• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中國漢族ADRP一家系RHO基因變異基因型及臨床表型分析

    2021-08-23 03:11:30張玉薇婁桂予楊科陽琳朱青雷博
    中華實驗眼科雜志 2021年8期
    關(guān)鍵詞:錯義證者家系

    張玉薇 婁桂予 楊科 陽琳 朱青 雷博

    1河南省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)遺傳研究所 河南省遺傳性疾病功能基因重點實驗室,鄭州450003;2河南省人民醫(yī)院 河南省眼科研究所 河南省立眼科醫(yī)院,鄭州 450003

    視網(wǎng)膜色素變性(retinitis pigmentosa,RP)是一類常見的遺傳性眼病,全球患病率為1/7 000~1/3 000,其在中國的患病率約為1/4 000[1-2]。RP患者多在兒童和青少年時期發(fā)病,主要表現(xiàn)為夜盲、進行性視野缺損、視力下降和視網(wǎng)膜骨細胞樣色素沉著,其病理過程為視桿細胞首先出現(xiàn)進行性變性,進而視錐細胞受累,最終導(dǎo)致視桿和視錐細胞及色素上皮功能喪失[3]。RP的診斷主要依據(jù)眼底、視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram,ERG)和視野檢查,特殊情況可考慮光相干斷層掃描檢查。臨床上尚無控制RP進展及治療RP的有效方法,明確病因、植入前進行分子診斷、降低攜帶致病突變患兒的出生率是降低RP患病率的有效方法。RP具有高度遺傳異質(zhì)性,目前已鑒定的致病基因約有96個(https://sph.uth.edu/retnet/)。RP的遺傳方式有常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳和X染色體連鎖遺傳,少數(shù)患者可表現(xiàn)為雙基因遺傳及線粒體遺傳[4]。由于RP表現(xiàn)出高度的遺傳異質(zhì)性和臨床表型多樣性,鑒定RP患者的致病基因?qū)τ谡_的分類和診斷至關(guān)重要[5-6]。本研究擬對常染色體顯性遺傳視網(wǎng)膜色素變性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)一家系的致病基因和臨床表型進行分析。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    采用家系調(diào)查研究,收集2019年11月于河南省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)遺傳研究所進行遺傳咨詢的來自河南省東部地區(qū)的漢族RP一家系,納入該家系4代20名成員,包括9例患者和11名表型正常者。本研究遵循《赫爾辛基宣言》,經(jīng)河南省人民醫(yī)院倫理委員會審核批準[批文號:HNEECKY-2019(15號)],所有受檢者均簽署知情同意書。

    1.2 方法

    1.2.1臨床檢查 采用標準對數(shù)視力表(i.Polatest,德國Carl Zeiss AG公司)測定視力,免擴瞳眼底照相機(VISUCAM-200,德國Carl Zeiss AG公司)檢查眼底,眼電生理診斷系統(tǒng)(RET1-Port 21 compact,德國羅蘭公司)檢查視網(wǎng)膜功能,視野分析儀(840,德國Carl Zeiss AG公司)檢查視野。

    1.2.2基因檢測 采集先證者及家系成員外周靜脈血各2 ml,置于EDTA抗凝管,混勻后按照DNA提取試劑盒(德國Qiagen公司)步驟提取DNA,Qubit?2.0(美國Life Technologies公司)對DNA定量。采用高通量測序儀(Ion Torrent PGM,美國ABI公司)進行基因檢測。

