• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    替米沙坦對尿酸鹽刺激下HK-2腎小管上皮細(xì)胞干預(yù)研究*

    2021-10-09 04:23:46張繼波龍利覃慧群金晟余建峰徐敏劉浩
    醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2021年10期
    關(guān)鍵詞:列酮羅格米沙坦

    張繼波,龍利,覃慧群,金晟,余建峰,徐敏,劉浩

    (湖北省第三人民醫(yī)院腎病內(nèi)科,武漢 430033)

    高尿酸血癥是引起慢性腎臟疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,并可導(dǎo)致腎臟纖維化。過氧化物酶增殖物激活受體-γ(peroxisome proliferators-activated receptors-γ,PPAR-γ)與配體結(jié)合激活后,主要通過調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)產(chǎn)生生物效應(yīng),包括抑制促炎性遞質(zhì)[如白細(xì)胞介素-6(IL-6)、環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)]表達(dá),改善炎癥狀態(tài)[1],降低轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)和單核巨噬細(xì)胞因子-1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)表達(dá),起到抗腎間質(zhì)纖維化作用[2-3]。單鈉尿酸鹽刺激腎小管上皮細(xì)胞可以誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)[4]、自噬表達(dá)增加[5],甚至隨著尿酸鹽濃度增加,HK-2細(xì)胞增殖能力下降,導(dǎo)致小管細(xì)胞凋亡[6]。血管緊張素Ⅱ可下調(diào)PPAR-γ表達(dá)[7],替米沙坦具有激活PPAR-γ受體的作用[8],通過提高血清、腎組織中PPAR-γmRNA表達(dá)而降低肥胖大鼠尿白蛋白,有腎保護(hù)作用[9]。陳艷梅等[10]通過對大鼠腎組織及HK-2細(xì)胞培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn),調(diào)節(jié)人生電型尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(human electric urate transporter,hUAT)表達(dá),替米沙坦能抑制腎小管上皮細(xì)胞TGF-β1及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表達(dá),對尿酸性腎病腎臟纖維化有一定的保護(hù)作用。這種保護(hù)作用是否是通過PPAR途徑產(chǎn)生,目前筆者尚未見類似報(bào)道,本研究主要通過PPAR途徑研究替米沙坦對尿酸鹽刺激下HK-2腎小管上皮細(xì)胞的干預(yù)機(jī)制,探討替米沙坦對尿酸性腎病腎保護(hù)作用。

    1 材料與方法

    1.1材料

    1.1.1實(shí)驗(yàn)細(xì)胞 HK-2人腎小管上皮細(xì)胞,購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫(中國上海)。

    1.1.2試劑 胎牛血清(FBS,批號:567216)購于GIBCO公司;0.25%胰酶+0.02%乙二胺四醋酸(EDTA)(批號:160526061)、青霉素-鏈霉素(批號:659R063)購于北京索萊寶科技有限公司;PPAR-γ阻斷劑GW9662(批號:062R1598T)、尿酸(批號:STBC0603V)購于美國Sigma公司;TrizolRNA提取試劑(批號:156987)購于美國Invitrogen公司;TaqTMⅡPCR試劑盒(批號:AE265988)、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號:AC32659C)購于TaKaRa公司;引物購于上海生工生物工程有限公司;羅格列酮片(規(guī)格:每片1 mg,批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字H20041422),成都恒瑞制藥有限公司;替米沙坦片(規(guī)格:每片40 mg,批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字J20180016),Boehringer Ingelhein Ellas A.E。

    1.1.3儀器 二氧化碳(CO2)細(xì)胞培養(yǎng)箱購置于美國Thermo公司;超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司);CK-TKc-3倒置相差顯微鏡(日本OLYMPUS);酶聯(lián)免疫檢測儀(芬蘭Thermol Labsystems);高速冷凍離心機(jī)(德國Eppendorf公司);低速離心機(jī)(上海醫(yī)療儀器廠);磁力攪拌器(蘇州國華儀器廠);電子分析天平(梅特勒-托利多儀器公司);微量移液器(德國Appendorf公司);流式細(xì)胞儀(美國BD亞洲有限公司);紫外分光光度計(jì)(美國Thermo公司);自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器(廈門致微儀器有限公司);CFX96TM實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國BIO-RAD公司)。

