基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)消巖湯中夏枯草與白花蛇舌草治療非小細(xì)胞肺癌作用機(jī)制的研究

魏傳宇， 于曉宇， 申倩， 李俊辰， 肖賢， 賈英杰

1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院、國家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300112；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617

肺癌作為臨床常見的惡性腫瘤，其全球發(fā)病率一直居于首位，死亡率同樣位于前列[1]。非小細(xì)胞肺癌約占所有肺癌的80%，約75%的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期，五年生存率很低。非小細(xì)胞型肺癌包括鱗狀細(xì)胞癌（鱗癌）、腺癌、大細(xì)胞癌，與小細(xì)胞癌相比其癌細(xì)胞生長分裂較慢，擴(kuò)散轉(zhuǎn)移相對較晚。中醫(yī)稱肺癌為“肺積”，根據(jù)辨證將其分為氣滯血瘀型、痰熱阻肺型、肺陰虛型、氣血兩虛型。

消巖湯系天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科賈英杰教授治療惡性腫瘤之經(jīng)驗(yàn)方，基于腫瘤病機(jī)“正氣內(nèi)虛，毒瘀并存”，以“扶正固本，解毒祛瘀”為治法，結(jié)合多年臨證經(jīng)驗(yàn)總結(jié)擬成“消巖湯”[2]。該方由夏枯草、生牡蠣、白花蛇舌草、黃芪、太子參、姜黃、郁金7味中藥組成，經(jīng)過多例非小細(xì)胞肺癌患者的臨床治療，效果較滿意。

中醫(yī)藥具有整體觀、辨證論治、方劑干預(yù)等鮮明特色，但中醫(yī)藥獨(dú)特的理論體系與哲學(xué)思想很難被各國醫(yī)患者理解與接受。因其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制不明確、缺乏安全性評價(jià)系統(tǒng)等，使其從整體到分子水平都很難進(jìn)行全面系統(tǒng)研究，極大阻礙中醫(yī)藥現(xiàn)代化與國際化的發(fā)展進(jìn)程。英國藥理學(xué)家HOPKINS[3]于2007年提出“網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)”（network pharmacology，NP）的概念，定義其為一門運(yùn)用生物分子網(wǎng)絡(luò)方法分析藥物與疾病和靶點(diǎn)之間“多成分、多靶點(diǎn)、多途徑”協(xié)同作用關(guān)系的藥理學(xué)分支學(xué)科。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)系統(tǒng)綜合地研究藥物對疾病網(wǎng)絡(luò)的干預(yù)和影響，這一特點(diǎn)與中醫(yī)藥對復(fù)雜疾病的診治原則一致。借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)等現(xiàn)代科學(xué)手段，中醫(yī)藥將加快推進(jìn)現(xiàn)代化進(jìn)程[4]。

“中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)”這一新領(lǐng)域的研究旨在從系統(tǒng)層次和分子水平揭示中藥方劑的奧秘，促進(jìn)中藥研究從當(dāng)前的“單一靶標(biāo)，單一藥物”模式轉(zhuǎn)向“網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)，多成分藥物”的新模式，近年來，中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的一系列方法得以創(chuàng)建，包括基于網(wǎng)絡(luò)的疾病基因預(yù)測、中藥成分的靶標(biāo)譜和藥理活性預(yù)測、藥物一基因一疾病的共模塊分析、中藥方劑多成分協(xié)同作用的大規(guī)模篩選、中藥方劑的配伍規(guī)律和網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機(jī)理分析等[5]。因此，利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對中藥復(fù)方治療疾病的機(jī)制進(jìn)行研究，能夠明確藥物的活性成分，并將藥物的作用機(jī)制深入到分子生物學(xué)層面[6]。

基于賈英杰早期對于消巖湯劑拆方配伍對肺腺癌A549細(xì)胞體外生長抑制作用研究并根據(jù)功效將全方拆分為3組：清熱解毒組（夏枯草、生牡蠣、白花蛇舌草）；益氣扶正組（黃芪、太子參）；活血祛瘀組（姜黃、郁金）。研究證實(shí)消巖湯劑及其拆方組均對人肺腺癌A549細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制作用，具有扶正抑瘤的功效。消巖湯全方組當(dāng)濃度達(dá)到50 g/L時(shí)達(dá)到最大抑制率85.60%，其中清熱解毒組中藥為全方體外抑瘤作用的最重要組分[2]。因此，我們認(rèn)為消巖湯中清熱解毒組為該方核心組分。

