抗酸染色后不同復染方法的比較

云洪巖，董 愉，李冰

（1佛山復星禪誠醫(yī)院有限公司，佛山 528000；2中山大學附屬第一醫(yī)院病理科，廣州 510080）

抗酸菌主要有結核桿菌和麻風桿菌，在組織切片上檢出抗酸菌，對結核和麻風的病理診斷有重要意義。在常規(guī)HE染色難以確定患者是否有抗酸菌的感染，用抗酸染色可以清晰顯示抗酸桿菌。為了更好的觀察抗酸菌，需要進行復染將組織結構顯示出來，以觀察抗酸菌在組織中的定位。因此抗酸染色后復染劑的選擇就尤為重要。常用的復染劑的有多種，各有優(yōu)缺點。本文對常用復染劑Mayer氏蘇木精、亞甲藍、和亮綠進行比較，探討哪一種復染劑更適合抗酸染色，更有利于抗酸菌的觀察。

材料與方法

1 材料

收集本院病理診斷為結核或麻風的病例10例，連續(xù)石蠟切片5張，厚度均為3μm。

2 染色方法

5張切片同時行抗酸染色：切片脫蠟蒸餾水洗后，用苯酚堿性品紅液染色20min，蒸餾水洗去染液，20%硫酸液分化，流水沖水后分別用Mayer氏蘇木素、亞甲藍和亮綠進行復染，復染時間分別為40~60s、1~2s和 1~2s。

結 果

抗酸菌呈紅色，胞核及背景根據(jù)不同復染試劑呈不同顏色。復染Mayer氏蘇木精細胞核呈藍色，沒有背景染色；復染亞甲藍染色細胞核呈藍色，背景呈深淺不一的藍色；復染甲基綠細胞核呈綠色，沒有背景染色（表1，圖1）。

圖1 3種復染試劑染色結果比較。 A，結核桿菌紅色，細胞核藍色，復染蘇木精；比例尺，50μm。B，麻風桿菌紅色，細胞核藍色，復染蘇木精；比例尺，200μm。C，結核桿菌紅色，細胞核綠色，復染甲基綠；比例尺，200μm。D和E，結核桿菌紅色，細胞核和背景呈不同藍色，復染亞甲藍；比例尺，200μmFig. 1 Comparison of the staining results with three counter-staining reagents. A, counter-staining with hematoxylin, TB bacilli were stained in red,nuclei in blue; scale bar, 50μm; B, counter-staining with hematoxylin, leprosy bacilli were stained in red, nuclei in blue; scale bar, 200μm. C, counter-staining with methyl green, TB bacilli were stained in red, nuclei in green; scale bar, 200μm. D and E, counter-staining with methylene blue, TB bacilli were stained in red, nuclei and background in deep or light blue; scale bar, 200μm

表1 抗酸染色后不同復染試劑染色效果比較Tab.1 Comparison of the staining effect of different counter-staining reagents after acid-fast staining

討 論

苯酚堿性品紅染色法是檢測結核桿菌和麻風桿菌的經(jīng)典方法。苯酚堿性品紅將結核桿菌和麻風桿菌染成紅色，一旦著染后可以抵抗酸的脫色作用，因此稱為抗酸菌[1]。結核桿菌多見于結核性干酪樣壞死灶，它主要侵犯肺、淋巴結和腎臟。麻風桿菌主要侵犯皮膚、黏膜和外周神經(jīng)，在泡沫細胞（麻風細胞）內(nèi)可見到大量麻風桿菌?？顾崛旧珜⒖顾?/p>

菌染成紅色后，還需要進行復染，將組織結構顯示出來，使抗酸菌與背景對比清晰，可更好的觀察到抗酸菌在組織中的定位，如在干酪樣壞死灶可見結核桿菌，在泡沫細胞（麻風細胞）內(nèi)可見到大量麻風桿菌。特殊染色后進行復染主要分為細胞核復染和背景復染，用于細胞核復染的試劑主要是呈藍色的蘇木精、呈紅色的核固紅和呈綠色的甲基綠；復染背景的試劑主要是呈藍色的亞甲藍，呈紅色的曙紅和呈綠色的光綠。細胞核復染可以清晰看到細胞核，對抗酸菌的定位較好，易于分辨抗酸菌定位在細胞漿還是細胞外。蘇木精復染細胞核后細胞核呈藍色，與紅色的抗酸菌對比清晰，蘇木精是常規(guī)HE染色中常用染料，容易獲得，不容易褪色。甲基綠復染細胞核后細胞核呈藍色，與紅色的抗酸菌對比清晰，但甲基綠比較容易褪色，不能長時間保存，而且甲基綠配制較繁瑣。核固紅由于將細胞核染成紅色，與紅色的抗酸菌對比不佳。亞甲藍復染細胞核和背景呈不同藍色，與紅色的抗酸菌紅藍對比清晰，但是亞甲藍復染不容易掌握，如果染色時間過長，整個背景的藍色較深，會遮蓋紅色的抗酸菌，使抗酸菌不容易觀察，因此在復染亞甲藍時要淺染，并在鏡下觀察復染效果，將細胞核染成藍色，背景為淺藍色，使紅色的抗酸菌在淺藍色的背景下容易觀察到，但亞甲藍較蘇木精更容易褪色。 綜所上述，抗酸染色后，用蘇木精復染細胞核最好，最有利于病理醫(yī)生觀察抗酸菌。