    1.2細(xì)胞處理與分組 在培養(yǎng)條件為37 ℃,5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中用完全培養(yǎng)液培養(yǎng)HK-2細(xì)胞,選第3~5代細(xì)胞,取同步處于G0期的細(xì)胞,隨機(jī)分為7組,分別為對照組(培養(yǎng)基,NC組)、模型組[尿酸(600 μmol·L-1),UM組]、高尿酸+替米沙坦組[尿酸(600 μmol·L-1)+替米沙坦(10 μmol·L-1),UT組]、高尿酸+羅格列酮組[尿酸(600 μmol·L-1)+羅格列酮(10 μmol·L-1),UR組]、高尿酸+GW9662組[預(yù)先用5000 nmol·L-1PPAR-γ阻斷劑GW9662 處理30 min,再加入尿酸 (600 μmol·L-1),UG組]、高尿酸+替米沙坦+GW9662組[預(yù)先用5000 nmol·L-1PPAR-γ阻斷劑GW9662 處理30 min,再加入尿酸(600 μmol·L-1)+替米沙坦(10 μmol·L-1),UTG組]和高尿酸+羅格列酮+GW9662組[預(yù)先用5000 nmol·L-1PPAR-γ阻斷劑GW9662 處理30 min,再加入尿酸(600 μmol·L-1)+羅格列酮(10 μmol·L-1),URG組]。各組刺激培養(yǎng)48 h后,細(xì)胞融合90%~95%。

    1.3觀察指標(biāo)與檢測方法

    1.3.1流式細(xì)胞儀檢測HK-2細(xì)胞hUAT、PPAR-γ蛋白表達(dá) 終止培養(yǎng)后收集細(xì)胞(1×106)。離心,洗滌,棄上清液,加1:100稀釋的鼠抗人hUAT、PPAR-γ蛋白單克隆抗體100 μL;37 ℃水浴,離心,棄上清液,加1:20稀釋的羊抗鼠IgG-FITC 100 μL,水浴,離心洗滌,去上清液,除去未結(jié)合熒光抗體,調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×106·L-1,上機(jī)(FACSCalibur ,BD)檢測。實(shí)驗(yàn)設(shè)正常對照:用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替1:100稀釋的鼠抗人hUAT、PPAR-γ 單抗。陰性對照:只加1:100稀釋的鼠抗人hUAT、PPAR-γ單抗而不加IgG-FITC抗體的陰性對照。結(jié)果以陽性細(xì)胞率表示。

    1.3.2流式細(xì)胞儀檢測HK-2細(xì)胞凋亡情況 終止培養(yǎng),將培養(yǎng)基吸出,用PBS清洗,0.25%胰蛋白酶消化,收集細(xì)胞(1×106)。離心,棄上清液,用70%冰乙醇沉淀,4 ℃懸浮固定24 h。固定細(xì)胞經(jīng)碘化丙啶綜合染料(PI、Rnase、Triton X-100)一步法染色30 min后,300目尼龍篩網(wǎng)濾過,上流式細(xì)胞儀檢測,檢測DNA含量,計(jì)數(shù)在G1峰前出現(xiàn)的DNA含量下降的亞二倍體峰的細(xì)胞數(shù),計(jì)算出細(xì)胞凋亡率。

    1.3.3Q-PCR法檢測HK-2細(xì)胞hUAT、PPAR-γ、COX-2、MCP-1、TGF-β1的表達(dá)情況 Trizol法提取總RNA:RNA溶液在-80 ℃條件下保存。取RNA溶液1 μL,用紫外分光光度法于波長260 nm和280 nm處測定吸光度(A值),A260/A280比值在1.8~2.0。逆轉(zhuǎn)錄cDNA:合成后cDNA在-20 ℃或更低溫度下保存。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)反應(yīng):通過GenBank查找hUAT、PPAR-γ、COX-2、MCP-1、TGF-β1序列,選取GAPDH作為內(nèi)參。應(yīng)用CFX96TM實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,進(jìn)行熒光定量PCR。每個(gè)樣品設(shè)2個(gè)復(fù)孔,取平均擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)Ct值。以內(nèi)參GAPDH為對照,計(jì)算相對定量ΔCt值。以對照組為對照,計(jì)算相對定量ΔΔCt值。采用相對定量2-ΔΔCt法比較三個(gè)基因的mRNA的表達(dá)差異。2-ΔΔCt代表實(shí)驗(yàn)組目的基因相對于對照組的變化倍數(shù)。ΔΔCt值=實(shí)驗(yàn)組(目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值)-對照組(目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值)。熒光定量PCR擴(kuò)增基因引物序列,hUAT(NM_001001290.2):上游(5′→3′)GACTTCCTAGTGGGTGTGAA,下游(5′→3′)AATGT-CATTTCCACTGAAGC,產(chǎn)物長度225 bp;PPAR-γ(NM_001127330.2):上游(5′→3′)AGCCAACACTAAACCACA,下游(5′→3′)AGAAACCCTTGCATCCT,產(chǎn)物長度337 bp;COX-2(NM_001124348):上游(5′→3′)TGAAA-CCCACTCCAAACACA,下游(5′→3′)TGGAACA-ACTGCTCATCACC,產(chǎn)物長度301 bp;MCP-1(NM_011333.3):上游(5′→3′)AGCAGCAAGTGTCCCAAAGA,下游(5′→3′)GGTGGTCCATGGAATCCTGA,產(chǎn)物長度103 bp;TGF-β1(NM_011577.2):上游(5′→3′)AGCG-ACTCGCCAGAGTGGTTA,下游(5′→3′)GCAGT-GTGTTATCCCTGCTGTCA,產(chǎn)物長度130 bp;GAPDH(NM_001289726.1):上游(5′→3′)CCTTCCG-TGTTCCTAC,下游(5′→3′)GACAACCTGGTCCTCA,產(chǎn)物長度152 bp。

