毛果巴豆枝葉的化學(xué)成分研究

李根 潘爭紅 李海云 符毓夏 李連春 于玲玲 寧德生

摘 要： 為研究毛果巴豆枝葉中的化學(xué)成分，該文采用硅膠、Sephadex LH-20柱色譜以及HPLC等多種色譜相結(jié)合的方法，對毛果巴豆枝葉95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進行分離，從中得到8個化合物，通過波譜數(shù)據(jù)分析并結(jié)合文獻比對，將其鑒定為2β-hydroxyteucvidin acetate（1），2β-hydroxyteucvidin（2），crotoeurin B（3），山奈酚-3-O-（6″-O-順式對香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷（4），山奈酚-3-O-（6″-O-反式對香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷（5），栗苷A（6），cerevisterol（7），尿嘧啶（8）。化合物2-7均為首次從該植物中分離得到。

關(guān)鍵詞： 巴豆屬， 毛果巴豆， 化學(xué)成分， HPLC， 結(jié)構(gòu)鑒定

中圖分類號： Q946.8 ?文獻標(biāo)識碼： A ?文章編號： 1000-3142（2021）07-1077-05

Abstract： To study the chemical constituents from the twigs and leaves of Croton lachynocarpus， eight compounds were isolated from 95% ethanol extract of twigs and leaves of C. lachynocarpus， by means of various chromatographic techniques including column chromatography over silica gel， Sephadex LH-20， and reversed-phase HPLC. Compounds were identified as 2β-hydroxyteucvidin acetate（1）， 2β-hydroxyteucvidin（2）， crotoeurin B（3）， kaempferol-3-O-（6″-O-cis-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside（4）， kaempferol-3-O-（6″-O-trans-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside（5）， castanoside A（6）， cerevisterol（7）， uracil（8） by analyzing their spectra data and comparing with the previously reported literatures. Compounds 2-7 were obtained from the plant for the first time.

Key words： Croton L.， Croton lachynocarpus， chemical constituents， HPLC， structure identification

毛果巴豆（Croton lachynocarpus）為大戟科（Euphorbiaceae）巴豆屬（Croton L.）植物，又名小葉雙眼龍，主要分布于廣西、廣東、江西、湖南南部和貴州南部的山地疏林或灌叢中，其幼枝、幼葉、花序和果均密被星狀柔毛（中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會， 1996）。該植物具有祛風(fēng)除濕、散瘀止痛、消腫解毒等功效，民間多以根、葉入藥，用于治療跌打腫痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。本課題組前期已從毛果巴豆根中分離得到三萜、甾醇、酚酸酯類等成分（Pan et al.，2014;潘爭紅等，2014）;從葉子中發(fā)現(xiàn)多種現(xiàn)代香料合成工業(yè)可開發(fā)利用的揮發(fā)油成分，如α-松油醇、桉樹醇、α-紅沒藥烯等（寧德生等，2013）。但迄今為止，該植物的物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理學(xué)研究仍較少，致使其應(yīng)用仍處于中藥復(fù)方制劑的層面，嚴(yán)重限制了毛果巴豆的開發(fā)與利用。因此，為了更全面地闡明該植物的物質(zhì)基礎(chǔ)，尋找更多具有開發(fā)利用價值的活性化合物，本課題組進一步開展毛果巴豆枝葉95%乙醇提取物的化學(xué)成分研究，從中分離鑒定出8個化合物，其中，1-3為二萜類化合物，4-6為黃酮類化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1?；衔?-7均為首次從毛果巴豆枝葉中分離得到。

1 儀器與材料

AVANCE Ⅲ HD 500 MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀（TMS內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司）;LC/MS-IT-TOF質(zhì)譜儀（日本島津公司）;Agilent 1200高效液相色譜儀，高效液相所用試劑為色譜純（賽默飛世爾科技（中國）有限公司），其試劑均為分析純（西隴化工股份有限公司）;柱色譜和薄層色譜所用硅膠（青島海洋化工有限公司）;Sephadex LH-20凝膠（瑞士Amershan Biosciences公司）。

毛果巴豆枝葉采自廣西桂林市陽朔縣，由廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所許為斌博士鑒定。憑證樣品保存于廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室。

2 提取與分離

毛果巴豆枝葉8.0 kg，陰干后粉碎，加入95%乙醇40 L，室溫下浸提24 h，過濾，濾渣以上述方法再提取2次，合并提取液，減壓濃縮得到850 g的浸膏。取800 g的浸膏加入適量的水超聲分散后，依次加入石油醚、乙酸乙酯萃取3次，每次萃取溶劑用量為2 L，減壓濃縮分別得到石油醚部位144 g、乙酸乙酯部位239 g。