    1.2.2.1Ion AmpliSeq引物包建庫及靶向測序 采用Ion AmpliSeq Designer(https://www.ampliseq.com)設(shè)計覆蓋43個RP基因外顯子區(qū)域,包含1 187個擴增子的AmpliSeq引物包,并由美國Life Technologies公司合成。按照Ion AmpliSeq Library Kit 2.0建庫試劑盒(美國Life Technologies公司)流程對先證者進行靶向外顯子建庫,Qubit-dsDNA-HS試劑盒(美國Life Technologies公司)對制備的文庫進行定量檢測,高通量測序儀測序。采用Ion Torrent Suite v5.6系統(tǒng)進行Ion Torrent數(shù)據(jù)質(zhì)控、序列比對及單核苷酸變異(single nucleotide variations,SNVs)和插入缺失(inserts and deletions,indels)變異檢測。質(zhì)控數(shù)據(jù)顯示,靶向外顯子平均覆蓋度為99.94%,平均測序深度為300×。得到的SNVs和indels經(jīng)dbSNP 138數(shù)據(jù)庫過濾后,檢索HGMD、NCBI等數(shù)據(jù)庫匹配已報道的致病位點。對發(fā)現(xiàn)的可疑致病突變采用Sanger測序進行驗證。

    1.2.2.2PCR反應(yīng)及Sanger法測序 根據(jù)變異序列采用primer blast在線(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)設(shè)計引物,由上海生工生物有限公司合成。擴增含有變異的外顯子,對PCR片段進行純化和測序。序列數(shù)據(jù)文件采用SeqMan Pro軟件8.1.4版(DNASTAR)分析。

    1.2.3數(shù)據(jù)分析 采用在線軟件(http://www.mutationtaster.org/、http://bioinf.cs.ucl.ac.uk/psipred/和https://swissmodel.expasy.org/)預(yù)測變異位點蛋白功能及空間結(jié)構(gòu)。采用ClustalW2多重比對程序?qū)θ?Genbank:NP_000530.1)、牛(Genbank:NP_001014890.1)、家犬(Genbank:NP_001008277.1)、黑猩猩(Genbank:XP_516740.2)、貓(Genbank:NP_001009242.1)及小鼠(Genbank:NP_663358.1)視紫紅質(zhì)(rhodopsin,RHO)蛋白的氨基酸序列進行比較(http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/)。根據(jù)ACMG遺傳變異分類標準與指南判斷變異位點致病性[7]。

    2 結(jié)果

    2.1 家系患者臨床特點

    該家系4代共有9例RP患者,符合常染色體顯性遺傳方式(圖1)。先證者,男,26歲,自幼雙眼夜盲,視力右眼0.25,左眼0.5。雙眼視網(wǎng)膜有骨細胞樣色素沉著,視網(wǎng)膜血管變細,視盤顏色變淡(圖2);全視野ERG檢查結(jié)果顯示,暗適應(yīng)a波和b波峰值降低;明適應(yīng)a波和b波峰值重度降低;暗適應(yīng)震蕩電位重度下降;明適應(yīng)3 ERG a、b波均重度下降;明適應(yīng)30 Hz閃爍ERG右眼振幅中度下降,左眼振幅輕度下降(圖3)。家系成員患者的共同表現(xiàn)為7~10歲開始出現(xiàn)夜盲,約50歲時周邊視力完全喪失。

    2.2 靶向基因高通量測序

    該家系檢測到RHO基因(NM_000539.3)5號外顯子中的1個雜合錯義變異c.982delC(p.L328fs)。經(jīng)Mutation taster軟件預(yù)測,該變異導(dǎo)致編碼序列第328位氨基酸處的亮氨酸缺失并發(fā)生移碼,改變了包括第328位氨基酸以后的21個氨基酸,造成終止密碼子改變,使編碼區(qū)由348個氨基酸增加到358個氨基酸,預(yù)測變異可導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生改變(圖4)。

