• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于生物信息學(xué)的結(jié)直腸癌關(guān)鍵基因篩選及天然化合物分析

    2021-12-10 07:09:26張卉芊李卓然陳怡歡代曉爍
    中醫(yī)腫瘤學(xué)雜志 2021年6期
    關(guān)鍵詞:差異基因直腸直腸癌

    張卉芊, 李卓然, 陳怡歡, 代曉爍

    1.鄭州大學(xué)護(hù)理與健康學(xué)院,河南 鄭州 450001;2.鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,河南 鄭州 450001

    結(jié)直腸癌(Colorectal carcinoma,CRC)包括結(jié)腸癌和直腸癌,是發(fā)生于結(jié)直腸上皮的一種消化系統(tǒng)惡性腫瘤,類型以腺癌最為多見。在世界范圍內(nèi),結(jié)直腸癌的發(fā)病率居第三位,死亡率居第二位[1]。在中國,結(jié)直腸癌也是造成死亡的五大主要癌癥之一[2]。近年來,人們的生活水平不斷提高,而高油高脂的飲食模式及不規(guī)律的生活方式導(dǎo)致結(jié)直腸癌的發(fā)病率不斷上升。盡管在早期發(fā)現(xiàn)和治療方面取得了一定進(jìn)展,結(jié)直腸癌患者的預(yù)后仍然不容樂觀,局部結(jié)直腸癌患者五年生存率約為65%[3]。目前,結(jié)直腸癌患者的臨床治療面臨著易復(fù)發(fā)、預(yù)后差、現(xiàn)有藥物治療效果有限等問題。因此,迫切需要尋找能夠預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。天然化合物作為我國特色的中醫(yī)藥寶庫,經(jīng)過千百年的傳承已被發(fā)現(xiàn)具有多種功效,天然化合物的抗腫瘤作用也受到越來越多的關(guān)注[4-6]。中醫(yī)古籍中多將腫瘤相關(guān)疾病命名為“癥瘕”“積聚”“肺積”等,在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記錄了71味治療癥瘕積聚的藥物[7]。中藥在減輕放化療的毒副作用、提高患者生存率、防止術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮了重要作用[8]。因此,從天然化合物中尋找有效的臨床藥物不失為抗腫瘤治療的好方法[9]。近年來,生物信息學(xué)分析技術(shù)已被廣泛用于大數(shù)據(jù)的分析及篩選工作,從基因芯片中尋找腫瘤組織與相對應(yīng)的正常組織中的差異表達(dá)基因(differently expressed genes,DEGs)已成為數(shù)據(jù)分析的重要方法。本研究在GEO數(shù)據(jù)庫中選取了GSE25070和GSE110225兩個(gè)結(jié)直腸癌基因表達(dá)譜芯片,從中篩選出腫瘤組織與正常組織的差異表達(dá)基因,并探討了其在CRC發(fā)生發(fā)展中的作用,并進(jìn)一步篩選出關(guān)鍵差異基因,探究了其與患者預(yù)后的關(guān)系,從而尋找與患者預(yù)后顯著相關(guān)的關(guān)鍵基因,為CRC的靶向治療提供新策略。最后,本研究進(jìn)一步篩選了在大腸癌細(xì)胞系中與關(guān)鍵基因的表達(dá)具有相關(guān)性的天然化合物,旨在為臨床用藥提供一定的參考。

    1 材料與方法

    1.1 芯片的篩選

    本研究篩選了美國國家生物技術(shù)信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)的GEO數(shù)據(jù)庫中的芯片(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geoprofiles),選擇了包含結(jié)直腸腫瘤組織及鄰近正常組織的基因芯片信息,最終選擇了序列號為GSE25070和GSE110225的兩個(gè)芯片。芯片GSE25070包括26例結(jié)直腸腫瘤組織及其鄰近的正常組織。芯片GSE110225包含30例結(jié)直腸腫瘤組織及其鄰近的正常組織。

    1.2 差異基因的篩選

    本研究采用在線分析工具GEO2R對結(jié)直腸腫瘤組織及鄰近正常組織的差異基因進(jìn)行篩選,下載原始基因表達(dá)數(shù)據(jù)后,以P<0.05,│log2FC│≥1.5作為篩選標(biāo)準(zhǔn),得到差異表達(dá)基因。其中,log2FC≥1.5定義為與正常組織相比上調(diào)的差異表達(dá)基因;log2FC≤-1.5定義為與正常組織相比下調(diào)的差異表達(dá)基因。此外,進(jìn)一步通過繪制韋恩圖對兩個(gè)芯片中的差異表達(dá)基因取交集(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/),最終篩選出兩個(gè)芯片共同的差異表達(dá)基因。

    1.3 差異基因的富集分析

    本研究采用基因本體數(shù)據(jù)庫DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)[10],對 DEGs進(jìn)行基因本體分析(Gene Ontology,GO)及京都基因和基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析,其中GO功能分析包括生物過程(biological process,BP),細(xì)胞組成(cellular component,CC)和分子功能(molecular function,MF)三個(gè)部分,以P<0.01為顯著性基因富集,并繪制柱形圖。