    1.3.4Western blotting檢測正常及高尿酸條件下HK-2上hUAT、PPAR-γ 、COX-2、MCP-1、TGF-β1的表達(dá) 取出相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)處理組的培養(yǎng)瓶,棄培養(yǎng)液,用預(yù)冷的PBS沖洗2次,按照6孔,板每孔加入裂解液100~200 μL(6 cm培養(yǎng)皿200~300 μL)。充分裂解,取上清液,進(jìn)行蛋白質(zhì)定量后貯存于-80 ℃冰箱。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀中檢測,通過TANONGIS軟件讀取相關(guān)條帶灰度值。

    2 結(jié)果

    2.1各組HK-2細(xì)胞hUAT、PPAR-γ蛋白表達(dá) 通過流式細(xì)胞儀檢測hUAT、PPAR-γ蛋白表達(dá)(以陽性細(xì)胞率表示),PPAR-γ抑制劑聯(lián)合替米沙坦、羅格列酮干預(yù),陽性細(xì)胞率上升(P<0.05),較單用替米沙坦、羅格列酮比例下降(P<0.05),提示替米沙坦無法逆轉(zhuǎn)PPAR-γ抑制后陽性細(xì)胞率減少,替米沙坦有激活PPAR-γ受體作用。見表1。

    表1 7組HK-2細(xì)胞hUAT、PPAR-γ蛋白陽性細(xì)胞率

    2.2各組HK-2細(xì)胞的凋亡 應(yīng)用PPAR-γ抑制劑后聯(lián)合替米沙坦、羅格列酮,凋亡率下降明顯(P<0.05),與單用替米沙坦、羅格列酮比較,凋亡率下降減弱(P<0.05),提示替米沙坦無法逆轉(zhuǎn)PPAR-γ抑制后所致的凋亡率明顯上升。見表2。

    表2 7組HK-2細(xì)胞凋亡情況

    2.3HK-2細(xì)胞hUAT、PPAR-γ、COX-2、MCP-1、TGF-β1的表達(dá) 應(yīng)用PPAR-γ抑制劑聯(lián)合羅格列酮及替米沙坦,hUAT、PPAR-γmRNA表達(dá)增加(P<0.05),COX-2、MCP-1、TGF-β1mRNA表達(dá)減少,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),與單用替米沙坦、羅格列酮比較,hUAT、PPAR-γ表達(dá)減少,COX-2、MCP-1、TGF-β1mRNA表達(dá)增加(均P<0.05)。提示替米沙坦無法逆轉(zhuǎn)PPAR-γ抑制后所致的hUAT、PPAR-γ表達(dá)減少,COX-2、MCP-1、TGF-β1mRNA表達(dá)增加。見表3。

    表3 7組HK-2細(xì)胞hUAT、PPAR-γ、COX-2、MCP-1、TGF-β1 mRNA的表達(dá)

    Tab.3 HUAT,PPAR-γ,COX-2,MCP-1 and TGF-β1 mRNA levels in seven groups of HK-2 cells

    表3 7組HK-2細(xì)胞hUAT、PPAR-γ、COX-2、MCP-1、TGF-β1 mRNA的表達(dá)

    組別hUATPPAR-γCOX-2MCP-1TGF-β1NC組1.00±0.071.00±0.191.00±0.371.00±0.131.00±0.07UM組0.19±0.25①0.17±0.02①3.65±0.9①4.07±0.55①5.35±0.33①UT組0.46±0.01②0.53±0.1②1.82±0.69②2.24±0.45②2.16±1.18②UR組0.46±0.04②0.83±0.13②1.47±0.31②2.51±0.67②1.99±0.67②UG組0.06±0.04①0.25±0.02①3.07±0.93①3.32±0.92①4.57±0.11①UTG組0.31±0.26③⑤0.5±0.02③⑤2.76±0.58③⑤3.2±0.71③⑤3.72±0.64③⑤URG組0.29±0.09④⑤0.38±0.05④⑤2.96±0.43④⑤3.04±0.89④⑤3.09±0.78④⑤F328.33659.3127.6576.69416.056P0.0000.0000.0010.0020.000