    2.3 RHO基因c.982delC變異Sanger測序驗證及致病性分析

    臨床診斷為RP的患者(Ⅱ1、Ⅲ1、Ⅲ3、Ⅲ5、Ⅲ8、Ⅳ1、Ⅳ2和Ⅳ5)均檢測到了c.982delC變異,無癥狀成員未檢測到該位點變異。RHO基因編碼RHO蛋白的多個同源序列比對分析表明,6個不同物種之間第328位亮氨酸殘基(p.L328)均保守(圖5)。根據(jù)ACMG遺傳變異分類標準與指南判斷:(1)缺失移碼變異屬于非常強的致病性證據(jù)(PVS1);(2)該變異在ExAC和千人基因組數(shù)據(jù)庫中均未被收錄,屬于中等致病性證據(jù)(PM2);(3)HGMD(CM973326)和Retina International數(shù)據(jù)庫(http://www.retina-international.org)曾報告RHO基因編碼第328氨基酸的堿基錯義致病變異,其中Leu(密碼子:GAG)被Pro取代,屬于中等致病性證據(jù)(PM5);(4)家系多個患者中檢測到此變異,變異與疾病在家系中共分離,屬于支持致病性證據(jù)(PP1);(5)Mutation taster軟件預(yù)測該缺失移碼變異偏向致病性,屬于支持致病性證據(jù)(PP3);(6)家系患病成員臨床表型符合RP,屬于支持致病性證據(jù)(PP4)。綜上,該變異具有1個非常強的致病性證據(jù)PVS1,2個中等致病證據(jù)PM2,3個支持致病證據(jù)PP1、PP3、PP4,屬于致病性變異。

    3 討論

    RP是常見的眼科遺傳病,在已發(fā)現(xiàn)的96個致病基因中,有30個基因表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳,基因檢測是對ADRP進行分子診斷的重要依據(jù)。二代測序技術(shù)是目前臨床上用于檢測基因變異的一種可行、省時的方法[8]。本研究采用引物包靶向擴增高通量測序的方法,與全外顯子測序相比,本方法適用于單種疾病,有較高的性價比,分析有針對性,且操作快捷、簡單。對于涉及幾十種基因的RP,靶向包測序的方法更加適用。

    本研究在該家系中檢測到了RHO基因c.982delC雜合變異。RHO基因編碼含有348個氨基酸的RHO蛋白,RHO是G蛋白偶聯(lián)受體超家族的成員之一,RHO蛋白C端第310~349位氨基酸可與11-順-視黃醛形成功能性發(fā)色。當(dāng)光子照射到RHO時,11-順-視黃醛異構(gòu)化,在視桿細胞中啟動光轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)[9],在將光能轉(zhuǎn)換為電能的光轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著關(guān)鍵作用。C端變異影響RHO在高爾基體的轉(zhuǎn)運,并損害光感受器外段的正常功能[10]。RHO蛋白C端的重要靶向序列VXPX-COOH也控制著視桿細胞外段的感光功能,其基序VXPX的缺失會導(dǎo)致RP[11-12]。該家系中RHO基因的c.982delC移碼變異改變了高度保守的氨基酸殘基328~349區(qū)域,其中包括VXPX基序,該變異很可能通過破壞RHO蛋白的正常光轉(zhuǎn)導(dǎo)功能而致病。

    RHO錯義變異是RP中較常見的變異類型,在中國人群中RHO變異占所有RP病例的1.30%~5.65%,占ADRP的8.11%~15.00%[13],而在高加索人群中,RHO變異占ADRP的16%~26%。在一項對200名西班牙RP先證者的研究中發(fā)現(xiàn),27個RHO變異中有25個是錯義變異[14]。在另外一項涉及中國248名RP先證者的研究中,檢出的錯義變異占RHO變異的87.5%(7/8)[15]。HGMD和Retina International數(shù)據(jù)庫曾收錄RHO基因編碼第328位氨基酸的堿基錯義變異,其中Leu(密碼子:GAG)被Pro取代。截至目前,RHO基因的c.982delC(p.L328fs)移碼變異未在大的家系中被報道。Sullivan等[16]在散發(fā)病例中檢測到該變異,但未對該變異的致病性進行詳細說明。另一項研究試圖用高通量細胞學(xué)方法來篩選RHO在細胞中的表達以分析該變異的致病性,但并未得到確切的結(jié)果[17]。本研究為首次在中國漢族RP家系中對該變異進行驗證。