    1.4 差異基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)及核心基因識別

    String(https://string-db.org/)在線工具用于對DEGs進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)(proteinprotein interaction,PPI)分析[11]。分別輸入篩選出的共上調(diào)和共下調(diào)差異基因,選擇multiple proteins,物種選擇homo sapiens,即可構(gòu)建PPI蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)圖。其次,運(yùn)用Cytoscape(https://cytoscape.org/)對PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析,并篩選出與周圍基因有高度連通性的基因作為核心基因。Cytoscape是一款能夠圖形化顯示網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)并能對其進(jìn)行分析和編輯的軟件,它通過幾種拓?fù)渌惴枋龌蚺c基因之間的拓?fù)潢P(guān)系。本研究采用Cytoscape中的cytohubba插件對PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析,cytohubba通過拓?fù)渌惴▽W(wǎng)絡(luò)中的重要節(jié)點(diǎn)及子網(wǎng)之間的關(guān)系進(jìn)行預(yù)測,度(degree)被定義為某節(jié)點(diǎn)與網(wǎng)絡(luò)中其他節(jié)點(diǎn)之間的相互連接的數(shù)目,各個(gè)節(jié)點(diǎn)由線連接,將實(shí)際存在或預(yù)測出有聯(lián)系的節(jié)點(diǎn)相互串聯(lián)。

    1.5 核心基因的表達(dá)量分析及生存分析

    本研究采用GEPIA和UALCAN數(shù)據(jù)庫對基因的表達(dá)水平進(jìn)行分析[12]。GEPIA基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析(http://gepia.cancer-pku.cn/detail.php)是一種用于癌癥和正常組織基因表達(dá)以及交互式分析的網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器,提供交互式和自定義功能,包括差異基因表達(dá)分析、生存分析。UALCAN(http://ualcan.path.uab.edu/)是基于TCGA,MET500和CPTAC數(shù)據(jù)庫進(jìn)行癌癥數(shù)據(jù)在線分析和挖掘的網(wǎng)站,不僅能夠使用戶識別生物標(biāo)志物或執(zhí)行在線驗(yàn)證感興趣的基因,還能夠提供編碼蛋白質(zhì)的表達(dá)譜及患者生存信息等。本研究通過GEPIA和UALCAN數(shù)據(jù)庫對核心基因在CRC和正常組織中的表達(dá)情況進(jìn)行驗(yàn)證。

    Kaplan-Meier plotter數(shù)據(jù)庫(http://www.kmplot.com/analysis/)用于檢測核心基因的表達(dá)水平與患者預(yù)后關(guān)系的分析[13]。Kaplan-Meier plotter能夠評估54 000個(gè)基因(mRNA,miRNA,蛋白質(zhì))對21種腫瘤的影響,數(shù)據(jù)的來源包括GEO、EGA和TCGA。該工具的主要目的是發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證生存生物標(biāo)志物。在數(shù)據(jù)庫中輸入基因名稱,選擇總生存期,設(shè)定P<0.05為顯著性差異,繪制生存曲線。

    1.6 核心基因相關(guān)的藥物敏感性分析

    藥物敏感性分析將823種腫瘤細(xì)胞系和545種藥物的mRNA表達(dá)譜結(jié)合在CCLE數(shù)據(jù)庫中[14],CTRP數(shù)據(jù)庫包括CTRPv2.0_2015_ctd2_Expanded Dataset、ctrpv2.1_2016_pub_NatChemBiol_12_109、和CTRPv2.2_2015_pub_CancerDisc_5_1210。這些化合物包括FDA批準(zhǔn)的藥物、臨床候選藥物和小分子探針等。本研究采用Pearson相關(guān)分析方法,計(jì)算SPP1在癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況及曲線下面積(AUCs)。

    1.7 核心基因與天然化合物相關(guān)性分析

    STITCH數(shù)據(jù)庫是一個(gè)用于檢索被預(yù)測的化合物和蛋白質(zhì)之間互作關(guān)系的平臺,化合物與蛋白質(zhì)之間的關(guān)系通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證、數(shù)據(jù)庫以及文獻(xiàn)中的研究被證實(shí)(http://stitch.embl.de/)。STITCH數(shù)據(jù)庫包含超過30 000種小分子化合物以及來自1133個(gè)物種的260萬個(gè)蛋白質(zhì)之間的互作關(guān)系。本研究采用STITCH數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步分析核心基因與篩選出的天然化合物之間的相關(guān)性。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    在線數(shù)據(jù)庫分析均使用系統(tǒng)默認(rèn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,采用對數(shù)秩和檢驗(yàn),以P<0.05為顯著差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 差異基因的篩選

    本研究從GSE25070芯片中篩選出84個(gè)上調(diào)基因及200個(gè)下調(diào)基因,從芯片GSE110225中篩選出54個(gè)上調(diào)基因及133個(gè)下調(diào)基因。圖1A所示為兩個(gè)芯片的差異基因表達(dá)火山圖,圖中藍(lán)色點(diǎn)代表下調(diào)基因,紅色點(diǎn)代表上調(diào)基因。進(jìn)一步對兩個(gè)數(shù)據(jù)集的差異基因取交集,得到22個(gè)共上調(diào)基因和74個(gè)共下調(diào)基因,表1中列舉了共變化的差異基因。

    表1 兩例芯片中共上調(diào)及共下調(diào)的差異表達(dá)基因Table 1 Two cases of differentially expressed genes that were co-up-regulated and co-down-regulated in the chip

    圖1 差異基因的篩選(A)差異基因火山圖。(B)兩個(gè)芯片中共上調(diào)和共下調(diào)基因韋恩圖Figure 1 Screening of differential genes(A)Differential gene volcano map(B)The Venn diagram of the two chips up-regulated and down-regulated genes