    ①與NC組比較,hUAT:t=-53.525,-421.549;PPAR-γ:t=-56.895,-62.681,COX-2:t=5.235,4.012,MCP-1:t=9.772,4.508,TGF-β1:t=22.846,56.010,P<0.05;②與UM組比較,hUAT:t=10.541,10.548;PPAR-γ:t=7.856,10.583,COX-2:t=-5.139,-5.412,MCP-1:t=-3.167,-5.706,TGF-β1:t=-5.726,-11.917,P<0.05;③與UT組比較,hUAT:t=-5.102;PPAR-γ:t=-3.562,COX-2:t=3.327,MCP-1:t=1.579,TGF-β1:t=4.120,P<0.05;④與UR組比較,hUAT:t=-66.732;PPAR-γ:t=-9.097,COX-2:t=7.431,MCP-1:t=3.036,TGF-β1:t=3.20,P<0.05;⑤與UG組比較,hUAT:t=8.513,16.234;PPAR-γ:t=13.650,7.184,COX-2:t=-3.720,-3.025,MCP-1:t=-3.106,-12.657,TGF-β1:t=-2.275,-3.325,P<0.05。

    ①Compared with NC group,hUAT:t=-53.525,-421.549;PPAR-γ:t=-56.895,-62.681,COX-2:t=5.235,4.012,MCP-1:t=9.772,4.508,TGF-β1:t=22.846,56.010,P<0.05;②Compared with UM group,hUAT:t=10.541,10.548;PPAR-γ:t=7.856,10.583.COX-2:t=-5.139,-5.412,MCP-1:t=-3.167,-5.706,TGF-β1:t=-5.726,-11.917,P<0.05;③Compared with UT group,hUAT:t=-5.102;PPAR-γ:t=-3.562,COX-2:t=3.327,MCP-1:t=1.579,TGF-β1:t=4.120,P<0.05;④Compared with UR group ,hUAT:t=-66.732;PPAR-γ:t=-9.097,COX-2:t=7.431,MCP-1:t=3.036,TGF-β1:t=3.20,P<0.05.⑤Compared with UG group,hUAT:t=8.513,16.234;PPAR-γ:t=13.650,7.184,COX-2:t=-3.720,-3.025,MCP-1:t=-3.106,-12.657,TGF-β1:t=-2.275,-3.325,P<0.05.

    2.4HK-2 hUAT、PPAR-γ 、COX-2、MCP-1、TGF-β1蛋白表達(dá) 應(yīng)用PPAR-γ抑制劑聯(lián)合羅格列酮及替米沙坦發(fā)現(xiàn),hUAT、PPAR-γ蛋白表達(dá)增加(P<0.05),COX-2、MCP-1、TGF-β1蛋白表達(dá)減少(P<0.05);與單用替米沙坦、羅格列酮比較,hUAT、PPAR-γ蛋白相對表達(dá)減少,COX-2、MCP-1、TGF-β1蛋白相對表達(dá)增加(P<0.05)。提示替米沙坦無法逆轉(zhuǎn)PPAR-γ抑制后所致hUAT、PPAR-γ蛋白表達(dá)減少,COX-2、MCP-1、TGF-β1蛋白表達(dá)增加。見圖1。

    1.NC組;2.UM組;3.UT組;4.UR組;5.UG組;6.UTG組;7.URG組。①與NC組比較,P<0.05;②與UM組比較,P<0.05;③與UT組比較,P<0.05;④與UR組比較,P<0.05;⑤與UG組,P<0.05。

    3 討論

    3.1尿酸性腎病腎間質(zhì)纖維化的病理生理機(jī)制 尿酸鹽刺激腎小管上皮細(xì)胞可以通過多種途徑介導(dǎo)腎間質(zhì)纖維化,如上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[11-13]、自噬[5]、腎小管細(xì)胞凋亡[14]等,其中氧化應(yīng)激反應(yīng)[4]、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[12]為主要誘導(dǎo)機(jī)制。此外,尿酸鹽可破壞腎小管上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的結(jié)構(gòu)、功能及分布異常,導(dǎo)致腎小管損傷[15]。TGF-β1是致纖維化因子,通過上調(diào)MCP-1,腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和IL-1β等的表達(dá)[16],誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng),影響小管細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[17-18],抑制氧化應(yīng)激,可以減少細(xì)胞凋亡[19-20]。COX-2主要產(chǎn)生部位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核膜,影響前列腺素的分泌,參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,產(chǎn)生級聯(lián)炎癥反應(yīng)[21],減少炎癥及氧化損傷能抑制HK-2細(xì)胞凋亡[22-23]。本研究通過單鈉鹽刺激腎小管上皮細(xì)胞模型發(fā)現(xiàn),與正常HK-2細(xì)胞比較,模型組細(xì)胞凋亡率上升,TGF-β1、COX-2及MCP-1mRNA、蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng),提示存在腎間質(zhì)纖維化改變依據(jù)。