故本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討消巖湯中抑瘤作用最重要的組分，清熱解毒組中的2味中草藥（夏枯草、白花蛇舌草）對非小細(xì)胞肺癌的多成分、多靶點(diǎn)治療，旨在為揭示該2味中草藥在消巖湯中的作用機(jī)制的科學(xué)內(nèi)涵提供參考。

1 方法

1.1 夏枯草和白花蛇舌草化合物及作用靶點(diǎn)的篩選

釆用TCMSP（http://lsp.nwsuaf.edu.cn/tcmsp.php），以夏枯草、白花蛇舌草為關(guān)鍵詞，OB≥30%且DL≥0.18為標(biāo)準(zhǔn)，收集并篩選出其中全部化合物及其作用靶點(diǎn)。

1.2 疾病靶點(diǎn)的確定

利用OMIM（https://omim.org/）、Genecards（https://www.genecards.org/）、 PharmGkb（https://www.pharmgkb.org/）以及TTD（http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/）疾病數(shù)據(jù)庫，以非小細(xì)胞肺癌為關(guān)鍵詞，高關(guān)聯(lián)度為標(biāo)準(zhǔn)，得到疾病的高相關(guān)性靶點(diǎn)。

1.3 疾病-化合物共同靶點(diǎn)的篩選

利用VennPainter軟件，將藥物有效成分的作用靶點(diǎn)與篩選出的疾病靶點(diǎn)取交集，得到兩者共同的作用靶點(diǎn)。

1.4 藥物-共同靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將藥物中的化合物、非小細(xì)胞肺癌以及兩者的共同靶點(diǎn)蛋白上傳至Cytoscape軟件（http://www.cytoscape.org/）生成體現(xiàn)藥物與共同靶點(diǎn)以及疾病之間相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖，以探究消巖湯中夏枯草、白花蛇舌草的藥理學(xué)作用機(jī)制。

1.5 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

利用String（https://string-db.org/）蛋白互作數(shù)據(jù)庫及Cytoscape軟件挖掘共同靶點(diǎn)蛋白之間的相互作用，并運(yùn)用R語言對其計(jì)數(shù)。

1.6 GO富集

使用Cytoscape軟件對共同靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行GO功能富集分析，以了解共同靶點(diǎn)的功能，通過Omicshare軟件（http://www.omicshare.com/tools/index，php/）對結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

1.7 KEGG富集

應(yīng)用 David（https://david.ncifcrf.gov/）數(shù)據(jù)庫及Cytoscape軟件對共同靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析，并做分析注釋，得到消巖湯中夏枯草和白花蛇舌草治療非小細(xì)胞肺癌的信號通路，通過Omicshare軟件對結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 藥物化合物及作用靶點(diǎn)的篩選

利用TCMSP分別查找夏枯草和白花蛇舌草的化合物及作用靶點(diǎn)，經(jīng)過整理，藥物活性化合物共有15種，其中夏枯草11種、白花蛇舌草7種（夏枯草、白花蛇舌草都含有β-谷甾醇、豆甾醇和槲皮素），見表1。查找消巖湯中夏枯草與白花蛇舌草化合物的靶點(diǎn)，通過篩選，共有160個(gè)化合物作用靶點(diǎn)。

表1 方中二味藥材的15個(gè)候選化合物的基本信息Table 1 Essential information of15 alternative chemical compound in herbs

2.2 疾病靶點(diǎn)及藥物-疾病共同靶點(diǎn)的確定

利用OMIM、Genecard、PharmGkb以及TTD疾病數(shù)據(jù)庫，篩選出2513個(gè)高相關(guān)性疾病靶點(diǎn)。結(jié)合160個(gè)化合物的靶點(diǎn)，利用VennPainter軟件，分析得出消巖湯中夏枯草和白花蛇舌草與非小細(xì)胞肺癌的共同靶點(diǎn)有112個(gè)，靶點(diǎn)交集率達(dá)：70.0%。