    2.2 差異基因的富集分析

    2.2.1 GO富集分析

    本研究采用DAVID數(shù)據(jù)庫分別對22個(gè)共上調(diào)基因和74個(gè)共下調(diào)基因進(jìn)行功能富集分析,結(jié)果如圖2和表2所示,上調(diào)的生物學(xué)過程主要有膠原蛋白分解代謝的過程、細(xì)胞外基質(zhì)的分解及中性粒細(xì)胞趨化性的正調(diào)控等過程;細(xì)胞組分主要有細(xì)胞外區(qū)域、蛋白質(zhì)的細(xì)胞外基質(zhì)等;分子功能主要有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔、細(xì)胞外基質(zhì)綁定、趨化因子的活動(dòng)及細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分等。下調(diào)的生物學(xué)過程主要有鋅離子的細(xì)胞反應(yīng)、碳酸氫鹽運(yùn)輸、碳代謝過程、細(xì)胞對鎘離子的反應(yīng)等;細(xì)胞組分主要有頂端等離子體膜、質(zhì)膜等;分子功能主要有鋅離子結(jié)合、碳酸脫水酶和氧化還原酶活性等。

    表2 差異表達(dá)基因的GO富集Table 2 Natural compounds related to SPP1 expression

    (續(xù)表2)

    圖2 差異基因的GO和KEGG富集分析(A)上調(diào)基因的GO和KEGG富集分析。(B)下調(diào)基因的GO和KEGG富集分析GO功能中綠色代表分子功能(MF),藍(lán)色代表細(xì)胞組分(CC),紅色代表生物學(xué)過程(BP)Figure 2 GO and KEGG enrichment analysis of differential genes(A)GO and KEGG enrichment analysis of up-regulated genes(B)GO and KEGG enrichment analysis of downregulated genes. In GO function, green represents molecular function(MF),blue represents cellcomponent(CC),and red represents biological process(BP)

    2.2.2 KEGG富集分析

    本研究采用DAVID數(shù)據(jù)庫分別對22個(gè)共上調(diào)基因和74個(gè)共下調(diào)基因進(jìn)行功能富集分析,發(fā)現(xiàn)上調(diào)的通路主要有ECM-受體交互作用、阿米巴病、軍團(tuán)病、NOD樣受體信號通路、粘著斑、沙門氏菌感染及蛋白質(zhì)消化吸收等;下調(diào)的通路主要有礦物質(zhì)的吸收、氮代謝等。

    2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心基因篩選

    將共表達(dá)的差異基因輸入String網(wǎng)站,物種選擇Homo sapiens,即可構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)PPI圖,結(jié)果如圖3所示,PPI顯示各基因之間具有一定的相互作用關(guān)系,其中,各節(jié)點(diǎn)之間淺藍(lán)色及紫色的連線代表已被實(shí)驗(yàn)證明的已知相互作用關(guān)系;綠色、紅色及深藍(lán)色的線代表經(jīng)預(yù)測可能存在的相互作用關(guān)系,其分別代表基因臨近、基因融合及基因同現(xiàn)。在此基礎(chǔ)上,分別將上下調(diào)的差異基因?qū)隿ytoscape中,即得到蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中的核心基因圖,共得到8個(gè)上調(diào)核心基因(MMP1、MMP3、MMP7、SPP1、CXCL1、CXCL2、CXCL8、COL1A1)及 5個(gè)下調(diào)核心基因(MT1F、MT1E、MT1M、MT1H、MT1G)。

    圖3 差異基因的PPI網(wǎng)絡(luò)及核心基因(A)上調(diào)基因的PPI網(wǎng)絡(luò)及核心基因。(B)下調(diào)基因的PPI網(wǎng)絡(luò)及核心基因。Figure 3 PPI network and core genes of differential genes(A)PPI network and core genes of up-regulated genes(B)Down-regulated gene PPI network and core genes.

    2.4 核心基因的表達(dá)水平及生存分析

    我們進(jìn)一步通過多個(gè)數(shù)據(jù)庫對篩選出的核心基因的表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證,我們在GEPIA和UALCAN數(shù)據(jù)庫中檢測了核心基因在結(jié)直腸癌組織與相應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)水平,并在Kaplan-Meier plotter數(shù)據(jù)庫中檢測了其表達(dá)水平與患者生存期的關(guān)系。結(jié)果如圖4所示,最終我們篩選出在這兩個(gè)數(shù)據(jù)庫中表達(dá)水平與預(yù)后水平均有顯著性差異的SPP1和MT1E基因。SPP1基因在結(jié)腸癌及直腸癌組織中的表達(dá)水平均高于相應(yīng)的正常組織,并且隨著腫瘤進(jìn)展,其表達(dá)水平進(jìn)一步升高。SPP1基因在結(jié)直腸腺癌及黏液型腺癌中的表達(dá)水平均高于正常組織。生存曲線顯示SPP1的高表達(dá)與患者更短的生存期呈正相關(guān)。MT1E基因在結(jié)腸癌及直腸癌組織中的表達(dá)水平均低于相應(yīng)的正常組織,并且隨著腫瘤進(jìn)展,其表達(dá)水平進(jìn)一步降低。MT1E基因在結(jié)直腸腺癌及黏液型腺癌中的表達(dá)水平均低于正常組織。生存曲線顯示MT1E的低表達(dá)與患者更短的生存期呈正相關(guān)。因此,SPP1和MT1E基因可能成為評價(jià)CRC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。

