HPLC法測(cè)定雙嘧達(dá)莫阿司匹林胃內(nèi)漂浮膠囊的含量

張軍

摘要：建立高效液相色譜法，色譜條件：采用Zorbax SB-C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6），檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。結(jié)果表明：雙嘧達(dá)莫和阿司匹林分別在80～400μg/ml和10～50濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r>0.9993），平均回收率分別為99.69%（RSD=0.28%）和99.34%（RSD=0.48%），本方法可同時(shí)測(cè)定胃內(nèi)漂浮膠囊中雙嘧達(dá)莫阿司匹林的含量，方法簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：雙嘧達(dá)莫阿司匹林胃內(nèi)漂浮膠囊;測(cè)定;高效液相色譜法

雙嘧達(dá)莫（D）用于預(yù)防血栓形成，小劑量阿司匹林（A）用于抗血栓、預(yù)防血栓形成， D、A的復(fù)方制劑（200mg：25mg）的作用為二者的抗血栓作用相加，用于因血栓形成引起暫時(shí)性腦缺血發(fā)作或完全缺血性中風(fēng)的病人，降低中風(fēng)危險(xiǎn)，療效提高，劑量減少，不良反應(yīng)顯著降低〔1，2〕。由于A對(duì)胃刺激性大，D在水及堿性環(huán)境幾乎不溶，而溶于稀酸〔3〕，為此，研究了DA胃內(nèi)漂浮膠囊，以期提高療效、降低不良反應(yīng)、提高生物利用度、緩釋長(zhǎng)效。本文建立了HPLC法，同時(shí)測(cè)定胃內(nèi)漂浮膠囊中D和A的含量。

1 材料與儀器

Waters高效液相色譜儀、515泵、2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器、717自動(dòng)進(jìn)樣器、Millennium32色譜工作站，電子天平FA1604S（上海天平廠）。

D對(duì)照品（江蘇啟東東岳藥業(yè)有限公司，批號(hào)20180733，含量99.36%），A對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100113-201802，含量100.0%），DA胃內(nèi)漂浮膠囊（自制，批號(hào)191220～191224），甲醇（TEDIA COMPANY .INC USA）;其它試劑均為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Zorbax SB-C18（ 4.6×150mm，5μm）;流動(dòng)相 甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6）;流速1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng) 280nm;柱溫 40℃;進(jìn)樣量 10μl。

2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取D對(duì)照品約25mg、A對(duì)照品約200mg，置100ml量瓶中，用含1%甲酸的甲醇液溶解并定容;精密量取上述溶液5ml于50ml的量瓶中，用含1%甲酸的甲醇溶液定容。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 取對(duì)照品溶液，在200～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，見圖1。結(jié)果表明在280nm處D、A有較大吸收，故選擇此波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 專屬性試驗(yàn) 在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，取對(duì)照品溶液和空白輔料溶液進(jìn)樣，輔料見圖2，對(duì)照品見圖3，D和A的保留時(shí)間分別為9.6和3.4min，輔料不干擾測(cè)定。經(jīng)過酸降解（0.1mol/l HCL）、堿降解（0.1mol/lNaOH溶液）和熱降解（110℃加熱破壞）試驗(yàn)，產(chǎn)生的各分解產(chǎn)物均能與被測(cè)組分有效分離。

2.5 線性試驗(yàn) 精密稱取D和A對(duì)照品適量，用含1%甲酸的甲醇液溶解并稀釋成D濃度分別為80、160、240、320、400μg/ml和A濃度分別為10、20、30、40、50μg/ml的溶液，進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積（S）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為D：S=1.472×10-8 C-2.995×10-3 （r=0.9995），S：A =1.447×10-7 C-2.624×10-4（r=0.9993）。結(jié)果表明D在80～400μg/ml 、A在10～50μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密稱取D和A對(duì)照品適量，用含1%甲酸的甲醇液溶解分別配成高、中、低濃度溶液，分別于1d內(nèi)測(cè)5次，得日內(nèi)RSD為D0.503%、0.339%、0.207%和A0.403%、0.486%、0.6275%;連續(xù)測(cè)定5d，得日間RSD為D0.438%、0.693%、0.295%和A1.038%、1.246%、1.085%。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取D和A對(duì)照品適量及處方比例的輔料，用含1%甲酸的甲醇液溶解分別配成高、中、低濃度溶液，每種濃度配制三份，進(jìn)樣測(cè)定，得平均回收率為D99.84%、99.83%、99.41%和A 99.25%、99.07%、99.71%，RSD為D 0.23%、0.10%、0.50%和A0.39%、0.33%、0.71%（n=3）。

2.8 樣品測(cè)定 取本品20膠囊，精密稱定，研細(xì)，精密稱取此細(xì)粉適量（約相當(dāng)于D200mg、A25mg）于100ml量瓶中，用 含1%甲酸的甲醇溶液溶解并定容，用0.45μm的微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液5ml于50ml量瓶中，用含1%甲酸的甲醇溶液溶解并定容，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件下測(cè)定。同法測(cè)定對(duì)照品溶液，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算得樣品的含量，結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 曾選用0.1mol/L HCL、0.1mol/L HCL-甲醇（1：1）、1%甲酸的甲醇等不同溶劑對(duì)樣品進(jìn)行提取。結(jié)果表明，A在0.1mol/L HCL、0.1mol/L HCL-甲醇（1：1）中存在不同程度的水解現(xiàn)象;樣品在1%甲酸的甲醇中穩(wěn)定、提取率較高。對(duì)提取時(shí)間試驗(yàn)的結(jié)果表明，提取10min后變化不大，故選擇10min。

3.2 參照文獻(xiàn)[4，5，6]，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，分別配制不同比例的流動(dòng)相考察分離情況。在甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6）時(shí)，D和A保留時(shí)間較長(zhǎng);比例為60：38.75：0.75：0.5時(shí)，D和A保留時(shí)間較短，A峰與輔料峰分離不好;比例為50：48.75：0.75：0.5時(shí)，D和A的保留時(shí)間分別為9.6和3.4min，且能與各降解產(chǎn)物有效分離。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).臨床用藥須知2000版[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001.287，153.

[2] Food and Drug Administration U.S. Department of Health and Human Services Public Health Service 5600 Fishers Lane Rockville， MD 20857 .FDA Approves New Drug.November 23， 1999：NDA 20-884

[3] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué)[M].第十五版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.544～545.

[4] 易軍，張蜀，譚載友.復(fù)方雙嘧達(dá)莫緩釋膠囊中雙嘧達(dá)莫與阿司匹林含量的RP.HPLC 測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2001，32（2）：70～72.

[5] 王淑君，孟凡浩，孫進(jìn).復(fù)方雙嘧達(dá)莫緩釋膠囊的HPLC測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2004，35（2）：98～99.

[6] 孔少儀，林染.雙嘧達(dá)莫胃內(nèi)漂浮片的研制[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2003，34（8）：395～397.