新疆石河子市犬蛔蟲感染調(diào)查及蟲卵體外發(fā)育形態(tài)觀察

曾子康，張國武，寧程程，季春輝，孟慶玲

（石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003）

犬蛔蟲病通常是由犬弓首蛔蟲、獅弓蛔蟲感染引起的腸道寄生蟲病。犬弓首蛔蟲（Toxocara canis）在分類上屬于弓首科（Toxocaridae）弓首屬（Toxocara），而獅弓蛔蟲（Toxascaris leonine）屬于蛔科（Ascarididae）弓蛔屬（Toxascaris）。犬弓首蛔蟲，雄蟲長50～110 mm，雌蟲長90～180 mm，蟲卵呈亞球形或卵圓形，卵殼厚，表面有點(diǎn)狀凹陷，大小為（68～85）μm×（64～72）μm；獅弓蛔蟲，雄蟲長30～70 mm，雌蟲長30～100 mm，蟲卵呈偏卵圓形，卵殼厚，表面光滑無凹陷，大小為（49～61）μm×（74～86）μm[1]。

犬弓首蛔蟲主要侵害幼犬，可導(dǎo)致1 歲內(nèi)幼犬發(fā)育遲緩以及呼吸系統(tǒng)和腸道疾病。幼犬感染犬弓首蛔蟲的主要途徑有產(chǎn)前感染和產(chǎn)后感染（乳源性感染等），母犬通過清理幼犬糞便可經(jīng)口感染[2]。獅弓蛔蟲主要寄生于成年犬，感染后不會(huì)導(dǎo)致明顯臨床癥狀[3]。犬?dāng)z入獅弓蛔蟲卵后，幼蟲孵出并進(jìn)入腸壁發(fā)育，然后返回腸腔，不經(jīng)氣管遷移即發(fā)育成熟[4]。

犬蛔蟲可經(jīng)口感染人，其幼蟲在各臟器中移行，常導(dǎo)致多器官損傷，是一種可對(duì)人類健康造成嚴(yán)重危害的人獸共患寄生蟲。1 條成熟犬弓首蛔蟲平均每天能夠產(chǎn)20 萬枚卵，一生排卵總數(shù)可達(dá)幾千萬枚。由于蛔蟲卵對(duì)低溫和一般消毒劑有較強(qiáng)的抵抗力，在適宜的溫度、濕度條件下可存活數(shù)年，因此環(huán)境中的蛔蟲卵是人類和動(dòng)物的主要感染來源。本研究利用飽和鹽水漂浮法和麥克馬斯特氏法，分別對(duì)石河子市犬蛔蟲感染率和感染強(qiáng)度進(jìn)行調(diào)查，并對(duì)獅弓蛔蟲卵體外發(fā)育情況進(jìn)行觀察，以期為石河子市人獸共患寄生蟲病防控提供流行病學(xué)資料。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

AE2000 倒置顯微鏡，廈門麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司；霉菌培養(yǎng)箱，寧波萊?？萍加邢薰?；TP-213 電子天平，美國賽多利斯公司。其他常用儀器和試劑包括，普通光學(xué)顯微鏡、醫(yī)用冷藏柜、移液器、LED 蟲卵計(jì)數(shù)玻片裝置、飽和鹽水等。

1.2 調(diào)查地點(diǎn)及樣品采集

2021年2—3 月，在石河子流浪動(dòng)物救助站和石河子市部分寵物醫(yī)院采集糞樣總計(jì)136 份。石河子流浪動(dòng)物救助站共有來自石河子市各社區(qū)愛心人士和小動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì)收集的流浪犬約1 000 只，每周采集1 次，共采集到96 份糞樣；在石河子大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院等5 家寵物醫(yī)院采集家養(yǎng)犬糞樣40 份。由于寵物醫(yī)院樣本量較小，故每周采集1 次，每次采集全部糞樣[5]。

1.3 感染率調(diào)查

采用飽和鹽水漂浮法檢查犬糞便中的蟲卵。取新鮮糞便2 g 放在平皿中，用鑷子或玻璃棒壓碎，加入10 倍量飽和鹽水，攪拌混合，用糞篩過濾到試管中，使管內(nèi)糞汁稍隆起至剛好不溢出管口；靜置30 min，用載玻片蘸取液面迅速翻轉(zhuǎn)，最后加蓋玻片鏡檢，檢出蟲卵即為陽性。

1.4 感染強(qiáng)度調(diào)查

采用麥克馬斯特氏法（McMaster's method）檢測每克糞便中的蟲卵數(shù)（eggs per gram，EPG），以確定犬蛔蟲感染強(qiáng)度。取2 g 糞便放入燒杯內(nèi)壓碎，加入飽和鹽水58 mL 充分振蕩混合，通過糞篩過濾，后邊搖晃邊用吸管吸出少量濾液，滴入LED 蟲卵計(jì)數(shù)玻片裝置的兩個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)，置于載物臺(tái)上，靜置幾分鐘后，低倍鏡下將兩個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)所見蛔蟲卵全部數(shù)完，取平均值后乘以200，即為EPG。