    圖4 SPP1和MT1E的表達(dá)水平及生存分析(A)SPP1在結(jié)腸腫瘤(COAD)與直腸腫瘤(READ)中的表達(dá)水平;SPP1在COAD的不同分期中的表達(dá)水平;SPP1在結(jié)直腸腺癌及黏液型腺癌中的表達(dá)水平;SPP1表達(dá)水平與患者生存期的相關(guān)性分析。(B)MT1E在結(jié)腸腫瘤(COAD)與直腸腫瘤(READ)中的表達(dá)水平;MT1E在COAD的不同分期中的表達(dá)水平;MT1E在結(jié)直腸腺癌及黏液型腺癌中的表達(dá)水平;MT1E表達(dá)水平與患者生存期的相關(guān)性分析。Figure 4 The expression level and survival analysis of SPP1 and MT1E(A)The expression level of SPP1 in colon tumors(COAD)and rectal tumors(READ),the expression level of SPP1 indifferent stages of COAD;the expression level of SPP1 in colorectal adenocarcinoma and mucinous adenocarcinoma;SPP1 expression Analysis of the correlation between the level and the survival time of patients.(B)The expression levelof MT1E in colon tumor(COAD)and rectal tumor(READ);the expression level of MT1E in different stages of COAD,the expression level of MT1E in colorectal adenocarcinoma and mucinous adenocarcinoma;MT1E expressionAnalysis of the correlation between the level and the survival period of patients.

    2.5 藥物敏感性分析

    為了更好地了解核心基因的表達(dá)與藥物反應(yīng)的相關(guān)性,從而為臨床用藥提供指導(dǎo),我們進(jìn)一步對篩選出的核心基因進(jìn)行了藥物敏感性分析。由于CTRP數(shù)據(jù)庫中未查詢到MTIE基因的相關(guān)藥物,因此我們僅對SPP1進(jìn)行了藥物敏感性分析。首先,我們評估了823個(gè)腫瘤細(xì)胞系中SPP1的表達(dá)與來自CTRP的545種藥物的響應(yīng)數(shù)據(jù)之間的關(guān)系。在所有癌細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)31種藥物與SPP1表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05,相關(guān)系數(shù)R>0.2);有2種藥物與SPP1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05,相關(guān)系數(shù)R<-0.2)。圖5A中列舉了相關(guān)性最強(qiáng)的10個(gè)正相關(guān)的藥物及2個(gè)負(fù)相關(guān)藥物。SPP1表達(dá)越高,對應(yīng)的AUC值越小,藥物反應(yīng)越好。因此,我們認(rèn)為這31種藥物對SPP1低表達(dá)腫瘤可能具有較好的治療效果,而對高表達(dá)SPP1的腫瘤可能會(huì)表現(xiàn)出耐藥性反應(yīng)。為了使分析更加具體,我們將腫瘤分為10種腫瘤類型,對SPP1的表達(dá)與545種藥物的相關(guān)性進(jìn)行了分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥物反應(yīng)率因腫瘤類型而異(圖5B),在皮膚腫瘤細(xì)胞系中,有大約20%的藥物反應(yīng)與SPP1表達(dá)有關(guān);而在大腸腫瘤細(xì)胞系中,約10%的藥物其反應(yīng)與SPP1表達(dá)相關(guān)。

    圖5 SPP1的藥物敏感性分析(A)823種癌細(xì)胞株SPP1的表達(dá)與545種藥物的相關(guān)系數(shù)(x軸)和-log10(p-value)(y軸)火山圖。(B)10種不同腫瘤類型中相關(guān)系數(shù)R大于0.3或小于-0.3,且P值小于0.05的藥物所占比例。Figure 5 Drug sensitivity analysis of SPP1(A)The correlation coefficient(x-axis))and-log10(p-value)(y-axis)volcano plots of the expression of SPP1 in 823 cancer cell lines and 545 drugs.(B)The proportion of drugs with a correlation coefficient R greater than 0.3 or less than-0.3 and a P value less than 0.05 among the 10 different tumor types.

    在此基礎(chǔ)上,我們關(guān)注了與大腸腫瘤細(xì)胞系有相關(guān)性的藥物,并從中挑選出天然化合物(表3)。最終發(fā)現(xiàn)天然化合物葫蘆素I、姜黃素、雷公藤甲素、根皮素、異吳茱萸堿、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和一種從海綿中提取出的微管蛋白抑制劑與大腸腫瘤細(xì)胞系中SPP1的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)。我們進(jìn)一步在STITCH數(shù)據(jù)庫中對SPP1蛋白及以上天然化合物進(jìn)行互作預(yù)測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)葫蘆素I、姜黃素、雷公藤甲素、根皮素及EGCG與SPP1的表達(dá)存在一定的相互作用關(guān)系。該結(jié)果提示以上五種天然化合物可能對SPP1低表達(dá)的大腸腫瘤具有較好的治療作用,而對SPP1高表達(dá)的大腸腫瘤可能具有耐藥性,這為臨床上的個(gè)體化給藥治療提供了一定的指導(dǎo)。

    表3 與SPP1表達(dá)相關(guān)的天然化合物Table 3 Natural compounds related to SPP1 expression

    3 討論

    結(jié)直腸癌目前已成為世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡的主要原因,嚴(yán)重威脅了人類的生命健康。在臨床治療中,多數(shù)結(jié)直腸腫瘤患者初診時(shí)已發(fā)生轉(zhuǎn)移,而轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者預(yù)后差,生存率極低,其五年生存率僅為13%[3],而常用的化學(xué)藥物治療和放射治療的整體治療效果不容樂觀,因此迫切需要找到更為有效的治療靶點(diǎn)或臨床藥物。目前,大數(shù)據(jù)分析已成為一種統(tǒng)籌整合信息的分析方法,由于該分析基于大量原始數(shù)據(jù),并且能夠從數(shù)據(jù)中尋找普遍規(guī)律,使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可靠。本研究通過篩選基因芯片,尋找兩個(gè)芯片中共同的差異基因,并對差異基因進(jìn)行進(jìn)一步的分析,進(jìn)而探索結(jié)直腸癌潛在有效的生物標(biāo)志物,從而為結(jié)直腸癌的治療提供新的靶標(biāo)并為臨床用藥提供指導(dǎo)。

