M2型巨噬細(xì)胞來(lái)源的外泌體對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠的作用及其機(jī)制研究*

聞君俠，王瑾，江彬鋒，翟利鋒，劉建

（浙江省立同德醫(yī)院 骨傷科，浙江 杭州 310012）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）是一種世界性高發(fā)的自身免疫性疾病，其發(fā)病率高達(dá)1%[1-2]，是骨骼和軟骨炎癥損傷導(dǎo)致的關(guān)節(jié)腫脹和變形。RA 常伴隨關(guān)節(jié)受累、身體功能失調(diào)，嚴(yán)重者可致殘疾，影響患者及家人的生活質(zhì)量[3]。目前，RA 的臨床治療主要采用糖皮質(zhì)激素和非甾體抗炎藥，如經(jīng)典的抗風(fēng)濕性藥物氨甲喋呤，雖然可以緩解臨床癥狀，但長(zhǎng)期使用有肝毒性及致畸等嚴(yán)重副作用[4]；再如抗TNF-α 抗體，可明顯抑制炎癥反應(yīng)，但伴隨免疫系統(tǒng)下降，也增加患者的感染風(fēng)險(xiǎn)，此外高額的費(fèi)用也限制其在臨床的廣泛應(yīng)用[5-6]。鑒于此，研究RA 安全有效的治療方案具有顯著的現(xiàn)實(shí)意義。

巨噬細(xì)胞是機(jī)體最常見(jiàn)的防御性免疫細(xì)胞之一，在炎癥相關(guān)性疾病的發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色[7]。滑膜中的巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌多種炎癥因子及基質(zhì)金屬蛋白酶等介質(zhì)促進(jìn)炎癥反應(yīng)，在調(diào)控RA 發(fā)病過(guò)程中起關(guān)鍵作用[8-12]。已有研究[13]表明，M2 型巨噬細(xì)胞衍生的外泌體（M2-Exo）在體外能夠誘導(dǎo)M1 重新編程，上調(diào)精氨酸酶（Arginase）（M2標(biāo)記），下調(diào)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）（M1 標(biāo)記）的表達(dá)，完全轉(zhuǎn)化為M2 型巨噬細(xì)胞，表現(xiàn)出M2 型巨噬細(xì)胞獨(dú)特的表型和功能特征。此外，M2-Exo 不僅具有重編程巨噬細(xì)胞的功能，而且有促進(jìn)傷口愈合的各種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子[14]。

本研究采用超速離心法體外分離提取白細(xì)胞介素-4（Interleukin-4,IL-4）誘導(dǎo)的M2 型巨噬細(xì)胞，研究M2-Exo 對(duì)炎癥性M1 型巨噬細(xì)胞的表型標(biāo)志物iNOS2、Arginase 表達(dá)分布的影響，探討M2-Exo 抗炎反應(yīng)的分子機(jī)制，為外泌體調(diào)控關(guān)節(jié)組織的炎癥狀態(tài)及修復(fù)過(guò)程提供新的思路，為尋找RA 新的治療方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料

C57BL/6 小鼠10 只，雌性，6～8 周齡，體重（21.0±2.0）g；DBA/I 小鼠30 只，雌性，6～8 周齡，體重（25.0±2.5）g 均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物指南進(jìn)行，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SYXK（浙）2019-0010]。RPMI 1640 培養(yǎng)基及胎牛血清（美國(guó)Life 公司），脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）（L2880）（美國(guó)Sigma 公司），青霉素及鏈霉素（美國(guó)Invitrogen 公司），巨噬細(xì)胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）及IL-4（美國(guó)Peprotech 公司），DAPI 染色液（上海碧云天生物技術(shù)公司），BCA 蛋白測(cè)定試劑盒和Trizol 試劑（美國(guó)Thermo Scientific 公司），蘇木精-伊紅（HE）染色液（南京建成生物工程研究所），酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（上海西唐生物科技有限公司），iNOS（ab210823，美國(guó)Abcam 公司），Arginase（93668，美國(guó)CST 公司），F(xiàn)4/80（ab6640）、Alexa Fluor 488（ab150117）、Alexa Fluor 647（ab150083）（美國(guó)Abcam 公司）。Zetasizer 型Nanosight 可視型納米顆粒分析儀（荷蘭Malvern Panalytical 公司），35 mm 細(xì)胞培養(yǎng)皿（美國(guó)Corning 公司）。

