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    基質(zhì)分散固相萃取結(jié)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法 快速篩查皂角米中的73種農(nóng)藥殘留

    2021-12-01 13:04:24張權(quán)周貽兵林野李磊吳玉田劉文政劉利亞郭華陳慶園
    現(xiàn)代食品科技 2021年11期
    關(guān)鍵詞:皂角乙腈定量

    張權(quán),周貽兵,林野,李磊,吳玉田,劉文政,劉利亞,郭華,陳慶園

    (貴州省疾病預(yù)防控制中心-實驗中心,貴州貴陽 550004)

    皂莢屬(Gleditsia japonicavar. delavayi)系豆科蘇木亞科,約12種,主要分布于亞洲、美洲、熱帶非洲。中國原產(chǎn)8種,引進1種,主要分布于河南、山東、貴州、云南等地[1,2]。皂莢是皂莢屬中唯一能食用種子外胚乳的種,其外胚乳俗稱皂角米,又叫雪蓮子、皂角仁、皂角精等。而貴州多產(chǎn)雙莢皂角米,該品種顆粒飽滿,呈天然淡黃色,煮后口感軟糯,具有補腎、潤肺、明目、提神補氣之功效[3,4]。由于近年來人們對綠色健康食品的崇尚,“物以稀為貴”的皂角米也價格倍增,某些地區(qū)把種植皂角米作為一項脫貧致富的產(chǎn)業(yè),鼓勵農(nóng)民擴大種植面積,其發(fā)展前景可觀。而目前皂角米的農(nóng)藥殘留問題報道較少,同時相關(guān)部門也未發(fā)布皂角米相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗標(biāo)準。由此可見,建立一種準確、快速、成本低廉的皂角米中多種農(nóng)藥殘留確證分析方法具有重要意義。

    世界上常用農(nóng)藥有千余種之多,每種農(nóng)藥的性質(zhì)又是千差萬別,這些都給農(nóng)殘的篩查和準確定量帶來一定的困難。而樣品前處理更是農(nóng)藥殘留檢測的關(guān)鍵,占整個分析過程2/3的時間[5,6]。目前樣品前處理方法正朝著簡單化、節(jié)約化和微型化發(fā)展[7-9]。而基質(zhì)分散固相萃取法(Dispersive solid phase extraction,dSPE)是近幾年在QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型樣品前處理方法。相比固相萃取法(Solid phase extraction,SPE)[10]、凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatography,GPC)[11]等傳統(tǒng)方法,dSPE法是將萃取和凈化于一體,具有操作簡單,高效,無需特殊設(shè)備和有機溶劑用量少等優(yōu)點[12,13],特別適合批量樣品檢測,在時間效率、凈化效果等方面都優(yōu)于傳統(tǒng)方法。其次,皂角米中農(nóng)殘檢測大多數(shù)是參照食品安全國家標(biāo)準GB23200.9-2016《糧谷中475種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》,而皂角米與其他糧食作物最大的區(qū)別是其含有豐富的植物膠質(zhì),當(dāng)按照該標(biāo)準進行樣品前處理操作時,樣品提取液經(jīng)旋蒸濃縮后呈膠狀,無法進行后續(xù)的凈化操作,所以該標(biāo)準處理方法不適用于皂角米基質(zhì)。同時,氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)比氣相色譜(GC)和氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)更適合農(nóng)殘檢測,這是由于GC-MS/MS采用二級MS離子定性,既可排除假陽性,又可提高檢測靈敏度和準確性[14-16]。

    本研究結(jié)合皂角米種植中經(jīng)常噴灑的農(nóng)藥種類,選擇有機氯、有機磷、菊酯、氨基甲酸酯等73種代表性農(nóng)藥作為目標(biāo)分析化合物,其中涵蓋GB 2763-2019《食品安全國家標(biāo)準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》在糧食中明確禁止在國內(nèi)銷售和使用的25種殺蟲劑及殺菌劑,以及糙米中有農(nóng)藥限量要求的指標(biāo)。通過優(yōu)化提取溶劑、dSPE萃取管及純化管的類型及用量,建立dSPE結(jié)合GC-MS/MS快速測定皂角米中多種農(nóng)藥殘留的快速篩查方法,為日后在食品風(fēng)險監(jiān)測領(lǐng)域?qū)Z食中農(nóng)藥殘留的篩查和確證、風(fēng)險評估、定量仲裁等研究提供技術(shù)支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    33種藥典中農(nóng)藥定制混標(biāo),天津阿爾塔科技有限公司;10種氨基甲酸酯混合標(biāo)準溶液,農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所;16種有機磷混合標(biāo)準溶液,SB05-069-2008,農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所;7種菊酯混標(biāo),100 μg/mL,美國O2si公司;其余16種農(nóng)藥標(biāo)準品均購自于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所;乙腈、丙酮,色譜純,美國TEDIA公司;CNW dSPE萃取包及純化管,上海安譜實驗科技股份有限公司;內(nèi)標(biāo):環(huán)氧七氯(GSB 05-2317-2016,100 μg/mL),農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所;皂角米樣品采集于貴州織金縣、納雍縣、余慶縣、修文縣。