    圖6 SPP1-天然化合物的相關(guān)性分析Figure 6 Correlation analysis of SPP1-natural compounds

    本研究通過對22個(gè)共上調(diào)基因和74個(gè)共下調(diào)基因進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)了分泌磷蛋白1(SPP1)和MT1E基因在多個(gè)數(shù)據(jù)庫中均具有顯著性差異,且與患者的生存預(yù)后顯著相關(guān),因此,本研究結(jié)果預(yù)測SPP1和MT1E基因可能成為評價(jià)CRC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。SPP1作為一種細(xì)胞因子,可參與增強(qiáng)干擾素-γ和白細(xì)胞介素-12的產(chǎn)生,減少白細(xì)胞介素-10的產(chǎn)生,在產(chǎn)生I型免疫的過程中起重要作用。并且其編碼的蛋白質(zhì)能夠被分泌并以高親和力結(jié)合羥基磷灰石,從而作為一種主要的非膠原骨蛋白參與破骨細(xì)胞與礦化骨基質(zhì)的附著過程,這對細(xì)胞-基質(zhì)相互作用過程具有重要意義。有研究顯示SPP1與胃腺癌[15]及肝細(xì)胞癌[16]的治療敏感性顯著相關(guān)。SPP1可通過Wnt/β-catenin信號促進(jìn)結(jié)直腸腫瘤的進(jìn)展[17],并且SPP1可通過激活上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換促進(jìn)結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移[18]。這與我們的分析結(jié)果相一致。金屬硫蛋白1E(MT1E)是一種蛋白質(zhì)編碼基因,主要參與細(xì)胞新陳代謝、礦物質(zhì)吸收、銅穩(wěn)態(tài)及鋅穩(wěn)態(tài)等生物學(xué)過程。MT1E具有多種能夠結(jié)合各種重金屬的半胱氨酸殘基,可與蛋白質(zhì)、鋅離子及其他金屬離子結(jié)合。有研究顯示MT1E在腫瘤的形成、發(fā)展和耐藥性中起著關(guān)鍵作用,它可作為一種肝細(xì)胞腫瘤抑制因子[19],但是在肝癌后期表達(dá)明顯升高并促進(jìn)腫瘤發(fā)展[20]。低表達(dá)的MT1E是前列腺癌進(jìn)展的生物標(biāo)志物[21],而僅有一篇研究顯示MT1E可能參與到組蛋白去乙?;敢种苿┱T導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞生長停滯和凋亡的過程中[22]。SPP1是本研究中篩選出的結(jié)直腸腫瘤關(guān)鍵上調(diào)基因,GO分析中顯示在結(jié)直腸腫瘤中上調(diào)的生物學(xué)過程主要有膠原蛋白分解代謝的過程、細(xì)胞外基質(zhì)的分解,上調(diào)的信號通路主要有ECM-受體交互作用等。MT1E是本研究中篩選出的結(jié)直腸腫瘤關(guān)鍵下調(diào)基因,GO分析中顯示在結(jié)直腸腫瘤中下調(diào)的生物學(xué)過程主要有鋅離子的細(xì)胞反應(yīng),分子功能有鋅離子結(jié)合等生物學(xué)過程。以上關(guān)鍵蛋白的生物學(xué)功能與我們的GO與KEGG分析結(jié)果相一致。