2.3 藥物-共同靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析

利用Cytoscape軟件構(gòu)建藥物-共同靶點(diǎn)-疾病的網(wǎng)絡(luò)圖，見圖1。圖中一共有77個(gè)節(jié)點(diǎn)，包括1個(gè)非小細(xì)胞肺癌節(jié)點(diǎn)（粉色）、2個(gè)中藥節(jié)點(diǎn)（綠色）、13個(gè)化合物節(jié)點(diǎn)（黃色）、112個(gè)共同靶點(diǎn)的節(jié)點(diǎn)（藍(lán)色）。消巖湯中夏枯草和白花蛇舌草所有化合物中有2個(gè)化合物與藥物-疾病共同靶點(diǎn)沒有聯(lián)系，未參與網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建。在13種化合物中，包括夏枯草的11種化合物、白花蛇蛇草的5種化合物，其中夏枯草和白花蛇舌草共同包含的化合物是豆甾醇、槲皮素和β-谷甾醇，現(xiàn)代藥理學(xué)證明，豆甾醇在體外能顯著降低腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的轉(zhuǎn)錄水平，在體內(nèi)能破壞腫瘤血管的生成，抑制腫瘤的生長[7]，槲皮素通過減少基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMP）的分泌，阻斷STAT3信號通路，從而抑制癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）、侵襲和轉(zhuǎn)移[8]，β-谷甾醇能滲入細(xì)胞膜中并改變膜流動性，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡且提高凋亡速率[9]。也進(jìn)一步說明這3種化合物在消巖湯藥物組成中占到重要地位。調(diào)控的靶點(diǎn)數(shù)目排前5位的化合物是槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、木犀草素、山奈酚，說明這些化合物在消巖湯治療非小細(xì)胞肺癌中起主要作用?；衔镎{(diào)控的靶點(diǎn)數(shù)目 前 5 位 是 PTGS1、 NCOA2、 BCL2、 PPARG、CASP9，是消巖湯治療非小細(xì)胞肺癌的主要靶點(diǎn)。

圖1 藥物-共同靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)Figure 1 Herb-collective Target-disease

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析

利用String蛋白互作數(shù)據(jù)庫和Cytoscape軟件分析共同靶點(diǎn)蛋白之間的相互關(guān)系，見圖2。PPI計(jì)數(shù)排名前3位的靶點(diǎn)是AKT1、IL-6、VEGFA，見圖3，相互作用關(guān)系越多，說明該靶點(diǎn)在消巖湯治療非小細(xì)胞肺癌中起更為重要的作用。

圖2 PPI網(wǎng)絡(luò)Figure 2 Network of PPI

圖3 PPI計(jì)數(shù)Figure 3 Count of PPI

2.5 GO功能富集分析

對消巖湯中夏枯草和白花蛇舌草的化合物和非小細(xì)胞肺癌的共同靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析，以錯誤發(fā)現(xiàn)率（false discovery rate，F(xiàn)DR）＜0.05為標(biāo)準(zhǔn)，確認(rèn)了1 466條結(jié)果，利用Omicshare軟件對結(jié)果進(jìn)行可視化處理，展示前20個(gè)共同的基因功能，見圖4。排名前5位的分別是對氧化應(yīng)激的反應(yīng)、對類固醇激素的反應(yīng)、對細(xì)菌起源的分子的反應(yīng)、對脂多糖的反應(yīng)、營養(yǎng)水平的反應(yīng)。

圖4 GO功能富集Figure 4 GO enrichment analysis

2.6 KEGG通路富集分析

對消巖湯中夏枯草、白花蛇舌草的化合物與非小細(xì)胞肺癌的共同靶點(diǎn)利用DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行KEGG通路富集分析，以P值＜0.01，F(xiàn)DR＜0.05進(jìn)行篩選，并將結(jié)果利用Omicshare軟件可視化，見圖5。此外，對KEGG結(jié)果進(jìn)行預(yù)讀后發(fā)現(xiàn)，與非小細(xì)胞肺癌密切相關(guān)的通路有糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號通路、IL-17信號通路、TNF信號通路，運(yùn)用R語言軟件加載Bioconductor包對以上通路進(jìn)行靶點(diǎn)-通路機(jī)制分析，以紅色標(biāo)記代表夏枯草、白花蛇舌草可能干預(yù)的潛在靶點(diǎn)，結(jié)果見圖6～圖8。

圖5 KEGG通路富集分析Figure 5 KEGG signal pathway enrichment

圖6 TNF信號通路Figure 6 TNF signal pathway

圖7 糖尿病并發(fā)癥中的晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）信號通路Figure 7 AGE-RAGE signal pathway in diabetic complications