    1.2 儀器設(shè)備

    布魯克Scion-TQ三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀,美國BRUKER公司;SWLF-200多功能渦輪粉碎機,鄭州旭朗機電設(shè)備有限公司;高速冷凍離心機,上海盧湘儀離心機儀器有限公司。

    1.3 標(biāo)準儲備液的配制

    分別吸取農(nóng)藥標(biāo)準溶液各1 mL混勻,合并后體積為20 mL,配制成混合標(biāo)準溶液,-4 ℃保存,待用。

    1.4 樣品處理過程及實驗優(yōu)化過程

    1.4.1 樣品處理過程

    選取500 g以上代表性樣品,利用大功率渦輪粉粹機粉碎后置于自封袋中。準確稱取4.00 g試樣于50 mL離心管中,加入10 mL 1%乙酸乙腈渦旋振蕩2 min,超聲提取15 min,然后加入萃取包(填料為6 g硫酸鎂及1.5 g醋酸鈉),渦旋振蕩1 min,10000 r/min 離心5 min,準確吸取上清液1 mL加入到純化管中,加入內(nèi)標(biāo)40 μL,渦旋振蕩1 min,10000 r/min離心5 min,上清液過0.22 μm濾膜后用于上機測定。

    1.4.2 實驗優(yōu)化過程

    提取液考察實驗:本研究選取數(shù)份經(jīng)GC-MS/MS驗證無目標(biāo)物的皂角米空白樣品,分別添加50 μL不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準使用液,通過考察1%乙酸乙腈、乙腈、甲醇三種提取溶劑對73種目標(biāo)化合物的提取效率的影響。

    dSPE純化管內(nèi)用量優(yōu)化實驗:本研究選取數(shù)份經(jīng)GC-MS/MS驗證無目標(biāo)物的皂角米空白樣品,分別添加50 μL不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準使用液,然后按照1.4.1樣品前處理過程操作,在凈化過程中分別考察GCB,PSA凈化劑的不同用量(25 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg)對目標(biāo)物提取回收率情況。

    表1 73種農(nóng)藥保留時間及質(zhì)譜條件參數(shù)Table 1 Retention times and GC-MS/MS conditions of the 73 pesticide

    續(xù)表1

    1.5 儀器條件

    1.5.1 色譜條件

    色譜柱:Agilent J&W DB-1701MS石英毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),載氣:氦氣,純度≥99.999%;分流模式:不分流進樣,進樣口溫度:250 ℃,流速:1.0 mL/min,進樣量:1.0 μL。程序升溫條件:起始溫度60 ℃,保持1.0 min,以40 /min℃升至120 ℃,再以5 /min℃升至280 ℃保持8.5 min,共43.0 min,溶劑延遲5.0 min。

    1.5.2 質(zhì)譜條件

    電離模式:電子轟擊離子化(EI)離子源,電離能量:70 eV,分析模式:質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring,MRM)模式,離子源溫度:230 ℃,傳輸線溫度:280 ℃,碰撞氣:氬氣。

    1.5.3 數(shù)據(jù)處理

    采用儀器自帶MS Workstation 8.0軟件進行數(shù)據(jù)采集,通過全掃描模式獲得目標(biāo)物的保留時間,同時利用軟件自帶Factory Library數(shù)據(jù)庫選擇采集的目標(biāo)物的離子對信息,對目標(biāo)物進行準確的定性定量分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 萃取包及提取溶劑的選擇

    圖1 三種提取溶劑的平均提取效率對比Fig.1 Comparison of average recovery rates of the three extraction solvents

