白血病患兒的免疫復(fù)合物與疾病特征及BCG免疫治療后患者抗體反應(yīng)的相關(guān)性

趙惠婭 高 慧 郭 雯

據(jù)報(bào)道[1-2]，急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血清中循環(huán)腫瘤相關(guān)抗原和抗體的發(fā)生率很高。本研究旨在分析急性非淋巴細(xì)胞白血病患兒血清中免疫復(fù)合物的發(fā)生率及其與疾病特征及BCG免疫治療后患者抗體反應(yīng)的相關(guān)性，以期對(duì)該疾病患兒預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。所有兒童均接受標(biāo)準(zhǔn)化療，許多兒童也接受卡介苗免疫治療。對(duì)循環(huán)免疫復(fù)合物進(jìn)行了兩種試驗(yàn)：放射標(biāo)記C1q結(jié)合試驗(yàn)，定量測(cè)定血清中C1q與免疫復(fù)合物的結(jié)合，以及聚乙二醇(PEG)沉淀免疫復(fù)合物的能力。在整個(gè)研究過(guò)程中，我們?cè)噲D了解白血病患兒血清中免疫復(fù)合物的連續(xù)測(cè)定和卡介苗受者的免疫反應(yīng)評(píng)估是否能夠提供對(duì)這種疾病的臨床特征的洞察[3]。因此本文選取我院2017年6月到2020年6月共收治的60例白血病患兒作為研究對(duì)象，探討白血病患兒的免疫復(fù)合物與疾病特征及BCG免疫治療后患者抗體反應(yīng)的相關(guān)性，具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年6月到2020年6月共收治的60例白血病患兒作為研究對(duì)象，經(jīng)診斷有41例患兒為急性淋巴細(xì)胞白血病，19例為T細(xì)胞白血病，年齡2～18歲，平均(7.84±1.63)歲；其中男性35例、女性15例。60名患兒均有在診斷時(shí)的研究數(shù)據(jù)，隨訪6個(gè)月以上的38例，12個(gè)月以上的23例。另取同期73例無(wú)血液疾病的患兒作為對(duì)照組，年齡3～14歲，平均(7.65±1.54)歲，男性32例、女性28例。2組患兒性別、年齡等一般資料無(wú)明顯差異(P>0.05)。

1.2 方法

125C1q的制備：取患兒空腹靜脈血，離心取血清，然后立即從新鮮血清中分離出C1q，并將其儲(chǔ)存在pH7.5的0.3 M NaCl，0.005 M乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)中。用乳過(guò)氧化物酶對(duì)C1q進(jìn)行放射標(biāo)記，C1q結(jié)合活性的程序(C1q-BA)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表示為Iz5IClqin實(shí)驗(yàn)沉淀物與125IC1q在含有25 C1qA和50 p1正常人血清(用20%三氯乙酸沉淀)的沉淀物中的百分比[4]。

PEG沉淀分析：將40 μl試驗(yàn)血清用硼酸鹽緩沖液(0.1 m，pH8.4)稀釋至1.0 ml，并在硼酸緩沖液中加入1.0 ml 8% PEG?；旌衔镌? ℃下培養(yǎng)18 h，然后在2000×g、4 ℃下離心1 h。用2 ml 4% PEG洗滌沉淀，用改良的Lowry法測(cè)定測(cè)試IB，為了溶解沉淀物，向每個(gè)管中添加50 pl 0.1 mol/l NaOH和550 pl蒸餾水，并進(jìn)行渦流處理。然后添加500 p1的Fohn試劑[由10 ml 0.2 mol/lNaOH(含4%Na，CO)和0.2 ml 0.5% CuSO4，.5 H2O(含1%檸檬酸鈉)制成]。在37 ℃孵育15 min后，將試管轉(zhuǎn)移到冰浴中。然后加入在蒸餾水中稀釋為1∶3的200pI-Folin苯酚試劑，試管立即旋轉(zhuǎn)。在37 ℃下培養(yǎng)30 min，在2000×g下離心30 min，并在500 nm下測(cè)定上清液的光學(xué)密度(OD)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同患兒血清中免疫復(fù)合物情況對(duì)比

41例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血清平均結(jié)合125I-C1q為(12.46±1.64)%，19例T細(xì)胞白血病患兒血清中125I-C1q的結(jié)合率為(17.47±2.69)%，而73例對(duì)照組患兒血清平均結(jié)合125I-C1q為(6.52±1.25)%。73名對(duì)照組患兒中沒(méi)有1例高于15%(超過(guò)15%的125I-C1q結(jié)合被認(rèn)為是陽(yáng)性)。3組差異有顯著性(P<0.05)，如表1所示。

表1 不同患兒血清中免疫復(fù)合物情況對(duì)比

2.2 PEG沉淀試驗(yàn)結(jié)果

在PEG沉淀試驗(yàn)中，41例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒的診斷血清的外徑讀數(shù)平均為0.273±0.097，73例對(duì)照組的血清平均為0.188±0.054，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。C1q與PEG結(jié)果之間有很強(qiáng)的相關(guān)性(P<0.001)，盡管個(gè)別血清中Clq的升高偶爾與PEG值的升高不相匹配。由于這種強(qiáng)相關(guān)性，本研究?jī)H根據(jù)Clq-BA進(jìn)一步分析結(jié)果。