    中醫(yī)學(xué)將結(jié)直腸癌歸屬于“積聚”“癥瘕”“臟毒”“腸風(fēng)”“腸覃”“腸癖”“鎖肛痔”等范疇,明代《外科大成》有“鎖肛痔,肛門內(nèi)外如竹節(jié)鎖緊,形如海蜇,里急后重,糞便細(xì)而帶扁,時(shí)流臭水……”的記載,與結(jié)直腸癌的臨床癥狀基本相符??梢姡Y(jié)直腸癌病位在腸,以脾腎虛弱為本,以痰瘀、濕熱為標(biāo),是一種本虛標(biāo)實(shí)的疾病[23]。藥物敏感性分析篩選出葫蘆素I、姜黃素、雷公藤甲素、根皮素及沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)與SPP1的表達(dá)存在一定的相關(guān)性。天然葫蘆素存在于多種十字花科、葫蘆科、玄參科等植物中,具有解毒清熱,利濕退黃等功效。臨床上主要用于濕熱毒盛所致的遷延性肝炎、慢性肝炎及原發(fā)性肝癌的輔助治療。葫蘆素I在祛痰、去濕熱、去水腫方面的功效與結(jié)直腸癌痰瘀、濕熱的本質(zhì)相合,已有研究表明葫蘆素家族的另一成員葫蘆素E能夠增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性[24],而葫蘆素I被報(bào)道能夠顯著抑制乳腺癌[25]和卵巢癌[26]細(xì)胞的凋亡。姜黃素是一種從姜黃根莖中提取得到的黃色色素,其抗氧化、抗炎、逆轉(zhuǎn)肝損傷、提高免疫力的作用已被廣泛報(bào)道[27]。高血壓、高血脂及高膽固醇已被認(rèn)為是增加結(jié)直腸癌發(fā)病率的危險(xiǎn)因素,而姜黃素的降血脂功效對結(jié)直腸癌的臨床治療將會(huì)具有積極作用[28]。同時(shí),姜黃素對腫瘤也具有顯著的抑制作用,研究報(bào)道姜黃素能夠顯著抑制結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展[29],逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸腫瘤的耐藥性[30],并且針對姜黃素的載藥也已開發(fā)了一些新型納米遞送系統(tǒng)[31],從而更好地發(fā)揮抑瘤作用。雷公藤甲素是從衛(wèi)矛科植物雷公藤的根、葉、花及果實(shí)中提取的一種環(huán)氧二萜內(nèi)酯化合物,是雷公藤的主要有效成分之一。藥理和臨床試驗(yàn)表明,雷公藤甲素具有顯著的免疫抑制、抗炎、抗生育及抗腫瘤等生物活性,其在結(jié)直腸腫瘤方面也被報(bào)道具有顯著的抑制作用[32-33]。還有研究表明雷公藤甲素能夠有效減輕小鼠的腸道炎癥[34],其對結(jié)腸“炎-癌”轉(zhuǎn)化方面的獨(dú)特功效對未來用于結(jié)直腸癌的臨床治療具有積極地指導(dǎo)作用。根皮素主要分布于蘋果、梨等多汁水果的果皮及根皮中,是一種新型天然皮膚美白劑,研究顯示根皮素能夠與阿托伐他汀或釕協(xié)同發(fā)揮抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞生長的作用[35-36]。EGCG是茶多酚中的有效活性成分,目前的研究主要顯示EGCG可以用來保護(hù)正常細(xì)胞和組織免受氧化損傷,而口服EGCG被報(bào)道可加重AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)直腸腫瘤的生成[37-38]。本研究篩選出的以上五種天然化合物均與SPP1表達(dá)相關(guān)的結(jié)直腸腫瘤呈正相關(guān)性,這可能對未來結(jié)直腸癌的臨床用藥及個(gè)體化給藥方案提供一定的參考價(jià)值。在今后的研究中,應(yīng)加強(qiáng)對中醫(yī)藥有效成分的深入探索,并明確中醫(yī)藥的作用機(jī)理,以更好地將中醫(yī)藥應(yīng)用于結(jié)直腸癌的臨床治療中。

    綜上所述,SPP1和MT1E基因可能成為評價(jià)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物,并且葫蘆素I、姜黃素、雷公藤甲素、根皮素及EGCG對SPP1相關(guān)的結(jié)直腸腫瘤具有一定的藥物反應(yīng)相關(guān)性。因此,我們的研究可能為結(jié)直腸癌提供新的生物標(biāo)志物并對其臨床用藥提供參考。