1.2 M2 型巨噬細(xì)胞來(lái)源的外泌體的制備、鑒定及生物學(xué)功能

骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞（bone marrow-derived macrophages,BMDMs）的分離誘導(dǎo)：取10 只C57BL/6小鼠的股骨和脛骨，剪開(kāi)兩端，打開(kāi)骨腔，用10 ml注射器注射無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液（PBS）沖出骨髓，加入紅細(xì)胞裂解液重懸，冰上裂解10 min；完全培養(yǎng)基重懸后，以10 ng/ml M-CSF 誘導(dǎo)單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化，培養(yǎng)7 d 后置于含10 ng/ml IL-4 的完全培養(yǎng)基，誘導(dǎo)分化48 h 后，即得M2 型巨噬細(xì)胞。采用超速離心法分離M2-Exo[15]：將M2 型巨噬細(xì)胞在無(wú)血清條件下培養(yǎng)48 h，收集上清液，4℃1 000 r/min離心20 min，去除細(xì)胞，4 600 r/min 離心20 min，去除死細(xì)胞，9 000 r/min 離心1 h，去除細(xì)胞碎片，收集上清液，11 000 r/min 離心1.5 h，收集M2-Exo。PBS清洗1 次，去除污染蛋白，36 000 r/min 離心1.5 h，收集上清液待測(cè)。將M2-Exo 在2%多聚甲醛溶液中固定過(guò)夜，以25 000 r/min 離心1 h，懸浮于無(wú)水乙醇中。取2 μl 滴加到銅網(wǎng)上，晾干后通過(guò)透射電鏡（TEM）觀察M2-Exo 的形貌，以納米顆粒分析儀分析粒徑大小。將BMDMs 以3×105個(gè)細(xì)胞密度接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)過(guò)夜后，以LPS（100 ng/ml）刺激6 h 誘導(dǎo)為M1 型巨噬細(xì)胞，采用含50 μg/ml 的M2-Exo 無(wú)血清培養(yǎng)基37℃孵育24 h 備用。分離部分含M2-Exo 無(wú)血清孵育的M1型巨噬細(xì)胞，以36 000 r/min離心18 h去除外泌體，作為M0-Exo[16]。

1.3 RA模型的復(fù)制及分組

1.3.1 復(fù)制膠原誘導(dǎo)的RA模型[17]在低溫冰水浴條件下，將牛Ⅱ型膠原與完全弗氏佐劑以1∶1 等體積混合，使用勻漿器攪拌混合溶液，直到顏色變白、形狀黏稠，將乳化劑皮下注射于麻醉后的20 只DBA/1 小鼠尾根部，100 μl/只。在首次免疫注射后第21 天，進(jìn)行第2 次注射，劑量同第1 次。實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)編號(hào)，分為模型組和M2-Exo 組，每組10 只。另取10 只DBA/1 小鼠為對(duì)照組，同法注射生理鹽水。

1.3.2 M2-Exo 處理M2-Exo 組小鼠首次免疫注射后第16 天和第26 天采用關(guān)節(jié)腔注射方式進(jìn)行原位給藥M2-Exo，100 μg/只，左右關(guān)節(jié)腔分別給予50 μg。模型組和對(duì)照組小鼠注射相同體積的生理鹽水。

1.4 觀察指標(biāo)

①體重。每周稱體重，記錄3 組小鼠的生長(zhǎng)狀況。②小鼠關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度。監(jiān)測(cè)小鼠RA 的發(fā)展情況，記錄RA 嚴(yán)重程度。參照關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）評(píng)分[18]評(píng)價(jià)小鼠足爪腫脹情況：0 分，無(wú)紅腫；1 分，足小趾關(guān)節(jié)紅腫；2 分，趾關(guān)節(jié)、足跖均紅腫；3 分，踝關(guān)節(jié)以下均紅腫；4 分，包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪紅腫。平均AI=每組小鼠AI 總和/只數(shù)。③小鼠前足腕部直徑、后足足墊厚度和關(guān)節(jié)炎評(píng)分。使用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠每只腳，測(cè)量3 次取平均值。

1.5 關(guān)節(jié)標(biāo)本處理

免疫（首次注射）后第42 天，抽取所有小鼠的眼靜脈叢血，離心得血清，安樂(lè)法處死小鼠，解剖取關(guān)節(jié)標(biāo)本。

1.6 ELISA 法檢測(cè)小鼠關(guān)節(jié)組織中炎癥細(xì)胞因子水平

將3 組小鼠的關(guān)節(jié)組織分別勻漿，采用ELISA法檢測(cè)小鼠關(guān)節(jié)勻漿上清液中白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.7 免疫熒光染色及Western blotting檢測(cè)