1.5 蟲卵形態(tài)學(xué)鑒定及體外發(fā)育觀察

將收集的犬糞加清水浸泡，搗碎過100 目篩，將濾液離心（3 000 r/min，10 min）取沉淀，加飽和鹽水漂浮，取上清，離心（1 500 r/min，10 min），棄上清后加5 倍體積清水，離心（3 000 r/min，10 min），沉淀即是目標(biāo)蟲卵。如沉淀中雜質(zhì)太多可重復(fù)上述步驟，直至洗去多量雜質(zhì)。將收集的蟲卵置于六孔板并加入生理鹽水（含雙抗），在25 ℃溫箱中培養(yǎng)15 d。每天搖勻并及時(shí)補(bǔ)充水分，倒置顯微鏡下觀察蟲卵的發(fā)育情況并拍照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad Prism 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，得到χ2及P值，P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 蟲卵形態(tài)學(xué)特征

在136 份糞樣中，共發(fā)現(xiàn)犬弓首蛔蟲和獅弓蛔蟲兩種蛔蟲卵（圖1）。犬弓首蛔蟲卵平均直徑為84.78 μm，呈黃褐色，近圓形，卵殼較厚，卵黃膜、殼質(zhì)層和脂層明顯，外殼有許多凹陷，表面不平整，內(nèi)含單個(gè)較大卵細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)充滿卵黃顆粒，卵細(xì)胞與卵殼間空隙較少；獅弓蛔蟲卵長、短軸平均長度分別為85.49 μm、71.44 μm，呈黃色，近橢圓形，卵殼較薄，內(nèi)外界膜界限清晰，外殼光滑，卵內(nèi)有未分化的單個(gè)呈圓形卵細(xì)胞，有清晰的細(xì)胞膜界限，細(xì)胞和卵殼間的間隙較大，有“新月狀”空隙。

圖1 犬蛔蟲卵形態(tài)

2.2 感染率

對(duì)犬糞樣采用飽和鹽水漂浮法，從136 份樣品中檢出陽性12 份，陽性率為8.82%（表1），陽性糞樣全部來自流浪犬。其中：犬弓首蛔蟲陽性5 份，陽性率為3.68%（5/136）；獅弓蛔蟲陽性12 份，陽性率為8.82%（12/136）；犬弓首蛔蟲和獅弓蛔蟲混合感染糞樣5 份，混合感染陽性率為3.68%（5/136）。流浪犬與家養(yǎng)犬蛔蟲陽性率比較，χ2=5.484，P=0.019，差異顯著。

2.3 感染強(qiáng)度

經(jīng)麥克馬斯特氏法（McMaster's method）檢測，有6 份陽性糞樣可見大量蟲卵，EPG 為300～400，全部為獅弓蛔蟲卵（表1），其他6 份陽性糞樣未發(fā)現(xiàn)蟲卵。

表1 石河子市犬蛔蟲感染統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.4 獅弓蛔蟲卵體外發(fā)育觀察

利用顯微鏡對(duì)獅弓蛔蟲卵體外發(fā)育情況進(jìn)行觀察并拍照，包括新鮮蛔蟲卵、單細(xì)胞期、二分裂期、四分裂期、桑葚胚前期、桑葚胚期、腸胚期、幼蟲前期、幼蟲期及孵化期蛔蟲卵（圖2）。新鮮蟲卵：呈卵球形，卵細(xì)胞占據(jù)整個(gè)蟲卵；單細(xì)胞期：卵細(xì)胞邊界清晰，有“新月形”間隙；二、四分裂期：各卵細(xì)胞界限清晰，可見體積變小的2、4 個(gè)細(xì)胞；桑葚胚前期：可見10 個(gè)左右清晰細(xì)胞；桑葚胚期：約由32 個(gè)細(xì)胞構(gòu)成，形似桑葚；腸胚期：卵胚周圍有一層細(xì)胞圍繞，一側(cè)形成“腎形”凹陷；幼蟲前期：有似幼蟲形狀短粗結(jié)構(gòu)，環(huán)繞于卵內(nèi)不形成圓環(huán)，呈“J”字形；幼蟲期：清晰可見幼蟲在卵內(nèi)活動(dòng)，呈“6、8”字形；幼蟲孵化期：卵殼破裂，整個(gè)結(jié)構(gòu)塌陷，幼蟲從孔隙中鉆出。