    RHO變異導(dǎo)致的RP有一定的基因型和表型的相關(guān)性。RHO中的錯義變異與象限型RP相關(guān)[18]。RHO蛋白COOH末端序列的變異與早發(fā)性侵襲性RP相關(guān)[19]。本研究中RP家系的臨床表現(xiàn)與之前報道的相似,即患者青少年時期即出現(xiàn)夜盲,在50多歲時出現(xiàn)嚴重視力損害,包括中心視力喪失。本家系患病成員雖然攜帶有相同的致病突變位點,但由于個體差異,臨床表現(xiàn)也不盡相同,如視力、視野等。先證者的主要目的是進行遺傳咨詢,我們?yōu)樵撓茸C者找到了高度可疑的致病突變。以此為基礎(chǔ),本課題組正在構(gòu)建小鼠動物模型,以進一步探索該突變的致病機制。

    綜上所述,本研究通過對中國漢族ADRP一家系的研究證實了RHO基因c.982delC雜合變異的致病性,該突變在中國漢族家系中首次報道。本研究為指導(dǎo)該家系成員的優(yōu)生優(yōu)育提供了分子診斷依據(jù),并且該發(fā)現(xiàn)豐富了RP致病突變數(shù)據(jù)庫信息,為深入研究RP的致病機制提供了新的線索。

