（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）試樣制備方法。②提取：稱(chēng)量20 g青椒試樣，放進(jìn)組織搗碎杯中，并加入30 mL丙酮和30 mL石油醚并搗碎2 min。經(jīng)抽濾后倒入分液漏斗中，搖勻后靜置分層。將下層溶液移到另一個(gè)分液漏斗中，用2×20 mL石油醚萃取3次。最后合并3次的石油醚分層并經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至10 mL。③凈化：用20 mL石油醚淋洗柱體，倒掉淋洗液。吸取2 mL提取液，放入已經(jīng)淋洗過(guò)的凈化柱。量取100 mL石油醚+乙酸乙酯（95+5）溶液洗脫，洗脫液倒入蒸餾瓶中。經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮近干，用石油醚進(jìn)行溶解殘?jiān)陔x心管中，定容至1.0 mL。待檢測(cè)。④測(cè)定：先吸取1μL試樣注入氣相色譜儀，再吸取1μL混標(biāo)使用液進(jìn)樣，記錄2種樣液色譜峰的保留時(shí)間和峰高。根據(jù)組分在色譜上的出峰時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)組分比較定性。⑤色譜條件：色譜柱為石英彈性毛細(xì)管柱，0.25 mm（內(nèi)徑）×15 m，內(nèi)部涂有OV-101固定液。

（3）GB 23200.113—2018（QuEchERS）標(biāo)準(zhǔn)中前處理方法。同1.3.2中（3）GB 23200.113—2018（QuEchERS）標(biāo)準(zhǔn)中前處理方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙酰甲胺磷精密度及回收率的比較

通過(guò)用不同前處理方法對(duì)其進(jìn)行處理，上機(jī)檢測(cè)。

乙酰甲胺磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見(jiàn)表1。

由表1可知，乙酰甲胺磷在上述3種方法中，其中依據(jù)GB 23200.113—2018（QuEchERS）的回收率最好，較為穩(wěn)定，接近100%；RSD值為0.686%，精密度最高，相比于其他2種方法最優(yōu)。

表1 乙酰甲胺磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

2.2 甲基對(duì)硫磷精密度及回收率的比較

通過(guò)用不同前處理方法對(duì)其進(jìn)行處理，上機(jī)檢測(cè)。

甲基對(duì)硫磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見(jiàn)表2。

由表2可知，甲基對(duì)硫磷在上述3種方法中，比較可得GB 232 00.113—2018（QuEchERS）測(cè)得回收率較為穩(wěn)定，接近100%；RSD值0.797%，精密度最高，相比于其他2種方法最優(yōu)。

表2 甲基對(duì)硫磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

2.3 速克靈精密度及回收率的比較

通過(guò)用不同前處理方法對(duì)其進(jìn)行處理，上機(jī)檢測(cè)。

速克靈在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見(jiàn)表3。

由表3可知，速克靈在上述3種方法中，其中依據(jù)GB 23200.113—2018（QuEchERS）的回收率最好，較為穩(wěn)定，接近100%；RSD值為1.536%，精密度最高，相比于其他2種方法較為穩(wěn)定。

表3 速克靈在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

2.4 三氟氯氰菊酯精密度及回收率的比較

通過(guò)用不同前處理方法對(duì)其進(jìn)行處理并上次檢測(cè)。

三氟氯氰菊酯在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見(jiàn)表4。

由表4可知，三氟氯氰菊酯在上述3種方法中，依據(jù)GB 23200.113—2018（QuEchERS）的回收率最好，較為穩(wěn)定，接近100%；RSD值為2.313%，精密度最高，相比于其他2種方法較為穩(wěn)定。

表4 三氟氯氰菊酯在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

3 結(jié)論

利用NY/T 761—2008、GB/T 5009.145—2003和GB/T 5009.146—2008、GB 23200.113—2018（QuEch-ERS）3種國(guó)標(biāo)方法中的前處理技術(shù)，測(cè)定長(zhǎng)治市某蔬菜生產(chǎn)基地青椒有機(jī)磷（乙酰甲胺磷、甲基對(duì)硫磷）、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥（速克靈、三氟氯氰菊脂）4種農(nóng)藥，通過(guò)加標(biāo)回收來(lái)進(jìn)行精密度及回收率的比較。這3種前處理方法測(cè)定的回收率都在要求的范圍內(nèi)，由試驗(yàn)可以看出GB 23200.113—2018（QuEchERS）測(cè)定的回收率最好，更接近于100%；RSD值最小，離散度最低，精密度最好。對(duì)于操作性而言，GB 23200.113—2018（QuEchERS）更為簡(jiǎn)便、易操作，無(wú)需專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)和較高的操作技能便可以很好地完成檢測(cè)，且溶劑使用量少，污染小，有機(jī)磷類(lèi)、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥都適用，還可用于谷物類(lèi)、油料類(lèi)作為基質(zhì)進(jìn)行農(nóng)殘檢測(cè)。