    3.2PPAR-γ表達(dá)、病理生理學(xué)意義及羅格列酮干預(yù)機(jī)制 PPAR-γ屬II型核受體超家族,與配基(或配體)結(jié)合后調(diào)節(jié)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。生理情況下,集合管強(qiáng)表達(dá),間質(zhì)細(xì)胞、腎小球內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞弱表達(dá)[24]。腎小管上皮細(xì)胞PPAR-γ表達(dá)活性降低,TGF-β1表達(dá)上調(diào)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)[25-26],介導(dǎo)細(xì)胞凋亡[27],上調(diào)腎組織中PPAR-γ的表達(dá),降低MMP-9和TGF-β1水平,可以起到抗腎間質(zhì)纖維化的作用[28-30]。此外,激活PPAR-γ受體,可抑制促炎性遞質(zhì)(如IL-6、COX-2、MCP-1)的表達(dá)[1,31]。羅格列酮作為PPAR-γ受體激活劑,通過抑制過度的腎臟局部炎癥因子MCP-1分泌、抑制TLR/NF-KB信號通路激活、下調(diào)趨化因子表達(dá)[32-33],上調(diào)腎組織中PPAR-γmRNA及蛋白表達(dá),發(fā)揮腎臟保護(hù)作用[16,34]。本研究也觀察到UM組PPAR-γmRNA及蛋白表達(dá)明顯低于UT組,通過羅格列酮干預(yù)后,PPAR-γmRNA及蛋白表達(dá)上調(diào),而應(yīng)用PPAR-γ抑制劑后聯(lián)合羅格列酮治療,比較單用羅格列酮,PPAR-γmRNA及蛋白表達(dá)上調(diào)仍然偏低,提示單鈉鹽刺激HK-2細(xì)胞能下調(diào)PPAR-γmRNA及蛋白表達(dá),羅格列酮具有激活PPAR-γ受體作用。本項(xiàng)目是基于PPAR-γ受體通路進(jìn)行研究,而羅格列酮具有明確PPAR-γ受體激活作用,因此,選擇羅格列酮干預(yù)治療作為陽性對照進(jìn)行觀察,如能證明替米沙坦有相似或優(yōu)于羅格列酮的作用,則能進(jìn)一步證實(shí)替米沙坦具有PPAR-γ受體激活機(jī)制。

    3.3替米沙坦干預(yù)尿酸性腎病PPAR-γ表達(dá)立項(xiàng)依據(jù) 血管緊張素能下調(diào)PPAR-γ表達(dá),血管緊張素受體拮抗劑(angiotensin receptor blockers,ARB)能抑制這種作用[7],而且可以減輕HK-2細(xì)胞的凋亡和自噬[35]。早有研究表明,替米沙坦能夠部分激活PPAR-γ受體[36],這種作用不依賴血管緊張素II受體阻滯作用,臨床及實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)能上調(diào)組織中PPAR-γmRNA及蛋白表達(dá),對心梗后心力衰竭、肥胖相關(guān)腎病及5/6腎切除大鼠有保護(hù)作用[9,37-38]。在尿酸性腎病研究中,可以預(yù)防或恢復(fù)尿酸所致NADPH氧化酶/ERK1/2/ET-1途徑的腎小管損傷,并作為尿酸誘導(dǎo)腎纖維化的有前途的治療藥物試驗(yàn)證據(jù)[39]。陳艷梅等[10]通過動(dòng)物及細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn),替米沙坦可以調(diào)節(jié)hUAT蛋白表達(dá),發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。但替米沙坦這種降尿酸、腎臟保護(hù)作用是否是通過PPAR-γ途徑來實(shí)現(xiàn),其具體機(jī)制如何?筆者目前還沒有見到相關(guān)報(bào)道,因此展開此項(xiàng)目研究,進(jìn)一步完善替米沙坦對尿酸性腎病的腎臟保護(hù)機(jī)制。

    3.4項(xiàng)目研究的意義 本研究建立尿酸鹽刺激腎小管上皮細(xì)胞模型發(fā)現(xiàn),腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)PPAR-γ減少,羅格列酮、替米沙坦均能上調(diào)PPAR-γ表達(dá),抑制PPAR-γ受體后給予羅格列酮、替米沙坦干預(yù),并不能逆轉(zhuǎn)PPAR-γ減少,因此論證替米沙坦具有羅格列酮相似激活PPAR-γ受體作用。進(jìn)一步對TGF-β1、MCP-1、COX-2、hUAT蛋白表達(dá)及凋亡率研究發(fā)現(xiàn),替米沙坦不能逆轉(zhuǎn)PPAR-γ受體抑制后TGF-β1、MCP-1、COX-2表達(dá)及凋亡率上升,不能使hUAT蛋白表達(dá)的減少。因此得出結(jié)論,替米沙坦具有類似羅格列酮激活PPAR-γ受體機(jī)制,可能通過PPAR-γ途徑調(diào)節(jié)腎小管細(xì)胞凋亡、減少氧化應(yīng)激及改善間質(zhì)纖維化而起到腎臟保護(hù)作用。