    QuEChERS方法是近年發(fā)展迅速的一種農(nóng)藥多組分殘留檢測前處理方法,但在最初的過程中是沒有添加緩沖鹽類物質(zhì)的,這就可能導(dǎo)致某些對pH敏感的農(nóng)藥化合物產(chǎn)生一定的降解,而dSPE法首先加入萃取包,其填料為6 g硫酸鎂及1.5 g醋酸鈉,由于緩沖鹽的加入,就會對某些農(nóng)藥的降解速度起到一定的減緩作用。其次,本研究選取數(shù)份經(jīng)GC-MS/MS驗證無目標(biāo)物的皂角米空白樣品,分別添加50 μL不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準使用液,通過考察1%乙酸乙腈、乙腈、甲醇三種提取溶劑對73種目標(biāo)化合物的提取效率的影響,結(jié)果如圖1所示。從圖中可以看出,與甲醇相比,乙腈的溶劑性能較好,對大部分化合物的提取效率較高,對色素、脂肪等非極性成分的提取能力較弱,尤其是經(jīng)酸化處理的乙腈進行提取后,更適宜萃取極性范圍較寬的多種農(nóng)藥,結(jié)果表明;73種化合物提取的平均回收率為78.7%,其中回收率最低的為63.2%,可滿足實驗要求,所以本方法采用10 mL 1%乙酸乙腈為提取溶劑。

    圖2 GCB用量對目標(biāo)物回收率的影響Fig.2 The effect of GCB dosage on target substance recovery

    2.2 純化管內(nèi)凈化劑用量的選擇

    dSPE法在靈敏度可以達到要求的情況下減少濃縮步驟,通過優(yōu)化后的凈化條件可以去除樣品中的較多雜質(zhì)及色素,凈化效果較好,操作步驟較少。dSPE純化管內(nèi)填料的選擇上要考慮基質(zhì)的復(fù)雜程度,目前主要的凈化劑主要有N-丙基乙二胺固相吸附劑(PSA)[17],石墨化碳黑吸附劑(GCB)[18],C18吸附劑[19]等,通常PSA去除脂肪酸等強極性雜質(zhì)的效果較好,C18去除維生素、甾醇、油脂等非極性雜質(zhì)的能力較好,無水硫酸鎂去除水分和水溶性雜質(zhì)的效果較好,GCB的脫色效果較好。

    其次在dSPE純化管內(nèi)填料量也要充分考慮,雖然凈化填料越多,凈化效果越好,但過量的凈化劑也會影響某些農(nóng)藥的回收率,所以本研究在凈化過程中同時考察了GCB,PSA凈化劑的不同用量(25 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg)對目標(biāo)物回收率情況,結(jié)果如圖2所示。從圖中可以看出,當(dāng)GCB含量為50 mg時,只有5個目標(biāo)物的回收率在60%~65%,可以滿足實驗要求。而當(dāng)GCB含量超過100 mg時,三唑磷、喹硫磷等9種農(nóng)藥的回收率會下降至60%以下,這就表明過量的GCB會對某些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥吸附效果明顯;其次PSA可利用-NH-H產(chǎn)生的氫鍵作用去除皂角米提取液中的糖、酸和某些極性基質(zhì),減少基質(zhì)對進樣系統(tǒng)的污染。實驗中當(dāng)GCB為50 mg時,將PSA用量從50 mg增加至250 mg,73種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率基本無影響。所以通過實驗優(yōu)化,在不同極性目標(biāo)物的回收率滿足方法要求的情況下最終確定純化管內(nèi)填料的規(guī)格為(150 mg MgSO4、50 mg PSA、50 mg GCB、50 mg C18)。在優(yōu)化好的實驗條件下,皂角米樣品加標(biāo)后的MRM總離子流圖如圖3所示。

    同時,本研究中為進一步探究dSPE法的凈化效果,分別稱取兩份同一皂角米樣品,其中一份樣品加入10 mL乙腈后超聲提取10 min,上清液過0.22 μm濾膜后直接進樣分析,另一份樣品按照1.4.1樣品前處理過程進行操作,分別在Full Scan模式條件下分析,樣品未凈化及經(jīng)dSPE凈化后的全掃譜圖如圖4所示,根據(jù)全掃譜圖可以看出,針對皂角米基質(zhì)經(jīng)dSPE凈化后的效果較好,能夠去除大部分雜質(zhì),可滿足準確定量的要求。

    圖3 皂角米基質(zhì)加標(biāo)樣品在MRM模式下的總離子流圖Fig.3 Total ion chromatogram in MRM mode of a seeds of Gleditsia sinensis matrix spiked sample

    圖4 未凈化與dSPE凈化后在全掃描模式下的總離子流圖Fig.4 Total ion chromatogram in full scan mode of unpurified and dSPE cleaned

    2.3 基質(zhì)效應(yīng)