    猜你喜歡
    差異基因直腸直腸癌
    ICR鼠肝和腎毒性損傷生物標(biāo)志物的篩選
    18F-FDG PET/CT在結(jié)直腸偶發(fā)局灶性18F-FDG攝取增高灶診斷中的價(jià)值
    基于RNA 測序研究人參二醇對大鼠心血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)的影響 (正文見第26 頁)
    腹腔鏡下直腸癌前側(cè)切除術(shù)治療直腸癌的效果觀察
    直腸癌術(shù)前放療的研究進(jìn)展
    COXⅠ和COX Ⅲ在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義
    GRP及GRPR在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義
    彩超引導(dǎo)下經(jīng)直腸行盆腔占位穿刺活檢1例
    SSH技術(shù)在絲狀真菌功能基因篩選中的應(yīng)用
    PPH聯(lián)合消痔靈注射治療直腸黏膜內(nèi)脫垂46例
    国产精品98久久久久久宅男小说| 国产高清有码在线观看视频| 国产麻豆成人av免费视频| 午夜福利成人在线免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜两性在线视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美在线一区亚洲| 亚洲av不卡在线观看| 午夜久久久久精精品| 国产熟女xx| 悠悠久久av| 亚洲av美国av| 久久久色成人| 国产av麻豆久久久久久久| 国产午夜福利久久久久久| 男女下面进入的视频免费午夜| 我要搜黄色片| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美高清成人免费视频www| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99精品欧美一区二区三区四区| 成人无遮挡网站| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲色图av天堂| www日本黄色视频网| 国产伦人伦偷精品视频| av片东京热男人的天堂| 久久精品国产综合久久久| 精品电影一区二区在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久午夜亚洲精品久久| 国产探花在线观看一区二区| 91久久精品电影网| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 深夜精品福利| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲av二区三区四区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产激情欧美一区二区| 精品电影一区二区在线| 日韩欧美免费精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 黄色日韩在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 免费观看的影片在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 丁香六月欧美| 日韩免费av在线播放| 久久香蕉国产精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 在线播放无遮挡| 99国产极品粉嫩在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 两人在一起打扑克的视频| 欧美日本视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产成人福利小说| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲国产欧美网| 久久久久亚洲av毛片大全| 丰满乱子伦码专区| 桃红色精品国产亚洲av| 国产伦精品一区二区三区四那| 两个人的视频大全免费| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 三级毛片av免费| 一级毛片高清免费大全| 亚洲国产精品999在线| 日本免费a在线| 亚洲精品456在线播放app | 美女被艹到高潮喷水动态| 久久久久久人人人人人| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久久久久九九精品二区国产| 九色成人免费人妻av| 精品欧美国产一区二区三| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精品一区二区三区人妻视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 国产成人欧美在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 在线天堂最新版资源| 在线免费观看的www视频| 禁无遮挡网站| 在线播放无遮挡| 丁香欧美五月| 99riav亚洲国产免费| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久久久国产a免费观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产视频一区二区在线看| 国产精品久久久久久精品电影| 午夜老司机福利剧场| 最近最新中文字幕大全电影3| 身体一侧抽搐| 香蕉丝袜av| 性欧美人与动物交配| 日本熟妇午夜| 在线免费观看的www视频| 精品一区二区三区视频在线 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 国产69精品久久久久777片| 国产探花极品一区二区| 美女黄网站色视频| 免费在线观看成人毛片| 内射极品少妇av片p| 国产成人系列免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 免费人成在线观看视频色| 男人舔奶头视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 一本精品99久久精品77| av天堂在线播放| 18禁美女被吸乳视频| 99久国产av精品| av天堂中文字幕网| 色综合站精品国产| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品国内亚洲2022精品成人| 免费看a级黄色片| 69人妻影院| 国产高清videossex| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 有码 亚洲区| 两人在一起打扑克的视频| 欧美高清成人免费视频www| 国产高潮美女av| 宅男免费午夜| 亚洲七黄色美女视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美极品一区二区三区四区| a级一级毛片免费在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美av亚洲av综合av国产av| 床上黄色一级片| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲精品456在线播放app | 夜夜爽天天搞| 免费看日本二区| 亚洲午夜理论影院| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲av美国av| 亚洲精品456在线播放app | 白带黄色成豆腐渣| 老汉色av国产亚洲站长工具| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美区成人在线视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 色综合欧美亚洲国产小说| 一级黄色大片毛片| 亚洲av电影在线进入| 色av中文字幕| 免费av不卡在线播放| 亚洲精品成人久久久久久| av在线天堂中文字幕| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产毛片a区久久久久| 日本色播在线视频| av在线天堂中文字幕| 成年人午夜在线观看视频 | 久久久久国产网址| 亚洲精品视频女| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲在久久综合| 日韩欧美精品v在线| 国产精品久久久久久av不卡| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日日撸夜夜添| 亚洲精品456在线播放app| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美性感艳星| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产伦精品一区二区三区视频9| xxx大片免费视频| 丰满少妇做爰视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产探花极品一区二区| 亚洲欧美精品专区久久| 成年免费大片在线观看| 国产亚洲精品av在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 水蜜桃什么品种好| 联通29元200g的流量卡| 欧美三级亚洲精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 一级毛片我不卡| 午夜久久久久精精品| 国产高清不卡午夜福利| 精品午夜福利在线看| 天堂俺去俺来也www色官网 | 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 成人美女网站在线观看视频| 最新中文字幕久久久久| 国产视频内射| 国产精品一区二区性色av| 69人妻影院| 中文字幕久久专区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 成年人午夜在线观看视频 | 乱人视频在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| .国产精品久久| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲av电影不卡..在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 高清欧美精品videossex| av在线亚洲专区| 七月丁香在线播放| 99热这里只有精品一区| 日韩一本色道免费dvd| 久久韩国三级中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 精品久久国产蜜桃| 日本三级黄在线观看| 久久精品人妻少妇| 在线 av 中文字幕| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久97久久精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 精品久久久久久久久久久久久| 免费看a级黄色片| 禁无遮挡网站| 大陆偷拍与自拍| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 老师上课跳d突然被开到最大视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 最近手机中文字幕大全| 国产色婷婷99| 身体一侧抽搐| 免费电影在线观看免费观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 免费av观看视频| 亚洲精品视频女| 一级二级三级毛片免费看| 又爽又黄无遮挡网站| 搞女人的毛片| 黄片wwwwww| 大片免费播放器 马上看| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美最新免费一区二区三区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品一区二区三卡| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费看日本二区| 亚洲国产高清在线一区二区三| or卡值多少钱| 99久国产av精品| 色综合色国产| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 观看免费一级毛片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美bdsm另类| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 国产精品一区www在线观看| 午夜视频国产福利| 久久精品人妻少妇| 一个人免费在线观看电影| 亚洲精品一区蜜桃| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲最大成人av| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品无大码| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲精品456在线播放app| 看十八女毛片水多多多| 97超视频在线观看视频| 午夜福利在线观看吧| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品视频女| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲图色成人| 天堂中文最新版在线下载 | 99久久精品热视频| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 最后的刺客免费高清国语| 久久久久国产网址| 偷拍熟女少妇极品色| 国产在线男女| 男女国产视频网站| 赤兔流量卡办理| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 99久久人妻综合| 少妇人妻一区二区三区视频| 水蜜桃什么品种好| 久久久久久九九精品二区国产| 禁无遮挡网站| 欧美xxⅹ黑人| 老司机影院成人| 精品不卡国产一区二区三区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲最大成人中文| 久久99热这里只频精品6学生| 中文字幕av在线有码专区| www.