    猜你喜歡
    列酮羅格米沙坦
    曾擔(dān)任過12年國際奧委會(huì)主席的雅克·羅格逝世,享年79歲
    英語文摘(2021年11期)2021-12-31 03:25:24
    氫氯噻嗪聯(lián)合替米沙坦用于高血壓治療的有效性分析
    你看到的是美,我看到的是責(zé)任
    對不起
    金山(2016年9期)2016-10-12 14:22:23
    吡格列酮對肥胖小鼠血清抵抗素的影響及其對腎臟的作用
    吡格列酮對肥胖小鼠腎臟中TNF-α表達(dá)的影響
    替米沙坦對慢性腎臟病患者血清BMP-7的影響
    替米沙坦和纈沙坦治療原發(fā)性高血壓的臨床效果及最小成本分析
    吡格列酮對膀胱癌患者機(jī)體炎癥因子抑制作用的分析
    替米沙坦聯(lián)合卡維地洛治療充血性心力衰竭療效觀察
    日韩中文字幕视频在线看片| 久久国内精品自在自线图片| 久热久热在线精品观看| 不卡视频在线观看欧美| 久久99精品国语久久久| 9色porny在线观看| 国产精品一二三区在线看| 国产色婷婷99| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 黄片无遮挡物在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久热这里只有精品99| 高清黄色对白视频在线免费看| 色吧在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产乱人偷精品视频| 看免费成人av毛片| 日本午夜av视频| 人人澡人人妻人| 韩国av在线不卡| 午夜视频国产福利| av网站免费在线观看视频| 日韩三级伦理在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 99久久精品国产国产毛片| 久久久久久久大尺度免费视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 亚洲精品自拍成人| 一级毛片电影观看| 国产亚洲一区二区精品| 久久av网站| freevideosex欧美| 少妇的逼水好多| 国产免费福利视频在线观看| 一级a做视频免费观看| 热99国产精品久久久久久7| videos熟女内射| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产淫语在线视频| 18在线观看网站| 免费av中文字幕在线| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久99一区二区三区| 久久久久视频综合| a 毛片基地| 男女无遮挡免费网站观看| 国产免费福利视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 97人妻天天添夜夜摸| 少妇精品久久久久久久| 免费观看av网站的网址| 国产片内射在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 成年动漫av网址| 国产成人精品无人区| 少妇的逼好多水| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产成人精品一,二区| 制服丝袜香蕉在线| 精品久久久久久电影网| 在线观看国产h片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| videossex国产| 三级国产精品片| 国产日韩欧美视频二区| a级毛色黄片| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲av在线观看美女高潮| 成人综合一区亚洲| 免费在线观看完整版高清| 久久久国产精品麻豆| 久久国产精品大桥未久av| 久久久久久久久久久久大奶| 一区二区三区精品91| 哪个播放器可以免费观看大片| av免费在线看不卡| 精品一区在线观看国产| 日日摸夜夜添夜夜爱| 97人妻天天添夜夜摸| 考比视频在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 老熟女久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久人人爽人人爽人人片va| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产毛片在线视频| 一区二区av电影网| 国产精品熟女久久久久浪| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产欧美亚洲国产| 在线观看三级黄色| 国产成人aa在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产成人精品一,二区| 精品福利永久在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 18禁观看日本| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美精品国产亚洲| 啦啦啦啦在线视频资源| 在线天堂最新版资源| 精品久久蜜臀av无| 秋霞在线观看毛片| 成人亚洲精品一区在线观看| 一级片'在线观看视频| 最近的中文字幕免费完整| 免费看不卡的av| 国产精品无大码| 亚洲色图综合在线观看| 丝袜喷水一区| 日韩一本色道免费dvd| 成人漫画全彩无遮挡| 婷婷色av中文字幕| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产高清国产精品国产三级| 国产爽快片一区二区三区| 色网站视频免费| 在线观看三级黄色| 丝袜在线中文字幕| 满18在线观看网站| 校园人妻丝袜中文字幕| tube8黄色片| 成人毛片60女人毛片免费| 伦理电影免费视频| 韩国精品一区二区三区 | 成年人午夜在线观看视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产欧美亚洲国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产成人欧美| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 精品酒店卫生间| 亚洲av男天堂| 久久久精品区二区三区| 波野结衣二区三区在线| 91久久精品国产一区二区三区| 久热久热在线精品观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 成人影院久久| 97在线人人人人妻| 最新的欧美精品一区二区| 免费观看性生交大片5| 亚洲国产精品国产精品| freevideosex欧美| 99九九在线精品视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲国产色片| 五月开心婷婷网| av免费在线看不卡| 婷婷成人精品国产| 九九在线视频观看精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 如何舔出高潮| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲av中文av极速乱| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品自拍成人| 亚洲欧美清纯卡通| 久久精品国产亚洲av涩爱| 桃花免费在线播放| 蜜桃国产av成人99| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成人综合一区亚洲| 日韩制服骚丝袜av| 另类精品久久| 欧美精品一区二区大全| 美女内射精品一级片tv| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | av免费在线看不卡| 久热久热在线精品观看| 1024视频免费在线观看| 精品久久久精品久久久| 久久鲁丝午夜福利片| 精品午夜福利在线看| 99热这里只有是精品在线观看| 成人免费观看视频高清| 国产亚洲最大av| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久人妻熟女aⅴ| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲第一av免费看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产老妇伦熟女老妇高清| 