2.3 13例診斷血清結(jié)合率超過(guò)15%患兒的基本信息

13例診斷血清結(jié)合率超過(guò)15%的患兒中3例來(lái)自41例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒，10例來(lái)自19例T細(xì)胞白血病患兒。13例患兒中有2例在16個(gè)月和20個(gè)月時(shí)出現(xiàn)骨髓復(fù)發(fā)，其余11例在治療后8～18個(gè)月仍處于緩解狀態(tài)。初發(fā)白細(xì)胞計(jì)數(shù)高但C1q-BA正常的8例患者中有2例復(fù)發(fā)。如表2所示。

表2 13例診斷血清結(jié)合率超過(guò)15%患兒的基本信息

3 討論

大量癌癥患者血清中循環(huán)免疫復(fù)合物的高發(fā)病率已被報(bào)道[5-7]。在某些癌癥中，這種復(fù)合物似乎與疾病的程度有關(guān)，預(yù)示著預(yù)后不良。免疫復(fù)合物的檢測(cè)已由不同的研究者以多種方式進(jìn)行研究，不同實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果常常存在差異。這可能是由于患者材料的選擇和所用分析方法的不同[8]。在本研究中，我們對(duì)急性白血病患兒血清中的免疫復(fù)合物進(jìn)行了一系列的測(cè)定，評(píng)估比先前報(bào)道的年齡更小的人群中是否存在免疫復(fù)合物。在一些研究中[9]，血清來(lái)自不同機(jī)構(gòu)的患者，而我們的患者來(lái)自單一的腫瘤服務(wù)機(jī)構(gòu)。所有患者均由同一名醫(yī)務(wù)人員按照統(tǒng)一方案進(jìn)行治療。

在診斷時(shí)，急性白血病患者作為一個(gè)群體，其血清結(jié)合卡介苗抗原的能力低于正常兒童的血清[10]。以前在循環(huán)抗原、可溶性抗原時(shí)，抗體水平較低抗原：抗體復(fù)合物或抗獨(dú)特型抗體。很容易推測(cè)，在其他腫瘤中報(bào)道的細(xì)菌和腫瘤相關(guān)抗原的交叉反應(yīng)性也可能在這方面發(fā)揮作用。在大多數(shù)患者中，用卡介苗進(jìn)行免疫治療可增加結(jié)合卡介苗抗原的能力。與卡介苗結(jié)合能力的增加、免疫復(fù)合物的存在或任何類型的臨床反應(yīng)之間沒(méi)有關(guān)系。需要在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)進(jìn)行額外的測(cè)定，以驗(yàn)證這些結(jié)果所產(chǎn)生的印痕。所采用的分析方法是檢測(cè)的敏感技術(shù)抗原：抗體復(fù)合物。此外，還有許多其他方法基于免疫復(fù)合物的各種性質(zhì)。雖然免疫復(fù)合物的檢測(cè)已經(jīng)為許多疾病的發(fā)病機(jī)制提供了見(jiàn)解，但滿意復(fù)合物可在無(wú)病人士的循環(huán)中形成，以幫助消除微生物等異物[11-12]。腫瘤患者和健康人的循環(huán)復(fù)合體可能部分被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬細(xì)胞清除。因?yàn)榘┌Y患者未清除的免疫復(fù)合物可以阻止細(xì)胞介導(dǎo)的惡性細(xì)胞毒性破壞，了解它們的組成及其對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響是很重要的[13]。

本研究結(jié)果表明，60份白血病患兒的診斷血清中有13份含有免疫復(fù)合物。這一發(fā)現(xiàn)與最近的一份報(bào)告相一致，在所有兒童的診斷血清中免疫復(fù)合物的發(fā)生率很低。值得注意的是，其中10例患有T細(xì)胞白血病，這種類型被認(rèn)為比無(wú)細(xì)胞白血病預(yù)后更差。分析其原因可能在于：白血病患兒白細(xì)胞計(jì)數(shù)較高，這是T細(xì)胞白血病的特征，因此可觀察到的白細(xì)胞計(jì)數(shù)增加與免疫復(fù)合物之間存在的關(guān)系[14-15]。診斷時(shí)的免疫復(fù)合物并不表明預(yù)后不良。在這項(xiàng)研究中，13名患者在一段時(shí)間或另一段時(shí)間有免疫復(fù)合物，其中2人(28%)復(fù)發(fā)，11例沒(méi)有復(fù)發(fā)，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上，復(fù)發(fā)率沒(méi)有差異。這些數(shù)據(jù)表明，無(wú)論是在治療期間還是在診斷時(shí)，免疫復(fù)合物對(duì)白血病患兒都沒(méi)有預(yù)后價(jià)值。

綜上所述，免疫復(fù)合物在不同類型白血病中的發(fā)生率存在差異，但在白血病患兒中，其可能與進(jìn)行性疾病或預(yù)后不良無(wú)關(guān)。