取乙酸乙酯萃取部位189 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮（1∶0→0∶1）為洗脫劑進行梯度洗脫，各洗脫流份經(jīng)過TLC檢測合并得到4個組分Fr.1～Fr.4。Fr.2組分經(jīng)硅膠柱色譜反復(fù)純化（石油醚-丙酮=8∶1），得到化合物1（9 mg）、2（7.2 mg）、7（15.4 mg）和8（9.6 mg）;Fr.3組分通過半制備高效液相色譜分離（50% CH3OH，含 0.1% HCOOH）得到化合物5（6.6 mg）、6（4.6 mg）;Fr.4組分利用Sephadex LH-20柱色譜純化，以氯仿/甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物3（10.2 mg）和4（7.9 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 針狀結(jié)晶。HR-ESI-MS m/z： 387.1816 [M+H]+， 分子式C21H22O7。1H-NMR（500 MHz， CDCl3）： δ 6.36（1H， m， H-14）， 5.37（1H， t， J=8.0 Hz， H-12）， 2.55（2H， dd， J=8.5， 15.0 Hz， H-11b）， 2.09（3H， s， OAc）， 1.94（1H， dd， J=8.5， 14.0 Hz， H-11a）， 1.35（3H， d， J=7.0 Hz， H-17 ）; 13C-NMR（125 MHz， CDCl3）： δ 28.0（C-1， t）， 66.8（C-2， d）， 24.9（C-3， t）， 124.1（C-4， s）， 161.7（C-5， s）， 76.0（C-6， d）， 35.9（C-7， t）， 38.9（C-8， d）， 51.9（C-9， s）， 33.8（C-10， d）， 39.0（C-11， t）， 72.0（C-12， d）， 125.1（C-13， s）， 108.0（C-14， d）， 144.6（C-15， d）， 139.6（C-16， d）， 14.3（C-17， q）， 171.4（C-18， s） 176.9（C-20， s） 169.9（OC=O， s）， 21.1（COO-CH3， q）。以上數(shù)據(jù)與文獻（Savona et al.，1986）報道基本一致，故鑒定化合物1為 2β-hydroxyteucvidin acetate。

化合物2 針狀結(jié)晶。HR-ESI-MS m/z： 345.1788 [M+H]+， 分子式C19H20O6。1H-NMR（500 MHz， C5D5N）： δ 7.83（1H， s， H-16）， 7.70（1H， s， H-15）， 6.69（1H， s， H-14）， 5.52（1H， t， J=8.0 Hz， H-12）， 2.66（1H， dd， J=8.0， 14.0 Hz， H-11b）， 1.99（1H， dd， J=8.0， 14.0 Hz， H-11a）， 1.39（3H， d， J=7.5 Hz， H-17）; 13C-NMR（125 MHz， C5D5N）： δ 34.7（C-1， t）， 67.8（C-2， d）， 31.8（C-3， t）， 127.5（C-4， s）， 163.9（C-5， s）， 77.6（C-6， d）， 37.0（C-7， t）， 40.7（C-8， d）， 53.6（C-9， s）， 38.0（C-10， d）， 40.6（C-11， t）， 73.6（C-12， d）， 127.2（C-13， s）， 110.3（C-14， d）， 146.1（C-15， d）， 142.1（C-16， d）， 15.5（C-17， q）， 173.6（C-18， s）， 179.2（C-20， s）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻（Savona et al.，1986）報道基本一致，故鑒定化合物2為2β-hydroxyteucvidin。

化合物3 針狀結(jié)晶。HR-ESI-MS m/z： 361.1571 [M+H]+， 分子式C20H24O6。1H-NMR（500 MHz， CDCl3）： δ 7.46 （1H， br s， H-16）， 7.42 （1H， br s，H-15）， 6.41（1H， br s， H-14）， 3.10（1H， dd， J=15.0， 3.0 Hz， H-7b）， 2.57（1H， dd， J=13.5， 6.5 Hz， H-11b）， 2.34（1H， dd， J=13.5 10.0 Hz， H-11a）， 2.23（1H， dd， J=15.0， 5.5 Hz， H-7a）， 2.16（1H， m， H-4）， 1.02（1H， d， J=6.5 Hz， H-17）; 13C-NMR（CDCl3 125 MHz）： δ 23.1（C-1， t）， 25.5（C-2， t）， 24.9（C-3， t）， 42.3（C-4， d）， 47.4（C-5， d）， 208.8（C-6， s）， 45.4（C-7， t）， 32.9（C-8， d）， 51.5（C-9， s）， 42.6（C-10， d）， 36.5（C-11， t）， 70.7（C-12， d）， 124.0（C-13， s）， 108.2（C-14， d）， 144.3（C-15， d）， 140.0（C-16， d）， 17.0（C-17， q）， 173.7（C-18， s）， 177.0（C-20， s）， 51.4（COO-CH3， q）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻（Pan et al.，2015）報道基本一致，故鑒定化合物3為crotoeurin B。