免疫熒光染色：將分離得到的M1 巨噬細(xì)胞以4%多聚甲醛固定，封閉后孵育相應(yīng)的一抗M1（F4/80 和iNOS）和M2（F4/80 和Arginase）過(guò)夜，加入熒光二抗，DAPI 核染后封片，激光共聚焦顯微鏡下觀察并分析。

采用Western blotting 分別檢測(cè)M1 型和M2 型巨噬細(xì)胞的iNOS 和Arginase 蛋白相對(duì)表達(dá)量。將細(xì)胞標(biāo)本以PBS 清洗1 次，加入細(xì)胞裂解液，采用SDSPAGE 電泳分離，轉(zhuǎn)至PVDF 膜，封閉，置于一抗孵育，兔抗iNOS（工作濃度1∶1 000）和兔抗Arginase（工作濃度1∶1 000），二抗為含HRP 的山羊抗兔/小鼠抗體，化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)曝光成像，內(nèi)參為β-actin（工作濃度1∶4 000），采用Image J 圖像分析軟件檢測(cè)蛋白條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白灰度值的比值表示目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.8 RT-PCR檢測(cè)小鼠關(guān)節(jié)腔M1和M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物mRNA的相對(duì)表達(dá)量

分離3 組小鼠的關(guān)節(jié)，采用RT-PCR 檢測(cè)M1型和M2 型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物mRNA 相對(duì)表達(dá)量。采用Trizol 法提取關(guān)節(jié)巨噬細(xì)胞RNA，以逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄cDNA，引物委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR 擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性3 min（1 個(gè)循環(huán)），95℃變性30 s，60℃退火60 s，60℃延伸15 s，40 個(gè)循環(huán)。β-actin為內(nèi)參。PCR 采集目的基因及內(nèi)參基因的Ct 值，采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s>）表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)，多組間的比較用方差分析或重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，進(jìn)一步的兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 成功制備的M2-Exo 及對(duì)M1 型巨噬細(xì)胞的影響

TEM 結(jié)果表明，M2-Exo 呈現(xiàn)類圓形、有完整的包膜的囊狀結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖1）。DLS 檢測(cè)結(jié)果顯示，M2-Exo 的粒徑均值44.1 nm（見(jiàn)圖2）。表明成功分離提取M2-Exo，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 M2-Exo的形態(tài)結(jié)構(gòu)（TEM×10 000）

圖2 M2-Exo的粒徑分布

免疫熒光染色結(jié)果表明，與M0-Exo 處理比較，50 μg/ml 濃度的M2-Exo 可誘導(dǎo)M1 型巨噬細(xì)胞高表達(dá)Arginase，而iNOS 蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（見(jiàn)圖3）。Western blotting 檢測(cè)結(jié)果表明，M0-Exo 處理的M1型巨噬細(xì)胞的Arginase 蛋白相對(duì)表達(dá)量為（0.25±0.06），M2-Exo 處理的M1 型巨噬細(xì)胞Arginase 蛋白相對(duì)表達(dá)量為（8.21±1.26），兩者比較，50 μg/ml濃度的M2-Exo 處理的Arginase 相對(duì)表達(dá)量高（t=14.110，P=0.000）；M0-Exo 處理的M1 型巨噬細(xì)胞的iNOS 蛋白相對(duì)表達(dá)量為（4.32±0.89），M2-Exo 處理的M1 型巨噬細(xì)胞的iNOS 蛋白相對(duì)表達(dá)量為（0.34±0.09），50 μg/ml 濃度的M2-Exo 處理的iNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量低（t=9.949，P=0.000）（見(jiàn)圖4）。

圖3 M2-Exo刺激M1型巨噬細(xì)胞后表面分子的表達(dá)（免疫熒光染色×400）

圖4 M2-Exo和M2-Exo處理24 h的M1型巨噬細(xì)胞表面分子蛋白表達(dá)

2.2 M2-Exo可延緩AR小鼠的發(fā)病過(guò)程

對(duì)照組、模型組和M2-Exo 組在治療第16 天、第21 天、第26 天、第31 天和第36 天的AI 評(píng)分比較，采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)的AI 評(píng)分有差異（F=71.002，P=0.000）；②3 組的AI 評(píng)分有差異（F=401.238，P=0.000），模型組AI評(píng)分高于對(duì)照組，M2-Exo 組AI 評(píng)分低于模型組；③3 組的AI 評(píng)分變化趨勢(shì)有差異（F=217.634，P=0.000）。見(jiàn)表2和圖5。