圖8 IL-17信號通路Figure 8 IL-17 signal pathway

3 討論

千百年的臨床實(shí)踐證明中藥的療效是相對有效且穩(wěn)定的，但中藥的藥效機(jī)制研究一直是個(gè)難點(diǎn)，這與中醫(yī)藥的整體觀以及辨證論治的靈活性有關(guān)[10]。中醫(yī)藥具有復(fù)雜性科學(xué)的理念，具有非線性、動態(tài)發(fā)展、整體大于部分之和、整體并不等于宏觀等特點(diǎn)，這對我們研究中藥的藥效機(jī)制造成了困難[11]。

中藥有多靶點(diǎn)、多途徑調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，雖然提高了臨床療效，但也給實(shí)驗(yàn)研究帶來了很多困難。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是一門運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)分析藥物與疾病靶點(diǎn)之間“多成分、多靶點(diǎn)、多途徑”協(xié)同作用關(guān)系的藥理學(xué)分支學(xué)科[5]。利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，可以彌補(bǔ)以往中藥研究單一靶點(diǎn)的不足，提高實(shí)驗(yàn)研究的成功率。實(shí)際上，臨床上的多種慢性病如腫瘤、心腦血管疾病、糖尿病等都是多基因、多因素作用的疾病，僅根據(jù)單一作用靶點(diǎn)難以達(dá)到良好治療的效果。中醫(yī)古籍并沒有肺癌的病名，但類似的記載多見于“肺積”“息賁”“積聚”等的論述，《難經(jīng)》記載“肺之積，名曰息賁，在右肋下，覆大如杯，久不已，令人灑淅寒熱，喘咳，發(fā)肺壅”，一般認(rèn)為，肺癌多由于久病傷正，年老體衰、感受六淫邪毒、飲食損傷、情志怫郁、宿有舊疾等因素，導(dǎo)致臟腑功能失調(diào)，氣血津液運(yùn)行失常，產(chǎn)生氣質(zhì)、血瘀、濕濁、痰凝、熱毒等病理變化，蘊(yùn)結(jié)于肺臟，邪毒積聚而為癌病[12]。

該方以黃芪、太子參共為君藥，滋陰益氣、扶正抗癌；以夏枯草、生牡蠣、白花蛇舌草配合使用，清熱解毒、軟堅(jiān)散結(jié)，共為臣藥；佐以姜黃、郁金共奏行氣散結(jié)、活血祛瘀之功；全方具有解毒祛瘀，扶正抗癌之功效，諸藥合用，共奏益氣滋陰、活血祛瘀、清熱解毒、扶正驅(qū)邪之功[13-16]。本文旨在利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，預(yù)測消巖湯中夏枯草與白花蛇舌草治療非小細(xì)胞肺癌的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)研究提供參考。

本研究以藥物-共同靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)篩選共得到2味中草藥作用于非小細(xì)胞肺癌的13個(gè)核心成分化合物，對應(yīng)112個(gè)核心調(diào)控靶點(diǎn)。其中最關(guān)鍵成分化合物包括槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、木樨草素、山柰酚。其中夏枯草和白花蛇舌草共同包含的化合物是槲皮素、β-谷甾醇和豆甾醇，且調(diào)控的疾病靶點(diǎn)最多。槲皮素是調(diào)控靶點(diǎn)最多的化合物。研究者發(fā)現(xiàn)，槲皮素可顯著降低STAT3和p-STAT3的表達(dá)，槲皮素可能通過抑制STAT3信號通路，進(jìn)而抑制肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力[17]。STAT3是人類惡性腫瘤中非常常見且極易被激活的STAT家族成員中十分重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，主要介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞外信號向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，在腫瘤發(fā)生和惡變中有重要的作用，STAT3是公認(rèn)的癌基因，也是JAK/STAT信號通路中一種關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)錄因子，是多種致癌信號通路的匯聚點(diǎn)，已成為潛在的腫瘤治療靶點(diǎn)[18]。而β-谷甾醇不僅能促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯，亦能誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡，即細(xì)胞凋亡（Apoptosis，APO），它是多細(xì)胞生物體維持組織完整性和功能，以及消除受損或不需要細(xì)胞的一個(gè)關(guān)鍵作用機(jī)制[19]。研究發(fā)現(xiàn)，β-谷甾醇處理Hela細(xì)胞使癌細(xì)胞生長受到抑制，是藥物干預(yù)microRNA的表達(dá)，從而影響SKT4/MSTl通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[20]。癌細(xì)胞凋亡作為一種潛在的治療靶點(diǎn)近年來受到關(guān)注，癌細(xì)胞逃避細(xì)胞凋亡的過程中，細(xì)胞增殖率增加，最終導(dǎo)致腫瘤形成，凋亡失調(diào)與腫瘤的