深夜精品福利| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产男人的电影天堂91| 国产av国产精品国产| 女性被躁到高潮视频| 免费少妇av软件| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 青春草亚洲视频在线观看| av线在线观看网站| 国产一区二区三区av在线| 日韩免费高清中文字幕av| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成人精品婷婷| 日日啪夜夜爽| 看非洲黑人一级黄片| a 毛片基地| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一级片'在线观看视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 丝袜在线中文字幕| 免费高清在线观看视频在线观看| 老司机亚洲免费影院| 欧美人与善性xxx| 精品午夜福利在线看| 晚上一个人看的免费电影| 国产福利在线免费观看视频| 黄色毛片三级朝国网站| 午夜视频国产福利| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 如何舔出高潮| 91国产中文字幕| 性色avwww在线观看| 伦精品一区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 99久久人妻综合| freevideosex欧美| a 毛片基地| 大陆偷拍与自拍| 黄片播放在线免费| 18+在线观看网站| 桃花免费在线播放| 欧美亚洲日本最大视频资源| 蜜臀久久99精品久久宅男| 最后的刺客免费高清国语| 国产毛片在线视频| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 精品一区二区免费观看| 18禁观看日本| 69精品国产乱码久久久| 人妻系列 视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 少妇人妻久久综合中文| 久久久久久久大尺度免费视频| 一级,二级,三级黄色视频| 最后的刺客免费高清国语| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲情色 制服丝袜| 天天影视国产精品| 桃花免费在线播放| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 午夜av观看不卡| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 日本av手机在线免费观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 日韩一本色道免费dvd| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲成人av在线免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲,欧美,日韩| 97在线视频观看| 日本91视频免费播放| 26uuu在线亚洲综合色| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 男女下面插进去视频免费观看 | 视频在线观看一区二区三区| 成年人午夜在线观看视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产男女内射视频| 在线观看人妻少妇| 最近最新中文字幕免费大全7| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99热6这里只有精品| 久久99一区二区三区| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲久久久国产精品| 欧美少妇被猛烈插入视频| av在线老鸭窝| 亚洲精品色激情综合| 日日啪夜夜爽| 亚洲av男天堂| videos熟女内射| 亚洲欧洲国产日韩| 久久久久久人妻| 欧美日韩视频精品一区| 99热这里只有是精品在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 婷婷色综合www| 国产免费现黄频在线看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 伦精品一区二区三区| 伦理电影免费视频| 国产精品人妻久久久久久| 有码 亚洲区| 免费少妇av软件| 成人国语在线视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 婷婷色av中文字幕| 69精品国产乱码久久久| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲美女黄色视频免费看| 一二三四在线观看免费中文在 | 日韩欧美精品免费久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 一二三四中文在线观看免费高清| 精品酒店卫生间| 免费观看性生交大片5| 高清视频免费观看一区二区| 国产精品女同一区二区软件| 18+在线观看网站| 欧美另类一区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 咕卡用的链子| 最近中文字幕2019免费版| 大片免费播放器 马上看| 亚洲中文av在线| 色视频在线一区二区三区| 久久婷婷青草| www.熟女人妻精品国产 | 黄色怎么调成土黄色| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲内射少妇av| 在线观看一区二区三区激情| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产色婷婷99| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲三级黄色毛片| 午夜久久久在线观看| 国产色婷婷99| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产一区二区三区综合在线观看 | 99视频精品全部免费 在线| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品熟女久久久久浪| 免费看光身美女| 天堂8中文在线网| 伦精品一区二区三区| 青青草视频在线视频观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费观看性生交大片5| 捣出白浆h1v1| av卡一久久| 免费av不卡在线播放| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲人成77777在线视频| 国产免费视频播放在线视频| 老司机影院毛片| 99九九在线精品视频| 人体艺术视频欧美日本| 性色avwww在线观看| 在线天堂最新版资源| 我要看黄色一级片免费的| 精品国产露脸久久av麻豆| 最近手机中文字幕大全| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 少妇 在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 飞空精品影院首页| 亚洲av成人精品一二三区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 午夜免费观看性视频| www.