化合物4 黃色粉末。HR-ESI-MS m/z： 593.1383 [M-H]-， 分子式C30H26O13。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： δ 7.54（2H， d， J=8.0 Hz， H-2， 6）， 6.69（2H， d， J=8.0 Hz， H-3， 5）， 6.67（1H， d， J = 13.0 Hz， H-7）， 5.46（1H， d， J=13.0 Hz， H-8）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 156.5（C-2， s）， 133.0（C-3， s）， 177.3（C-4， s）， 161.2（C-5， s）， 98.8（C-6， d）， 165.1（C-7， s）， 93.7（C-8， d）， 156.4（C-9， s）， 103.8（C-10， s）， 120.8（C-1′， s）， 130.8（C-2′， 6′， d）， 115.0（C-3′， 5′， d）， 159.9（C-4′， s）， 101.1（C-1″， d）， 74.0（C-2″， d）， 76.2（C-3″， d）， 70.0（C-4″， d）， 74.1（C-5″， d）， 62.7（C-6″， t）， 125.3（C-1， s）， 132.6（C-2， 6， d）， 114.8（C-3， 5， d）， 158.8（C-4， s）， 143.6（C-7， d）， 114.6（C-8， d）， 165.8（C-9， s）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道（陳秋等，2012）基本一致，故鑒定化合物4 山奈酚-3-O-（6″-O-順式對香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-（6″-O-cis-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside]。

化合物5 黃色無定形粉末。HR-ESI-MS m/z： 595.1391 [M+H]+， 分子式C30H26O13。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： δ 7.99（2H， d， J=8.0 Hz， H-2′， 6′）， 7.37（2H， d， J=8.5 Hz， H-2， 6）， 6.85（2H， d， J=8.0 Hz， H-3′， 5′）， 6.79（2H， d， J=8.5 Hz， H-3， 5）， 6.38（1H， s， H-8）， 6.15（1H， s， H-6）， 6.11（1H， d， J=16.0 Hz， H-8）， 5.45（1H， d， J=7.5 Hz， H-1″）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 156.8（C-2， s）， 133.5（C-3， s）， 177.8（C-4， s）， 161.6（C-5， s）， 99.4（C-6， d）， 165.2（C-7， s）， 94.2（C-8， d）， 156.8（C-9， s）， 104.2（C-10， s）， 121.2（C-1′， s）， 131 3（C-2′， 6′， d）， 115.6（C-3′， 5′， d）， 160.5（C-4′， s）， 101.6（C-1″， d）， 74.6（C-2″， d）， 76.7（C-3″， d）， 70.5（C-4″， d）， 74.7（C-5″， d）， 63.4（C-6″， t）， 125.4（C-1， s）， 130.6（C-2， 6， d）， 116.2（C-3， 5， d）， 160.3（C-4， s）， 145.1（C-7， d）， 114.1（C-8， d）， 166.6（C-9， s）。以上數(shù)據(jù)與文獻（陳秋等，2012）報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為山奈酚-3-O-（6″-O-反式對香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-（6″-O-trans-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside]。

化合物6 黃色顆粒狀粉末。HR-ESI-MS m/z： 595.1792 [M+H]+， 分子式C30H26O13。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： 12.59（1H， br s， OH-5）， 10.18（1H， br s， OH-4′）， 8.04（2H， d， J=8.5 Hz， H-2′， 6′）， 7.37（1H， d， J=16.5 Hz， H-7）， 7.33（2H， d， J=8.0 Hz， H-2， 6）， 6.85（2H， d， J=8.5 Hz， H-3′， 5′）， 6.77（2H， d， J=8.0 Hz， H-3， 5）， 6.39（1H， s， H-8）， δ 6.14（1H， s， H-6）， 6.10（1H， d， J=16.5 Hz， H-8）， 5.45（1H， d， J =7.0 Hz， H-1″）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 156.3（C-2， s）， 133.2（C-3， s）， 177.0（C-4， s）， 161.1（C-5， s）， 98.8（C-6， d）， 164.4（C-7， s）， 93.7（C-8， d）， 156.3（C-9， s）， 103.7（C-10， s）， 120.8（C-1′， s）， 130.9（C-2′， 6′， d）， 115.7（C-3′， 5′， d）， 160.0（C-4′， s）， 101.6（C-1″， d）， 73.0（C-2″， d）， 71.0（C-3″， d）， 68.2（C-4″， d）， 72.8（C-5″， d）， 63.2（C-6″， t）， 124.9（C-1， s）， 130.1（C-2， 6， d）， 115.0（C-3， 5， d）， 159.8（C-4， s）， 144.6（C-7， d）， 113.6（C-8， d）， 166.1（C-9， s）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道（王嗣等，2004）基本一致，故鑒定化合物6為栗苷A（castanoside A）。