    質(zhì)譜檢測中首要考慮的就是基質(zhì)效應(yīng)問題,它會造成增強或抑制組分的信號響應(yīng),進而影響定量的準確性[20,21],而且不同的濃度水平產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)程度也不同,通?;|(zhì)效應(yīng)的相對強度(ME)=(基質(zhì)標(biāo)準溶液的峰面積/溶劑標(biāo)準溶液的峰面積)×100%,當(dāng)ME的值為100%~120%,基質(zhì)效應(yīng)可忽略不計,當(dāng)ME>120%,表現(xiàn)為基質(zhì)增強效應(yīng),最有效的辦法就是使用基質(zhì)標(biāo)準曲線進行定量。本研究考察了73種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng),分別按照1.4.1進行前處理操作,皂角米中目標(biāo)農(nóng)藥的基質(zhì)效果如圖5所示。結(jié)果顯示:dSPE法的ME范圍為112%~173%,其中41種農(nóng)藥的ME>120%,由此可見與液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用不同的是,氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的基質(zhì)效應(yīng)大多數(shù)以增強為主[22,23]。所以本研究為了減少基質(zhì)效應(yīng)對定量的影響而采用基質(zhì)匹配標(biāo)準曲線內(nèi)標(biāo)法定量。

    圖5 皂角米中目標(biāo)農(nóng)藥的基質(zhì)效果(MEs)Fig.5 Matrix effect (MEs) of target pesticides in seeds ofGleditsia sinensis

    2.4 線性范圍、檢出限、定量限及加標(biāo)回收率

    在GC-MS/MS確證的實驗條件下,取皂角米空白樣品按樣品制備處理后,得到空白提取液,分別加入6個不同濃度的混合標(biāo)準溶液,在優(yōu)化好的色譜條件和質(zhì)譜條件下進行測定,以內(nèi)標(biāo)法定量。以待測物的定量離子對峰面積與內(nèi)標(biāo)物定量離子對峰面積之比為縱坐標(biāo),樣品中待測物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線。同時,采用皂角米空白樣品中添加目標(biāo)物的方法,以10倍信噪比(S/N)對應(yīng)的質(zhì)量濃度確定定量限(LOQ)。其次,取數(shù)份經(jīng)GC-MS/MS驗證無目標(biāo)物的皂角米空白樣品,分別添加100 μL不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準溶液,按照上述優(yōu)化后的方法進行樣品前處理,并上機分析,平行測定6次,其回收率和相對標(biāo)準偏差(relative standard deviations,RSD)如表2所示。

    通過表2可以看出,73種目標(biāo)物線性關(guān)系良好(R2>0.99)。采用加標(biāo)回收的方法確定方法定量限(LOQ,S/N=10)分在2.5~20.0 μg/kg,73種化合物加標(biāo)回收率范圍在68.6%~110.7%之間,RSD(n=6)在2.1%~9.7%之間,表明本方法重復(fù)性良好,可滿足實際檢測的需要。

    表2 73種化合物線性方程、相關(guān)系數(shù)、方法定量限和加標(biāo)回收率Table 2 Linear equations, correlation coefficients, limit of quantification (LOQ) and recovery of the 73 pesticides

    續(xù)表2

    圖6 陽性樣品中氯氟氰菊酯的MRM總離子流圖Fig.6 MRM total ion chromatogram of cyhalothrin in positive sample

    2.5 實際樣品分析

    采用本研究建立的方法對貴州織金縣、納雍縣、余慶縣、修文縣采集的共80份樣品中的73種目標(biāo)農(nóng)藥進行監(jiān)測,其中1份樣品中檢出氯氟氰菊酯殘留,檢出率為1.25%,檢出的農(nóng)藥含量為0.021 mg/kg,其殘留量均未超過國家標(biāo)準及地方標(biāo)準規(guī)定的最大殘留限量值。這可能由于皂角本身有一定的生物活性[24,25],如皂莢、莢果及枝刺具有除濕毒、殺蟲功效,所以皂角也常用作綠色殺蟲劑。圖6為陽性樣品中氯氟氰菊酯的MRM總離子流圖。

    3 結(jié)論

    本研究針對現(xiàn)行國家標(biāo)準中對皂角米特殊基質(zhì)中凈化條件的不足,以QuEChERS法為基礎(chǔ),建立并優(yōu)化dSPE法結(jié)合GC-MS/MS快速測定皂角米中多種農(nóng)藥殘留的快速篩查方法,該方法的前處理步驟簡便,無需特殊設(shè)備,方法適用性強,凈化效果較好,適合糧食基質(zhì)中多組分農(nóng)藥殘留的篩查和確證,方法的定量限也能夠滿足國內(nèi)對農(nóng)藥殘留的檢測要求。

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