發(fā)生密切相關(guān)，在調(diào)亡機(jī)制上50%的腫瘤細(xì)胞存在缺陷，細(xì)胞凋亡在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中主要起著負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，可以阻礙腫瘤細(xì)胞的迅速生長，豆甾醇作為一種天然活性物質(zhì)，具有營養(yǎng)價(jià)值高、生理活性強(qiáng)等特點(diǎn)，它的主要生理功能有抗腫瘤功效、降低人體血脂濃度、防治心血管疾病[21]。豆甾醇以及其11個(gè)衍生物都表現(xiàn)出一定的抗腫瘤特異性，即它們對這些腫瘤細(xì)胞的抑制效果不是由其細(xì)胞毒性所致的[22]。

藥物-共同靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)顯示，化合物調(diào)控的靶點(diǎn)數(shù)目前5位是PTGS1、BCL2、NCOA2、PPARG、CASP9，是消巖湯治療非小細(xì)胞肺癌的主要靶點(diǎn)。

PTGS1是被藥物調(diào)控最多的作用靶點(diǎn)，BCL2次之。PTGS1又叫作環(huán)氧合酶（Cyclooxygenase，COX）-1，PTGS1存在于許多疾病的病理過程中，如炎癥、血栓、內(nèi)皮功能紊亂、動脈粥樣硬化、癌癥等[23]。因此，抑制PTGS1可以在一定程度上抑制癌癥患者疾病進(jìn)展中的炎性表現(xiàn)。B細(xì)胞淋巴瘤/白血?。˙-cell lymphoma，Bcl）-2基因是一種癌基因，它具有明顯抑制細(xì)胞凋亡的作用。BCL2在肺癌組織中過度表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞異常增殖[24]。

利用共同靶點(diǎn)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，分析得出消巖湯中夏枯草和白花蛇舌草治療非小細(xì)胞肺癌的關(guān)鍵靶點(diǎn)包括AKT1、IL-6、VEGFA、CASP3、EGFR等。AKT1作為一種癌基因，在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)上調(diào)，研究發(fā)現(xiàn)AKT1蛋白的表達(dá)與肺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期相關(guān)，其表達(dá)越高提示肺癌分化程度越低、惡性程度越高、預(yù)后越差，提示AKT1在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生過程中起促癌作用[25]。

對共同靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，進(jìn)一步明確共同靶點(diǎn)在基因功能和信號通路中的作用。GO功能富集分析顯示共同靶點(diǎn)的基因功能主要集中在氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)通路，為明確具體的信號通路，在KEGG信號通路分析中發(fā)現(xiàn)，共同靶點(diǎn)的作用通路主要集中在TNF、AGE-RAGE、HIF-1信號通路。

腫瘤壞死因子（TNF、cachectin、TNF-a）是一種中樞促炎細(xì)胞因子，參與多種炎癥狀態(tài)，包括自身免疫。TNF可影響免疫監(jiān)視的多種效應(yīng)因子，并表現(xiàn)出增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（Natural killer cell，NK）和細(xì)胞毒性T淋細(xì)胞（Cytotoxic T lymphocyte，CTL）TNF還可以直接影響腫瘤，驅(qū)動細(xì)胞對凋亡/壞死或存活、炎癥和生長促進(jìn)的反應(yīng)[26]。TNFR1和TNFR2與多種細(xì)胞內(nèi)信號通路相連，TNFR1可以通過激活激酶信號來誘導(dǎo)炎癥、生存和增殖相關(guān)基因的表達(dá)，最終激活核因子NF-kB[27]。

晚期糖基化終產(chǎn)物（Advanced glycation end products，AGEs）是蛋白質(zhì)、脂類和核苷酸的異質(zhì)糖基化產(chǎn)物，AGEs的主要受體，稱為晚期糖基化終產(chǎn)物受體（Receptor for advanced glycation end products，RAGE），是免疫球蛋白超家族的多配體跨膜受體，有研究表明，RAGE在各種類型的癌癥如胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和淋巴瘤內(nèi)過表達(dá)[28]。AGE-RAGE信號在肺組織中激活NF-κB[29]。RAGE在正常肺組織中高度表達(dá)，主要集中在I型肺泡上皮細(xì)胞中，提示該受體在維持肺內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定可能發(fā)揮重要作用，且研究發(fā)現(xiàn)RAGE在NSCLC中表達(dá)減少[30，31]。正常肺組織中高表達(dá)的RAGE在細(xì)胞外基質(zhì)和周圍基質(zhì)中具有很強(qiáng)的黏附性，因此，NSCLC中肺組織細(xì)胞黏附減弱，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移增多[32]。