圖5 3組小鼠在治療過(guò)程中的AI評(píng)分情況（n=10）

表2 3組小鼠AI評(píng)分比較（n=10）

2.3 M2-Exo 對(duì)3 組小鼠關(guān)節(jié)腫脹程度（足趾厚度）的影響

在M2-Exo 使用7 d 后，對(duì)照組小鼠的足趾厚度為（2.12±0.32）mm，模型組小鼠的足趾厚度為（3.75±0.19）mm，M2-Exo 組小鼠的足趾厚度為（2.82±0.53）mm，3 組小鼠的足趾厚度比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=45.972，P=0.000）；進(jìn)一步兩兩比較，模型組和M2-Exo 組足趾厚度大于對(duì)照組，M2-Exo 組小于模型組（見(jiàn)圖6）。模型組第2 次免疫注射10 d 后小鼠前足腕關(guān)節(jié)和后足足墊及趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅腫增厚現(xiàn)象，而M2-Exo 組后足紅腫明顯得到緩解（見(jiàn)圖7）。

圖6 3組小鼠關(guān)節(jié)腫脹程度（足趾厚度）的比較（n=10）

圖7 M2-Exo對(duì)3組小鼠關(guān)節(jié)腫脹程度的影響

2.4 3 組小鼠關(guān)節(jié)組織中TNF-α、IL-6 和IL-1β水平比較

3 組小鼠關(guān)節(jié)組織中TNF-α、IL-6 和IL-1β 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，M2-Exo 組小鼠關(guān)節(jié)組織的TNF-α、IL-6及IL-1β 水平較模型組明顯降低。見(jiàn)表3和圖8。

圖8 3組小鼠關(guān)節(jié)組織中TNF-α、IL-6和IL-1β水平的比較（n=10）

表3 3組小鼠關(guān)節(jié)組織中TNF-α、IL-6和IL-1β水平的比較（n=10，pg/ml）

2.5 3 組小鼠關(guān)節(jié)組織中M1 型和M2 型巨噬細(xì)胞的mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

3 組小鼠關(guān)節(jié)組織中iNOS mRNA、CD86 mRNA、Arginase mRNA 和CD206 mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，M2-Exo 組關(guān)節(jié)組織中iNOS mRNA、CD86 mRNA 相對(duì)表達(dá)量低于模型組（P<0.05），Arginase mRNA 和CD206 mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于模型組（P<0.05）。見(jiàn)表4和圖9。

圖9 3組小鼠關(guān)節(jié)組織中M1型和M2型巨噬細(xì)胞的mRNA相對(duì)表達(dá)量比較（n=10）

表4 3組小鼠關(guān)節(jié)組織中iNOS mRNA、CD86 mRNA、Arginase mRNA和CD206 mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（n=10）

3 討論

RA 是一種以滑膜炎癥、軟骨和關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞及功能受損等為特征的慢性自身免疫性疾病。已往研究提示過(guò)度炎癥是RA 患者的病變特點(diǎn)，持續(xù)存在的抗原可引起機(jī)體內(nèi)連續(xù)的免疫反應(yīng)，表現(xiàn)為滑膜內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，參與RA 發(fā)病[19-20]。因此，溶解炎癥、調(diào)節(jié)免疫對(duì)RA 治療至關(guān)重要。巨噬細(xì)胞是重要的天然免疫細(xì)胞，具有趨化運(yùn)動(dòng)、吞噬、分泌多種炎癥介質(zhì)等功能，在免疫防御中起著重要的作用。已有研究表明，巨噬細(xì)胞參與了RA 的發(fā)病機(jī)制。滑膜的巨噬細(xì)胞可分泌炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-12（IL-12）、白細(xì)胞介素-23（IL-23）、IL-6 和TNF-α 和IL-1β，誘導(dǎo)T 細(xì)胞活化，加重滑膜的炎癥效應(yīng)。另外，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生B 細(xì)胞活化因子，促進(jìn)產(chǎn)生抗體的B 細(xì)胞的增殖[21-22]。有研究報(bào)道[23]，巨噬細(xì)胞向抗炎狀態(tài)的轉(zhuǎn)化可明顯緩解RA和其他自身免疫性疾病的炎癥狀態(tài)，通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換是治療RA 的潛在靶點(diǎn)。