    利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

    猜你喜歡
    錯義證者家系
    利用AlphaMissense準確預(yù)測蛋白質(zhì)組的錯義突變
    新生兒異常Hb Q的家系分析*
    初雪
    GJA8基因錯義突變致先天性白內(nèi)障一家系遺傳分析
    一個兩次多囊腎胎兒孕育史家系的臨床分析及遺傳咨詢
    1例肝豆狀核變性合并杜興型肌營養(yǎng)不良癥及其家系報道
    傳染病信息(2019年2期)2019-05-17 13:16:04
    馬氏珠母貝紅色閉殼肌F1代的家系選育及家系評定
    一個非綜合征型聾家系的分子病因?qū)W研究
    肝豆狀核變性2個家系的基因突變分析
    1例AxB血型家系調(diào)查遺傳方式及血清學(xué)特點分析
    国产精品久久久久久精品电影小说| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 高清视频免费观看一区二区| 国产成人精品久久二区二区91 | 丰满迷人的少妇在线观看| 日本欧美国产在线视频| 国产色婷婷99| 成年美女黄网站色视频大全免费| 女人精品久久久久毛片| 美女福利国产在线| 老汉色∧v一级毛片| 97在线人人人人妻| 在线天堂最新版资源| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 精品亚洲成a人片在线观看| 91精品三级在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 制服人妻中文乱码| 超碰97精品在线观看| 1024香蕉在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产精品嫩草影院av在线观看| 成年av动漫网址| 久久久久精品人妻al黑| 69精品国产乱码久久久| 午夜日韩欧美国产| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜91福利影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产av精品麻豆| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品国产av成人精品| 97在线人人人人妻| 永久免费av网站大全| 国产精品人妻久久久影院| 午夜福利影视在线免费观看| 在线观看一区二区三区激情| 交换朋友夫妻互换小说| 777米奇影视久久| 亚洲精品国产av成人精品| 国产亚洲精品第一综合不卡| 在线看a的网站| 国产成人欧美在线观看 | 一级爰片在线观看| 国产成人精品久久二区二区91 | 老熟女久久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 99热网站在线观看| 久久久久网色| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美精品一区二区大全| 日本wwww免费看| av网站在线播放免费| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品一品国产午夜福利视频| 只有这里有精品99| 久久 成人 亚洲| 纯流量卡能插随身wifi吗| 成年人免费黄色播放视频| 日本av免费视频播放| 天堂8中文在线网| 999精品在线视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产精品成人在线| 天堂8中文在线网| 丝袜在线中文字幕| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品人妻久久久影院| 不卡av一区二区三区| 久久精品久久久久久久性| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 免费黄色在线免费观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 日日啪夜夜爽| 免费看不卡的av| 老司机影院毛片| 国产 一区精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美精品亚洲一区二区| 久久精品国产a三级三级三级| 免费看不卡的av| 久久人妻熟女aⅴ| 在线观看免费午夜福利视频| 多毛熟女@视频| 丰满少妇做爰视频| 韩国高清视频一区二区三区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 91精品三级在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线 av 中文字幕| 精品人妻在线不人妻| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美另类一区| 亚洲精品国产区一区二| 丝袜美腿诱惑在线| 黑人猛操日本美女一级片| 日韩一区二区三区影片| 国产一区二区激情短视频 | 欧美精品一区二区免费开放| 久久精品国产综合久久久| 日本91视频免费播放| 黑丝袜美女国产一区| 女人精品久久久久毛片| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 亚洲第一av免费看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 美女福利国产在线| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产伦人伦偷精品视频| 中国国产av一级| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久久国产精品麻豆| 亚洲免费av在线视频| 老司机亚洲免费影院| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 婷婷色麻豆天堂久久| 观看美女的网站| 午夜精品国产一区二区电影| 天天添夜夜摸| av天堂久久9| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 精品国产露脸久久av麻豆| xxx大片免费视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲一区二区三区欧美精品| 丝袜美足系列| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成人91sexporn| 在线 av 中文字幕| 黄色视频不卡| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久久久久国产电影| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 天堂中文最新版在线下载| 欧美另类一区| 亚洲精品一区蜜桃| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 亚洲国产看品久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 老司机影院成人| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲伊人久久精品综合| 一区二区三区激情视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品女同一区二区软件| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 欧美在线一区亚洲| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产在线一区二区三区精| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日日爽夜夜爽网站| 人妻 亚洲 视频| 制服诱惑二区| 老司机深夜福利视频在线观看 | 久久久久久人人人人人| 国产成人精品久久久久久| 国产高清国产精品国产三级| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美在线一区亚洲| 午夜日韩欧美国产| 久久av网站| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲熟女毛片儿| www.av在线官网国产| 中国三级夫妇交换| 婷婷成人精品国产| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线看a的网站| 午夜免费鲁丝| 91成人精品电影| 国产极品天堂在线| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲美女视频黄频| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 