金線蓮及近緣種揮發(fā)油化學(xué)成分研究

錢(qián)麗萍 陳阿虹 陳婉清 李唯 彭華毅 闕慧卿 林綏

【摘 要】 目的：分析比較不同生長(zhǎng)期、不同產(chǎn)地的金線蓮、臺(tái)灣銀線蘭和滇南開(kāi)唇蘭揮發(fā)油化學(xué)成分。方法：采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，通過(guò)GC-MS檢測(cè)，分析比較不同生長(zhǎng)期、不同產(chǎn)地的金線蓮、臺(tái)灣銀線蘭和滇南開(kāi)唇蘭揮發(fā)油化學(xué)成分。結(jié)果：從1月齡、2月齡、6月齡福建三明金線蓮、福建寧德金線蓮、福建南平金線蓮、臺(tái)灣銀線蘭和滇南開(kāi)唇蘭中分別分離鑒定了13（1）、22（2）、28（3）、22（4）、10（5）、32（6）和53（7）個(gè)化合物，占揮發(fā)油總量的93.53%、96.98%、94.53%、92.44%、84.32%、89.16%和83.18%。其中，2，3，3-三甲基己烷、亞油酸和棕櫚酸為共有成分，2，2，4，6，6，-五甲基庚烷，2，6，11，15-四甲基十六烷、2，6，10-三甲基十二烷、3，8-二甲基十一烷、4-乙基十一烷和5-（2-甲基丙基）壬烷為臺(tái)灣銀線蘭和滇南開(kāi)唇蘭單獨(dú)共有成分。結(jié)論：該研究為開(kāi)唇蘭屬藥用植物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 金線蓮;臺(tái)灣銀線蘭;滇南開(kāi)唇蘭;揮發(fā)油;氣相色譜-質(zhì)譜法;化學(xué)成分

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）12-0000-00

Abstract：Objective Analyze chemical constituents of volatile oils from Anoectochilus roxburghii of different periods and regions，Anoectochilus formosanus and Anoectochilus burmannicus. Methods Volatile oils were subjected to GC-MS analysis，which extracted by water steam distillation from Anoectochilus roxburghii of different periods and regions，Anoectochilus formosanus and Anoectochilus burmannicus，and the chemical constituents of volatile oils from different samples were compared. Results 13（1），22（2），28（3），22（4），10（5），32（6） and 53（7） compounds were identified from Fujian Sanming A. roxburghii with one-month，two-month，six-month harvest period，F(xiàn)ujian Ningde A. roxburghii， Fujian Nanping A. roxburghii，A. formosanus and A. burmannicus，which were 93.53%，96.98%，94.53%，89.16% and 95.52% of the total volatile oils，respectively. Among them，2，3，3-Trimethylhexane，linoleic acid and palmitic acid were the common components，2，2，4，6，6-Pentamethylheptane，2，6，11，15-Tetramethylhexadecane，2，6，10-Trimethyldodecane，3，8-Dimethylundecane，4-Ethylundecane and 5-（2-Methylpropyl）nonane were the common components of Anoectochilus formosanus and Anoectochilus burmannicus alone. Conclusion This study provides basic data for the further development and utilization of medicinal plants of Anoectochilus.

Keywords：A. roxburghii; A. formosanus; A. burmannicus; Volatile oils; GC-MS; Chemical constituents

金線蓮（Anoectochilus roxburghii（Wall.） Lindl.）是開(kāi)唇蘭屬（Anoectochilus）草本植物，有“藥王”“金草”的美稱(chēng)，別名金線蘭、金蠶、金石松等[1，2]，主要分布于福建、廣西、云南、臺(tái)灣等地。金線蓮全草入藥，具有清熱涼血、祛風(fēng)利濕功效[3，4]，主要用于糖尿病、血尿、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[5]。金線蓮（Anoectochilus roxburghii）、臺(tái)灣銀線蘭（Anoectochilus formosanus）和滇南開(kāi)唇蘭（Anoectochilus burmannicus）均來(lái)源于蘭科開(kāi)唇蘭屬，是親緣關(guān)系相近的3種植物。臺(tái)灣銀線蘭具有清火，解熱，降血壓的功效，用于治療肝脾病、肺癆肺病、血熱吐血、肝火等[6]?，F(xiàn)代藥理研究表明，三種植物的水提物、多糖、黃酮等活性成分，具有抗炎[7-9]、抗氧化[9-11]活性。金線蓮作為民間名貴藥材，其揮發(fā)油主要有棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸等活性成分，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用[12，13]，而臺(tái)灣銀線蘭和滇南開(kāi)唇蘭揮發(fā)油活性目前未見(jiàn)報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)，不同栽培方式金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分種類(lèi)和含量存在差異[14，15]，而不同生長(zhǎng)期金線蓮及其近源種揮發(fā)油化學(xué)成分對(duì)比分析目前未見(jiàn)報(bào)道。為此，本課題對(duì)這三種植物揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行比較研究，為開(kāi)唇蘭屬藥用植物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料

1.1 原料藥材 5份金線蓮（A.roxburghii）、1份臺(tái)灣銀線蘭（A.formosanus）、1份滇南開(kāi)唇蘭（A.burmannicus）（表1），由福建省華之韻生物科技有限公司提供，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)（藥用植物學(xué)/中藥鑒定）楊成梓副教授及褚克丹教授鑒定。