色视频.com| 18禁动态无遮挡网站| 街头女战士在线观看网站| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日韩欧美 国产精品| 亚洲综合精品二区| 全区人妻精品视频| 国产在视频线精品| 欧美三级亚洲精品| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品久久久久久久电影| 一区二区三区免费毛片| 最近中文字幕2019免费版| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产一区二区在线观看日韩| 欧美97在线视频| 日本wwww免费看| 亚洲av不卡在线观看| 中文欧美无线码| a级毛色黄片| 神马国产精品三级电影在线观看| 午夜激情欧美在线| 久久久午夜欧美精品| 51国产日韩欧美| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 一区二区三区高清视频在线| 国产人妻一区二区三区在| 永久网站在线| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久网色| 国产乱人视频| 午夜激情福利司机影院| 亚洲精品,欧美精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 日日啪夜夜撸| 超碰97精品在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产成人aa在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 久久人人爽人人片av| 国产免费一级a男人的天堂| 大香蕉97超碰在线| 中文天堂在线官网| 久久人人爽人人片av| 婷婷色麻豆天堂久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久久性生活片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 人妻少妇偷人精品九色| 日日啪夜夜撸| 久热久热在线精品观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 日日啪夜夜爽| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费黄频网站在线观看国产| 一级片'在线观看视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 中文在线观看免费www的网站| 色综合亚洲欧美另类图片| av线在线观看网站| 七月丁香在线播放| 欧美97在线视频| 床上黄色一级片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 深爱激情五月婷婷| 国产成人freesex在线| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人freesex在线| 久久6这里有精品| 看十八女毛片水多多多| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 色综合色国产| 插阴视频在线观看视频| 亚洲av日韩在线播放| 成人av在线播放网站| av网站免费在线观看视频 | 大话2 男鬼变身卡| 51国产日韩欧美| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产乱人视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 日本色播在线视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 我的女老师完整版在线观看| 免费人成在线观看视频色| 男女国产视频网站| 不卡视频在线观看欧美| 男女视频在线观看网站免费| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品一区www在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲成人一二三区av| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品人妻久久久影院| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品三级大全| 国产午夜精品论理片| 一区二区三区四区激情视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 五月天丁香电影| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲综合色惰| 可以在线观看毛片的网站| 精品一区在线观看国产| 十八禁网站网址无遮挡 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产伦理片在线播放av一区| 午夜福利视频精品| 免费观看av网站的网址| 国产成人aa在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费看日本二区| 少妇丰满av| 最近最新中文字幕大全电影3| 777米奇影视久久| 国产午夜精品一二区理论片| 天美传媒精品一区二区| 欧美不卡视频在线免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 中国国产av一级| 国产午夜精品一二区理论片| 国国产精品蜜臀av免费| 久久这里有精品视频免费| av一本久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品久久视频播放| ponron亚洲| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 黄片wwwwww| 免费黄频网站在线观看国产| 日韩强制内射视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲精品国产成人久久av| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产91av在线免费观看| 五月玫瑰六月丁香| 色5月婷婷丁香| 久久6这里有精品| 一个人看的www免费观看视频| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美激情国产日韩精品一区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 黄色欧美视频在线观看| 久久久久久伊人网av| 亚洲美女搞黄在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产一区二区三区av在线| 天堂俺去俺来也www色官网 | 好男人视频免费观看在线| 成人毛片60女人毛片免费| 久久精品久久久久久久性| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费观看无遮挡的男女| 1000部很黄的大片| 91精品国产九色| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产成人一区二区在线| av国产久精品久网站免费入址| 日韩欧美 国产精品| 婷婷色av中文字幕| 亚州av有码| 亚洲精品一二三| 91精品伊人久久大香线蕉| 1000部很黄的大片| 久热久热在线精品观看| 五月玫瑰六月丁香| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 最近手机中文字幕大全| 人人妻人人澡欧美一区二区| 高清在线视频一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 97精品久久久久久久久久精品| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美高清性xxxxhd video| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| eeuss影院久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久人人爽人人爽人人片va| 日本熟妇午夜| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 真实男女啪啪啪动态图| 青青草视频在线视频观看| 全区人妻精品视频| 欧美丝袜亚洲另类| 精品久久久久久电影网| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲高清免费不卡视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成人a∨麻豆精品| 22中文网久久字幕| 内地一区二区视频在线| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲色图av天堂| 亚洲欧美一区二区三区国产| 草草在线视频免费看| 成人一区二区视频在线观看| 国产免费视频播放在线视频 | 晚上一个人看的免费电影| 久久久久久久久久黄片| 一个人看视频在线观看www免费| 最近手机中文字幕大全| 亚洲欧美日韩无卡精品| 黄色欧美视频在线观看| 欧美性感艳星| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产一区二区三区综合在线观看 | 午夜福利视频1000在线观看| 日本与韩国留学比较| 精品久久久久久久久久久久久| 搡老乐熟女国产| 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品一二三区在线看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 99久久九九国产精品国产免费| 午夜爱爱视频在线播放| 国产精品av视频在线免费观看| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲国产最新在线播放| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 国产黄色小视频在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 久久久久久久国产电影| 久久精品综合一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产精品一二三区在线看| 日韩三级伦理在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 国产片特级美女逼逼视频| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲人成网站在线观看播放| 插阴视频在线观看视频| 91av网一区二区| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品久久久久久av不卡| 蜜臀久久99精品久久宅男| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产黄片视频在线免费观看| av网站免费在线观看视频 | av免费观看日本| 欧美潮喷喷水| 亚洲国产最新在线播放| 国产真实伦视频高清在线观看| 联通29元200g的流量卡| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 免费看a级黄色片| 欧美一级a爱片免费观看看| 丝袜美腿在线中文| 2022亚洲国产成人精品| 丝袜喷水一区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 男女边摸边吃奶| 丝袜喷水一区| 久久6这里有精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久97久久精品| 国产黄色免费在线视频| 国产一区有黄有色的免费视频 | 亚洲,欧美,日韩| 成人av在线播放网站| 久久久久久久久大av| 国产成人freesex在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日韩大片免费观看网站| 免费看光身美女| 欧美xxxx性猛交bbbb| 色吧在线观看| 少妇高潮的动态图| 青春草国产在线视频| 天堂√8在线中文| 成人亚洲欧美一区二区av| 嘟嘟电影网在线观看| 男女国产视频网站| 亚洲欧美精品自产自拍| 日本三级黄在线观看| 视频中文字幕在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美成人午夜免费资源|