化合物7 白色粉末。HR-ESI-MS m/z： 431.3462 [M+H]+， 分子式C28H46O3。1H-NMR（500 MHz， C5D5N）： δ 5.24（1H， dd， J=7.5， 15.5 Hz， H-23）， 5.17（1H， dd， J=8.0， 15.5 Hz， H-22）， 4.84（1H， m， H-3）， 4.33（1H， br s， H-6）， 1.54（3H， s， H-19）， 1.07（3H， d， J=6.5 Hz， H-21）， 0.96（3H， d， J=7.0 Hz， H-28）， 0.88（3H， d， J=8.5 Hz， H-27）， 0.86（3H， d， J=6.0 Hz， H-26）， 0.68（3H， s， H-18）; 13C-NMR（125 MHz， C5D5N）： δ 32.6（C-1， t）， 33.8（C-2， t）， 67.5（C-3， d）， 41.9（C-4， t）， 76.1（C-5， s）， 74.2（C-6， d）， 120.4（C-7， d）， 141.5（C-8， s）， 43.7（C-9， d）， 38.0（C-10， s）， 22.3（C-11， t）， 39.8（C-12， t）， 43.7（C-13， s）， 55.2（C-14， d）， 23.4（C-15， t）， 28.4（C-16， t）， 56.1（C-17， d）， 12.4（C-18， q）， 18.7（C-19， q）， 40.8（C-20， d）， 20.1（C-21， q）， 136.1（C-22， d）， 132.1（C-23， d）， 43.0（C-24， d）， 33.3（C-25， d）， 21.3（C-26， q）， 19.8（C-27， q）， 17.8（C-28， q）。以上數(shù)據(jù)與文獻（Gao et al.，2001）報道基本一致， 故鑒定化合物7為cerevisterol。

化合物8 白色無定形粉末。HR-ESI-MS m/z： 111.0277 [M-H]-， 分子式C4H4N2O2。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： δ 7.39（1H， d， J=7.5 Hz， H-6）， 5.46（1H， d， J=7.5 Hz， H-5）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 151.5（C-2， s）， 164.3（C-4， s）， 100.2（C-5， d）， 142.1（C-6， d）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道（高錦明等，2001）基本一致，故鑒定化合物8為尿嘧啶（uracil）。

4 討論與結(jié)論

據(jù)文獻記載，毛果巴豆葉作為復(fù)方制劑中的材料之一，與雞骨香、田基黃等中藥材制成的中藥散劑（湛江蛇藥，又名何曉生蛇藥）具有消腫、止痛及解蛇毒的功效（蛇志編輯部，1990）。但迄今為止沒有針對毛果巴豆枝葉化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的研究報道。本研究共從毛果巴豆枝葉分離鑒定8個化合物，結(jié)構(gòu)涉及克羅烷型二萜、黃酮、甾醇等類型?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，克羅烷型二萜普遍具有良好的抗炎、抗菌、抗腫瘤等生物活性（陳昊等，2017）。黃酮類化合物山奈酚-3-O-（6″-O-順式對香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷（4）及山奈酚-3-O-（6″-O-反式對香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷（5）的細(xì)胞毒性較低，且具有不同程度的抗氧化活性，前者還具有明顯的抗炎活性（任珊珊等，2016）;甘栗A（6）具有一定的細(xì)胞毒性（其IC50為77.91μmol·L-1）（張玉雪，2010）。甾醇化合物cerevisterol（7）能夠抑制血清饑餓介導(dǎo)的MC3T3-E1細(xì)胞凋亡（Hata et al.，2002）。因此，通過對毛果巴豆枝葉的化學(xué)成分研究，不僅豐富該植物的物質(zhì)基礎(chǔ)，而且為今后開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻：

CHEN H， LIANG JY， SUN JB， et al.， 2017. Progress on diterpenoids and their biological activities of the genus Ajuga [J]. Strait Pharm J， 29（3）： 1-10. [陳昊， 梁敬鈺， 孫建博， 等， 2017. 筋骨草屬植物中二萜類成分的化學(xué)及藥理活性研究進展 [J]. 海峽藥學(xué)， 29（3）： 1-10.]