热re99久久国产66热| 美女中出高潮动态图| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲国产精品999| e午夜精品久久久久久久| 国产精品一区二区精品视频观看| 午夜福利在线免费观看网站| 人人澡人人妻人| 在线观看人妻少妇| 免费观看a级毛片全部| 高清欧美精品videossex| 亚洲欧美成人精品一区二区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久精品久久久久久久性| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 中文字幕最新亚洲高清| 日本欧美视频一区| 少妇人妻 视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美激情高清一区二区三区 | 伦理电影大哥的女人| 日本av免费视频播放| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 最近中文字幕高清免费大全6| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产成人精品无人区| 精品久久蜜臀av无| 不卡av一区二区三区| 无遮挡黄片免费观看| 人体艺术视频欧美日本| 这个男人来自地球电影免费观看 | 久久av网站| 亚洲美女黄色视频免费看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 一级黄片播放器| 黄片小视频在线播放| 婷婷色麻豆天堂久久| 日韩av免费高清视频| 成年人午夜在线观看视频| 日韩电影二区| 天天添夜夜摸| 中文字幕色久视频| 老司机亚洲免费影院| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲美女视频黄频| 亚洲精品国产区一区二| 午夜日本视频在线| 美女国产高潮福利片在线看| 精品国产乱码久久久久久男人| 观看美女的网站| 久久狼人影院| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 蜜桃国产av成人99| 最新的欧美精品一区二区| 最近手机中文字幕大全| 亚洲精品美女久久av网站| 2018国产大陆天天弄谢| 精品亚洲成国产av| 又大又黄又爽视频免费| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久天堂一区二区三区四区| 国产激情久久老熟女| 国产深夜福利视频在线观看| 免费观看a级毛片全部| 日韩 亚洲 欧美在线| 夫妻性生交免费视频一级片| av国产精品久久久久影院| 精品视频人人做人人爽| xxx大片免费视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲天堂av无毛| 水蜜桃什么品种好| 51午夜福利影视在线观看| 丁香六月欧美| 91精品三级在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 男女午夜视频在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品国产三级国产专区5o| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产在线一区二区三区精| 两性夫妻黄色片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 香蕉丝袜av| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 丰满乱子伦码专区| 午夜福利乱码中文字幕| 日韩大片免费观看网站| 九九爱精品视频在线观看| 国产黄色免费在线视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 999精品在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| 我要看黄色一级片免费的| 久久久久久久久久久免费av| 国产成人免费无遮挡视频| 久久av网站| 免费av中文字幕在线| 国产一区有黄有色的免费视频| 日本wwww免费看| 悠悠久久av| 免费高清在线观看视频在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 伦理电影大哥的女人| 国产成人av激情在线播放| 成年动漫av网址| 亚洲国产av影院在线观看| 国产成人欧美| 波多野结衣一区麻豆| 国产乱来视频区| 男女下面插进去视频免费观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 黄色怎么调成土黄色| 久久久精品免费免费高清| 亚洲国产欧美在线一区| 午夜影院在线不卡| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品久久久久久电影网| 三上悠亚av全集在线观看| 只有这里有精品99| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美女大奶头黄色视频| 最近手机中文字幕大全| 黄频高清免费视频| 老司机深夜福利视频在线观看 | 日韩,欧美,国产一区二区三区| av一本久久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 看十八女毛片水多多多| 国产男女内射视频| 成年av动漫网址| 日韩av在线免费看完整版不卡| 9191精品国产免费久久| 高清在线视频一区二区三区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| www.精华液| 国产精品久久久久久精品古装| 大香蕉久久网| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲av综合色区一区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一边亲一边摸免费视频| 九色亚洲精品在线播放| 午夜福利一区二区在线看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 一区二区三区精品91| 亚洲国产欧美网| 两个人免费观看高清视频| 国产精品一国产av| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产日韩欧美在线精品| 国产黄色免费在线视频| 中文字幕高清在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 操出白浆在线播放| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 大香蕉久久成人网| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲欧洲日产国产| tube8黄色片| 七月丁香在线播放| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产伦理片在线播放av一区| 91老司机精品| 国产成人精品福利久久| 免费观看性生交大片5| 不卡视频在线观看欧美| 毛片一级片免费看久久久久| 免费高清在线观看日韩| 好男人视频免费观看在线| 国产高清不卡午夜福利| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 无限看片的www在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 日本欧美国产在线视频| 久久久久久久久久久久大奶| 国产乱来视频区| 一区二区三区精品91| 另类精品久久| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 97在线人人人人妻| 色综合欧美亚洲国产小说| avwww免费| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产午夜精品一二区理论片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产 精品1| 国产黄色免费在线视频| 国产一级毛片在线| 国产一区二区在线观看av| 十八禁高潮呻吟视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 少妇精品久久久久久久| 国产精品欧美亚洲77777| 国产又色又爽无遮挡免| 久久99热这里只频精品6学生| 成年人免费黄色播放视频| 国产1区2区3区精品| videosex国产| 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美精品一区二区大全| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美精品一区二区免费开放| 