近年來(lái)，許多研究報(bào)道了不同類型干細(xì)胞來(lái)源的外泌體具有再生的潛力。大多數(shù)研究只是簡(jiǎn)單地將外泌體添加到受損的組織和器官中，組織結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)的詳細(xì)機(jī)制尚不明確，探索外泌體如何通過(guò)操縱特定細(xì)胞表型來(lái)緩解疾病癥狀是很好的突破口。很多研究已證明使用外泌體作為自身免疫性疾病治療的潛力，包括Ⅰ型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病及RA 等[24]，來(lái)源于人間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體能夠參與修復(fù)骨關(guān)節(jié)炎退變軟骨[25]。另一項(xiàng)研究證實(shí)了人臍帶血來(lái)源的外泌體（UCB-Exos）通過(guò)下調(diào)巨噬細(xì)胞來(lái)源的白細(xì)胞介素-17（IL-17）的表達(dá)減輕葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘導(dǎo)的炎癥性腸病[26]。由于外泌體在體內(nèi)快速清除和相對(duì)較短的體內(nèi)半衰期，其應(yīng)用于自身免疫疾病的治療仍然面臨挑戰(zhàn)。

M1 表型是由Toll 樣受體激動(dòng)劑LPS 或Th1 細(xì)胞因子如干擾素γ（IFN-γ）誘導(dǎo)，M2 表型可由Th2細(xì)胞因子IL-10 或IL-4 等激活。研究表明單核-巨噬細(xì)胞有相當(dāng)大的表型可塑性，激活單核細(xì)胞可改變其表型和功能[27]。基于巨噬細(xì)胞的可塑性，持續(xù)激活抗炎巨噬細(xì)胞在一定程度上可以改變病變組織的免疫環(huán)境，以達(dá)到抗炎的目的。為驗(yàn)證M2-Exo 是否能夠誘導(dǎo)M1 型巨噬細(xì)胞的重編程，即由促炎的M1 表型向抗炎M2 表型轉(zhuǎn)換，本研究采用免疫熒光和Western blotting 檢測(cè)M2-Exo 處理的M1 型巨噬細(xì)胞，孵育24 h 后可看到M1 和M2 特異性標(biāo)記iNOS 和Arginase 蛋白分別下調(diào)和上調(diào)。考慮到關(guān)節(jié)腔存在一定的封閉性，通過(guò)2 次原位關(guān)節(jié)腔注射M2-Exo 治療膠原誘導(dǎo)的RA，發(fā)病表現(xiàn)為后足紅腫，與文獻(xiàn)報(bào)道類似[28-29]。在此期間，滑膜組織中促炎的M1 型巨噬細(xì)胞逐漸增多，與局部和全身性炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)上調(diào)同步，因此在二次免疫前后5 d 進(jìn)行干預(yù)治療，結(jié)果顯示，M2-Exo 組RA 小鼠后足紅腫減退，IA 評(píng)分顯著降低，促炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6 和IL-1β 也明顯減少。研究顯示，促炎癥細(xì)胞因子參與肥胖、潰瘍性結(jié)腸炎和RA 等多種疾病的發(fā)生發(fā)展[30]，TNF-α、IL-6 和IL-1β 3 種促炎癥細(xì)胞因子可促進(jìn)破骨細(xì)胞活化，參與滑膜成纖維細(xì)胞增殖活化及關(guān)節(jié)軟骨的破壞，擴(kuò)大級(jí)聯(lián)炎癥效應(yīng)[31]。本研究采用RT-PCR 檢測(cè)各組小鼠的關(guān)節(jié)組織中巨噬細(xì)胞的表型標(biāo)志物mRNA相對(duì)表達(dá)量，M2-Exo 干預(yù)后激活經(jīng)典M1 型巨噬細(xì)胞重編程為M2 型巨噬細(xì)胞，結(jié)果表明巨噬細(xì)胞來(lái)源的外泌體可以調(diào)控巨噬細(xì)胞激活的開(kāi)關(guān)，體內(nèi)外研究均證明了M2 型巨噬細(xì)胞來(lái)源的外泌體可以通過(guò)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞從M1 型向M2 型轉(zhuǎn)換。

綜上所述，本研究提出一種利用外泌體調(diào)控的細(xì)胞重編程的實(shí)驗(yàn)室治療策略，將促炎的M1 型巨噬細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化為抗炎的M2 型巨噬細(xì)胞，提高炎癥溶解效果，為RA 的治療提供新途徑。