CHEN Q， WAMG T， GE DD， et al.， 2012. Isolation and identification of flavonoids from Leontopodium leontopodioides（Willd.） Beauv.（Ⅱ） [J]. J Shenyang Pharm Univ， 29（2）： 104-108. [陳秋， 王濤， 葛丹丹， 等， 2012. 火絨草黃酮類成分的分離與鑒定（Ⅱ） [J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報， 29（2）： 104-108.]

Editorial Commission of China Flora of Chinese Academy of Sciences， 1996. Flora Reipublicae Popularis Sinicae [M]. Beijing： Science Press， 44（2）： 131. [中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會， 1996. 中國植物志 [M]. 北京： 科學(xué)出版社， 44（2）： 131.]

GAO JM， HU L， LIU JK， 2001. A novel sterol from Chinese truffles Tuber indicum [J]. Steroids， 6610： 771-775.

GAO JM， SHEN J， YANG X， et al.， 2001. The constituents of Russula ochroleuca basidiomycetes [J]. Acta Bot Yunnan， 23（3）： 385-395. [高錦明， 沈杰， 楊雪， 等， 2001. 黃白紅菇的化學(xué)成分 [J]. 云南植物研究， 23（3）： 385-393.]

HATA K， SUGAWARA F， OHISAN， et al.， 2002. Stimulative effects of （22E， 24R）-ergosta-7， 22-diene-3β， 5α， 6β-triol from fruiting bodies of Tricholima auratum， on a mouse osteoblastic cell line， MC3T3-E1 [J]. Biol Pharm Bull， 25（8）： 1040-1044.

Editing Department of Journal of Snake， 1990. Guangdong snake collection [J]. J Snake，（2）：20. [蛇志編輯部， 1990. 廣東蛇藥集錦 [J]. 蛇志， （2）： 20.]

NING DS， JIANG LH， L SH， et al.， 2013. GC-MS analysis of volatile constituents from leaves of Croton euryphyllus and C. lachynocarpus [J]. Guihaia， 33（3）： 364-367. [寧德生， 蔣麗華， 呂仕洪， 等， 2013. 石山巴豆與毛果巴豆葉中揮發(fā)油成分分析 [J]. 廣西植物， 33（3）： 364-367.]

PAN ZH， NING DS， WU XD， et al.， 2015. New clerodane diterpenoids from the twigs and leaves of Croton euryphyllus [J]. Bioorg Med Chem Lett， 25（6）： 1329-1332.

PAN ZH， NING DS LIU JL， et al.， 2014. A new triterpenoid saponin from the root of Croton lachnocarpus Benth [J]. Nat Prod Res， 28（1）： 48-51.

PAN ZH， WU YF， NING DS， et al.， 2014. Chemical constituents from the root of Croton lachynocarpus [J]. Guihaia， 34（2）： 148-150. [潘爭紅， 吳云飛， 寧德生， 等， 2014. 毛果巴豆根的化學(xué)成分研究 [J]. 廣西植物， 34（2）： 148-150.]

REN SS， BAO BQ， GEGENTANA， et al.， 2016. Study on the flavonoids and biological activity of Rubus sachalinensis [J]. J Chin Med Mat， 39（9）： 2019-2023. [任珊珊， 包保全， 格根塔娜， 等， 2016. 蒙藥懸鉤子木黃酮類成分及其生物活性研究 [J]. 中藥材， 39（9）： 2019-2023.]

SAVONA G， PIOZZI F， RODRIGUEZ B， et al.， 1986. 2β-hydroxyteucvidin from Teucrium webbianum [J]. Phytochemistry， 25（12）： 2857-2859.

WANG S， TANG WZ， DING XB， 2004. Two new flavonoids from the flower of Castanea mollissima Blume [J]. Acta Pharm Sin， 39（6）： 442-444. [王嗣， 唐文照， 丁杏苞， 2004. 板栗花中兩個新黃酮苷類化合物 [J]. 藥學(xué)學(xué)報， 39（6）： 442-444.]

ZHANG YX， 2010. Study on the active constituents of Verbena officinalis L. [D]. Shanghai： Shanghai Jiaotong University. [張雪玉， 2010. 馬鞭草的活性成分研究 [D]. 上海： 上海交通大學(xué).]

（責(zé)任編輯 李 莉）