自线自在国产av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 男女午夜视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久热这里只有精品99| 久久影院123| 国产精品二区激情视频| 毛片一级片免费看久久久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 免费观看性生交大片5| 一级片'在线观看视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲国产精品999| 99热网站在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 母亲3免费完整高清在线观看| 色播在线永久视频| 高清视频免费观看一区二区| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 极品人妻少妇av视频| 超碰97精品在线观看| av网站免费在线观看视频| 亚洲国产av新网站| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 热re99久久国产66热| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产一区二区 视频在线| av在线老鸭窝| 国产麻豆69| 亚洲成人免费av在线播放| xxx大片免费视频| 另类亚洲欧美激情| 久久精品久久精品一区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 水蜜桃什么品种好| 69精品国产乱码久久久| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日本av免费视频播放| 热re99久久精品国产66热6| 男女免费视频国产| 欧美日韩福利视频一区二区| 在线观看三级黄色| 韩国av在线不卡| 亚洲人成电影观看| 韩国av在线不卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 少妇人妻精品综合一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品免费视频内射| 婷婷色麻豆天堂久久| 最近的中文字幕免费完整| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 永久免费av网站大全| 超碰成人久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 中文字幕高清在线视频| 看免费成人av毛片| 国产成人av激情在线播放| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产片内射在线| 老熟女久久久| 国产一区二区在线观看av| 日韩制服丝袜自拍偷拍| av福利片在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产 一区精品| 免费看av在线观看网站| 久久99精品国语久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲欧美一区二区三区国产| 中文天堂在线官网| 亚洲欧美一区二区三区国产| 高清黄色对白视频在线免费看| 99久国产av精品国产电影| 香蕉丝袜av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲欧美激情在线| 街头女战士在线观看网站| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品国产av在线观看| 亚洲国产av新网站| 18禁观看日本| 最新在线观看一区二区三区 | 久久人人爽人人片av| 大香蕉久久成人网| 欧美 日韩 精品 国产| 国产极品粉嫩免费观看在线| 午夜精品国产一区二区电影| 日本vs欧美在线观看视频| 久久久国产欧美日韩av| av片东京热男人的天堂| 精品人妻一区二区三区麻豆| 中文字幕色久视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 最近手机中文字幕大全| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品熟女久久久久浪| 黄频高清免费视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 伊人亚洲综合成人网| 97精品久久久久久久久久精品| 这个男人来自地球电影免费观看 | 视频在线观看一区二区三区| 午夜激情av网站| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产野战对白在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 999精品在线视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产深夜福利视频在线观看| 一级毛片 在线播放| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| av天堂久久9| 久久av网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 精品免费久久久久久久清纯 | 精品一区在线观看国产| 国产探花极品一区二区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 男女之事视频高清在线观看 | a 毛片基地| 国产黄频视频在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 一级毛片 在线播放| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美久久黑人一区二区| 久久久久精品人妻al黑| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久免费观看电影| 一区二区三区激情视频| 在线观看免费午夜福利视频| 国产野战对白在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美av亚洲av综合av国产av | 成年动漫av网址| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 大片免费播放器 马上看| 国产熟女欧美一区二区| 热99国产精品久久久久久7| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 1024视频免费在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久午夜综合久久蜜桃| 久久久久精品人妻al黑| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产成人精品久久二区二区91 | 欧美最新免费一区二区三区| 无限看片的www在线观看| a级毛片在线看网站| 欧美亚洲日本最大视频资源| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| av又黄又爽大尺度在线免费看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 天美传媒精品一区二区| 国产成人精品在线电影| 99久国产av精品国产电影| 色精品久久人妻99蜜桃| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 成人国语在线视频| 秋霞伦理黄片| 国产成人av激情在线播放| 90打野战视频偷拍视频| 精品国产国语对白av| 满18在线观看网站| 久热爱精品视频在线9| 国产黄频视频在线观看| av线在线观看网站| 欧美国产精品一级二级三级| 91精品三级在线观看| 精品久久久精品久久久| 午夜日本视频在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲精品国产av成人精品| 又大又爽又粗| 99久久人妻综合| 欧美国产精品一级二级三级| av有码第一页| 国产精品一区二区精品视频观看| 日韩伦理黄色片| 在线观看免费视频网站a站| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲精品国产区一区二| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 伊人亚洲综合成人网| 丝袜在线中文字幕| 少妇的丰满在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精|