熟女人妻精品国产 | av国产久精品久网站免费入址| 欧美日韩综合久久久久久| 一级毛片我不卡| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品一二三区在线看| 国产精品成人在线| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 五月伊人婷婷丁香| 高清毛片免费看| 女人精品久久久久毛片| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产亚洲最大av| 国产伦理片在线播放av一区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产白丝娇喘喷水9色精品| av国产久精品久网站免费入址| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久精品精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 美女主播在线视频| 亚洲av男天堂| 一边摸一边做爽爽视频免费| 2022亚洲国产成人精品| 一级黄片播放器| av网站免费在线观看视频| 热99国产精品久久久久久7| 国产高清不卡午夜福利| 久久韩国三级中文字幕| 在线天堂中文资源库| 制服人妻中文乱码| 精品视频人人做人人爽| 亚洲av.av天堂| 18禁观看日本| 两性夫妻黄色片 | 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久国产一区二区| 精品一品国产午夜福利视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 丝袜喷水一区| 又大又黄又爽视频免费| 国产成人欧美| 人成视频在线观看免费观看| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲中文av在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产在线视频一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 考比视频在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 成人漫画全彩无遮挡| 九草在线视频观看| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品国产av蜜桃| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 丝袜喷水一区| 国产高清国产精品国产三级| 伦理电影大哥的女人| 一区二区三区乱码不卡18| 天天操日日干夜夜撸| 韩国av在线不卡| 久久精品国产自在天天线| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美激情国产日韩精品一区| av国产久精品久网站免费入址| 永久网站在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲欧洲国产日韩| 青春草视频在线免费观看| 欧美精品av麻豆av| 久久久久久久久久久免费av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 内地一区二区视频在线| 国产亚洲欧美精品永久| 91精品三级在线观看| 咕卡用的链子| 亚洲一区二区三区欧美精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 宅男免费午夜| 好男人视频免费观看在线| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产精品成人在线| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲一码二码三码区别大吗| xxxhd国产人妻xxx| 欧美人与善性xxx| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 18禁动态无遮挡网站| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲伊人色综图| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲第一av免费看| 少妇的丰满在线观看| 成年动漫av网址| 在线观看国产h片| 不卡视频在线观看欧美| 国产精品久久久久久av不卡| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲精品国产av成人精品| 国产永久视频网站| 另类精品久久| 国产麻豆69| 男人添女人高潮全过程视频| 综合色丁香网| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲av免费高清在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲国产日韩一区二区| 最近手机中文字幕大全| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产日韩欧美视频二区| 国产国语露脸激情在线看| 精品亚洲成国产av| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲中文av在线| 国产精品熟女久久久久浪| 蜜臀久久99精品久久宅男| 高清毛片免费看| 国产亚洲欧美精品永久| 99国产精品免费福利视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产成人欧美| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 人成视频在线观看免费观看| 亚洲精品456在线播放app| 成人国产av品久久久| 久久久久国产精品人妻一区二区| 最黄视频免费看| av在线老鸭窝| 欧美性感艳星| 99视频精品全部免费 在线| 97精品久久久久久久久久精品| 免费在线观看黄色视频的| 午夜福利视频在线观看免费| 搡老乐熟女国产| 90打野战视频偷拍视频| 国产成人aa在线观看| 少妇人妻 视频| h视频一区二区三区| 一区二区三区四区激情视频| 满18在线观看网站| 午夜精品国产一区二区电影| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲中文av在线| 国产精品99久久99久久久不卡 | av在线观看视频网站免费| av线在线观看网站| av一本久久久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品一区www在线观看| av福利片在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 免费观看性生交大片5| 大话2 男鬼变身卡| 黄色 视频免费看| 精品午夜福利在线看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 成年av动漫网址| 最近最新中文字幕免费大全7| 日韩成人伦理影院| 国产在视频线精品| 国产精品偷伦视频观看了| 久久久国产欧美日韩av| 黄片播放在线免费| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲成人一二三区av| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 超碰97精品在线观看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 欧美日本中文国产一区发布| 精品一区二区三区视频在线| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成年美女黄网站色视频大全免费| 另类精品久久| 九色成人免费人妻av| 女性生殖器流出的白浆| 欧美成人午夜精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产在线视频一区二区| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲国产av新网站| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲综合精品二区| 制服诱惑二区| 日韩欧美一区视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品国产三级专区第一集| 老女人水多毛片| 色视频在线一区二区三区| 高清黄色对白视频在线免费看| 午夜精品国产一区二区电影| 国产亚洲最大av| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产精品久久久久久精品古装| 国产成人精品婷婷| 性高湖久久久久久久久免费观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲久久久国产精品| 亚洲国产色片| 亚洲国产av新网站| 在线精品无人区一区二区三| 成年人午夜在线观看视频| 少妇人妻 视频| 伦精品一区二区三区| 高清欧美精品videossex|