1.2 儀器與試劑 Angilent 7890A GC/7000QQQB串聯(lián)四級(jí)桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Angilent科技有限公司）;KQ2200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;AL204型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）;Centrifuge 5810 R高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）;RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）;SHZ-III型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）;ABZ1-0501-P型艾科浦超純水系統(tǒng)（頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司）。

試驗(yàn)用試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取 各稱(chēng)取金線蓮及其近緣種藥材50 g，剪碎成約0.5 cm小段，置于1 L容量瓶中，加入水500 mL，浸泡24 h后，自動(dòng)攪拌機(jī)攪拌1 h，再置于揮發(fā)油提取器中微沸狀態(tài)提取15 h，收集提取液中的揮發(fā)油，加入乙醚萃取，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，離心后取上清，進(jìn)樣前用乙醚稀釋成適當(dāng)濃度，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，備用。

2.2 揮發(fā)油的GC-MS分析 色譜柱：石英毛細(xì)管柱DB-1MS （30 m×0.25 mm×0.25 μm;柱溫：40 ℃，以4 ℃/min升溫到250 ℃保持5 min），進(jìn)樣口溫度：250 ℃;載氣為高純度氦氣，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：0.5 μL;不分流。 質(zhì)譜條件：離子源為EI源，離子源溫度230 ℃，電子能源70 eV，接口溫度280 ℃，四級(jí)桿溫度150 ℃，質(zhì)量掃描范圍為30～500 amu，電子倍增器電壓為1381 eV;定性分析通過(guò)NITS08.L標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫(kù)檢索定性，同時(shí)采用峰面積歸一化法計(jì)算組分的相對(duì)含量。

3 結(jié)果

金線蓮及其近源種揮發(fā)油通過(guò)上述GC-MS條件分析，根據(jù)NITS08.L標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫(kù)檢索，采用峰面積歸一化法計(jì)算組分的相對(duì)百分含量，從7個(gè)樣品揮發(fā)油中鑒定了13（1）、22（2）、28（3）、22（4）、10（5）、32（6）和53（7）個(gè)化合物，分別占揮發(fā)油總量的93.53%、96.98%、94.53%、92.44%、84.32%、89.16%和83.18%，總離子流圖如圖1-圖7所示，化學(xué)成分分析結(jié)果如表2所示。

4 討論

4.1 不同生長(zhǎng)期、不同產(chǎn)地的金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分既有共性，也有個(gè)性。

從表2可知，5份金線蓮樣品的揮發(fā)油化學(xué)成分以酸類(lèi)化合物為主，其中，亞油酸和棕櫚酸含量較高，它們是揮發(fā)油的主要活性物質(zhì)，具有降低血液膽固醇 [15]和抑制腫瘤[16]活性。對(duì)鑒定出的化學(xué)成分進(jìn)行對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)6月齡福建三明金線蓮含有0.03%酮類(lèi)化合物，較其他樣品化學(xué)種類(lèi)數(shù)豐富。文獻(xiàn)報(bào)道不同栽培模式（組培和地栽）[17，18]、不同光照度[19]、不同移栽月齡[20，21]和不同地理種源[22]的福建金線蓮主要活性成分（多糖、總黃酮等）存在差異，這些可能也是引起不同生長(zhǎng)期、不同產(chǎn)地金線蓮揮發(fā)油成分和含量差異的重要原因。

4.2 不同品種的開(kāi)唇蘭屬植物揮發(fā)油化學(xué)成分含量和種類(lèi)存在差異性。

通過(guò)對(duì)金線蓮、臺(tái)灣銀線蘭和滇南開(kāi)唇蘭7份樣品揮發(fā)油化學(xué)成分對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，2，3，3-三甲基己烷、亞油酸和棕櫚酸為共有成分。2，2，4，6，6-五甲基庚烷、2，6，11，15-四甲基十六烷、2，6，10-三甲基十二烷、3，8-二甲基十一烷、4-乙基十一烷和5-（2-甲基丙基）壬烷為臺(tái)灣銀線蘭和滇南開(kāi)唇蘭單獨(dú)共有成分。此外，本實(shí)驗(yàn)檢出臺(tái)灣銀線蘭揮發(fā)油含有順式-10-十七碳烯酸（30.08%），其含量約為1月齡滇南開(kāi)唇蘭揮發(fā)油中順式-10-十七碳烯酸[23]的18倍。不同種之間的揮發(fā)油化學(xué)成分含量和種類(lèi)存在差異。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)GC-MS檢測(cè)分析了金線蓮及其近源種揮發(fā)油化學(xué)成分，結(jié)果表明金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分受生長(zhǎng)期和產(chǎn)地的影響，而同屬不同種藥物之間的揮發(fā)油化學(xué)成分存在差異。本實(shí)驗(yàn)研究為開(kāi)唇蘭屬藥用植物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

致謝：各個(gè)金線蓮品種均由福建省華芝韻生物科技有限公司提供，由福建中醫(yī)藥大學(xué)（藥用植物學(xué)/中藥鑒定）楊成梓副教授及褚克丹教授鑒定，GC-MS是由福建省檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心的曹潔及彭華毅檢測(cè)。

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（收稿日期： 編輯）