圖2 獅弓蛔蟲卵各階段體外發(fā)育情況

3 討論

犬蛔蟲病是由犬弓首蛔蟲、獅弓蛔蟲感染引起的疾病，在世界范圍內(nèi)廣泛流行。人類尤其是兒童常經(jīng)口攝入犬弓首蛔蟲卵而感染[6-8]。感染人后其幼蟲常在組織器官內(nèi)移行，引起眼幼蟲移行癥（ocular larva migrans，OLM）、內(nèi)臟幼蟲移行癥（visceral larva migrans，VLM）、嗜酸性腦膜炎（eosinophilic meningoencephalitis，EME）、隱性弓蛔蟲?。╟overt toxocariasis，CT）等多種疾病[9-11]，造成不可逆的損傷。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球犬弓首蛔蟲卵在公共場所的檢出率高達(dá)21%（16%～27%，13 895/42 797）[12]。我國人蛔蟲感染率為12.72%，感染人數(shù)約8 593 萬[13]。在美國該病血清陽性率為5%～15%，每年有超過1 萬例臨床病例；尼日利亞報(bào)告的兒童蛔蟲感染血清學(xué)陽性率高達(dá)80%[14]。該病的流行給人類健康帶來了嚴(yán)重危害。

全球犬弓首蛔蟲總體感染率為11.1%（10.6%～11.7%），不同地區(qū)流行率為6.4%～19.2%[15]。犬弓首蛔蟲和獅弓蛔蟲存在混合感染。Shalaby等[16]在埃及25 只犬中發(fā)現(xiàn)犬弓首蛔蟲和獅弓蛔蟲感染率分別為56.0%、8.0%，混合感染率為8.0%。犬蛔蟲感染率高低與犬年齡有關(guān)。楊萬蓮等[17]發(fā)現(xiàn)北京市感染蛔蟲的犬全為6 月齡內(nèi)幼犬，感染率為7.65%（241/3 152）。犬飼養(yǎng)方式會(huì)影響蛔蟲感染率。魏冬霞等[18]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，泰州市圈養(yǎng)、圈養(yǎng)加散養(yǎng)犬、散養(yǎng)犬蛔蟲感染率分別為15.57%、21.43%、41.67%。此外，犬飼養(yǎng)環(huán)境也會(huì)影響蛔蟲感染率。王銀等[19]在戶縣農(nóng)村發(fā)現(xiàn)120 只散養(yǎng)犬寄生蟲感染率為100%，其中犬弓首蛔蟲感染率為65.83%（79/120）。

本研究利用飽和鹽水漂浮法，對(duì)石河子市犬蛔蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)陽性糞樣均來自流浪犬，未從家養(yǎng)犬中檢出陽性，說明該地區(qū)家養(yǎng)犬寄生蟲防控效果較好。樣品中獅弓蛔蟲感染率最高，為8.82%（12/136），犬弓首蛔蟲感染率較低，為3.68%（5/136），說明該地犬以獅弓蛔蟲感染為主。本次調(diào)查的石河子市犬蛔蟲感染率略低于鄭州 市（11.32%，35/309）[20]、長沙市（12.80%，58/453）及懷化市（15.12%，18/119）[21]，差異不顯著（P＞0.05），明顯低于泰州市（18.34%，73/398）[22]、揚(yáng)州市（25.26%，123/487）[23]和全國（17.34%，4 246/24 490）[24]，差異極顯著（P＜0.01），說明石河子市犬蛔蟲感染不嚴(yán)重。這可能與石河子市降雨量小、土壤干燥，不利于蛔蟲卵在外環(huán)境中發(fā)育[25]以及采取的驅(qū)蟲措施有關(guān)。然而石河子市流浪犬中仍有一定的蛔蟲感染，說明環(huán)境中存在感染源，家養(yǎng)犬仍有潛在的感染危險(xiǎn)。本研究觀察到獅弓蛔蟲卵各發(fā)育階段的形態(tài)，發(fā)現(xiàn)獅弓蛔蟲卵體外發(fā)育各階段過程與其他蛔蟲類似[26]。目前國內(nèi)仍缺乏對(duì)獅弓蛔蟲卵體外發(fā)育形態(tài)變化的系統(tǒng)性描述，本研究補(bǔ)充和完善了獅弓蛔蟲卵體外發(fā)育形態(tài)變化的連續(xù)性和完整性，豐富了獅弓蛔蟲的流行病學(xué)信息，有助于環(huán)境中獅弓蛔蟲卵發(fā)育階段鑒定，可為糞便、污水處理時(shí)感染性蟲卵污染情況確定提供參考，對(duì)防控由獅弓蛔蟲引起的犬蛔蟲病具有重要價(jià)值[27]。

4 結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)，相比全國其他地區(qū)，石河子市犬蛔蟲感染程度整體較輕，尤其是家養(yǎng)犬防治效果較好，但流浪犬仍存在一定的感染，今后需要重點(diǎn)加強(qiáng)流浪犬蛔蟲病防控。