在腫瘤生長過程中，腫瘤細(xì)胞增生迅速，造成腫瘤微環(huán)境始終處于相對缺氧狀態(tài)。缺氧誘導(dǎo)因子（Hypoxia inducible factor，HIF）-1是真核細(xì)胞中低氧反應(yīng)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄介質(zhì)，調(diào)節(jié)著眾多與氧氣運(yùn)輸，葡萄糖攝取，糖酵解和血管生成有關(guān)的基因的表達(dá)，在許多人類癌癥中，HIF-1活性的失調(diào)通常發(fā)生在HIF-1α亞基水平上，HIF-1受多種機(jī)制調(diào)節(jié)，包括轉(zhuǎn)錄，翻譯后翻譯修飾，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和降解，近年來，對調(diào)節(jié)HIF-1的關(guān)鍵信號通路的理解有了顯著進(jìn)展，并突出了靶向HIF-1通路作為開發(fā)新的癌癥療法的基礎(chǔ)的潛力[33]。因此HIF-1對腫瘤的生長、浸潤與轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性非常重要，HIF-1在腫瘤生長中的作用機(jī)制主要是，缺氧條件下細(xì)胞核產(chǎn)生HIF-1與基因缺氧反應(yīng)元件（HRE）中的HIF-l結(jié)合點(diǎn)結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，引起一系列細(xì)胞對缺氧的反應(yīng)，激活下游因子和靶基因[34]。

腫瘤中低氧微環(huán)境是廣泛存在，PI3K-Akt信號通路、Hsp90通路、MAPK信號通路等都與HIF-1信號通路密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)HIF-l的上游通路磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信號通路參與了低氧的條件下對于一般腫瘤細(xì)胞的血管生成、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及凋亡的調(diào)控，故與腫瘤患者的預(yù)后的狀況關(guān)系十分密切[35]。Hsp90通路是HIF-1的協(xié)同通路，有學(xué)者認(rèn)為，缺氧條件下Hsp90與HIF-1α的bHLH-PAS結(jié)構(gòu)域的結(jié)合可激活HIF-1α，說明Hsp90活性對HIF-1α具有激活作用[36]。MAPK途徑包括幾個(gè)關(guān)鍵的信號傳導(dǎo)成分和磷酸化事件，它們在腫瘤發(fā)生中起作用，這些活化的激酶傳遞調(diào)節(jié)細(xì)胞生長，分化，增殖，凋亡和遷移功能的細(xì)胞外信號，由于受體酪氨酸激酶的異常激活或主要在RAS或RAF基因中的功能獲得突變，導(dǎo)致人類癌癥中RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK（RAS-MAPK）途徑的改變[37]。細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（Extracellular regulated protein kinase，ERK）轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是MAPK信號通路中的主要轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其下游亦可調(diào)控HIF-1，ERK主要是由異常活化的Ras激活靶標(biāo)Raf，進(jìn)而激活下游的絲裂原細(xì)胞外激酶（mitogen extracellular kinase，MEK）的磷酸化，最終使ERK活化，當(dāng)受到例如絲裂原受體、細(xì)胞因子和生長因子等的刺激時(shí)，ERK被磷酸化，然后轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)誘發(fā)等方式使多種癌基因接連激活[38]。

綜上所述，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，探討了消巖湯中夏枯草和白花蛇舌草對非小細(xì)胞肺癌的多成分、多靶點(diǎn)治療途徑，明確了方中兩味中草藥核心藥物成分組成，也借鑒中醫(yī)以方論證的方法，通過方中兩味中草藥推導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制，得出消巖湯中夏枯草和白花蛇舌草治療非小細(xì)胞肺癌的機(jī)制與HIF-1信號通路以及對氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)通路有緊密聯(lián)系，為后續(xù)進(jìn)一步提高消巖湯的安全性、有效性提供了科學(xué)依據(jù)，推動了中醫(yī)藥現(xiàn)代化的研究發(fā)展。