飼糧中添加人參多糖對泌乳母兔生產性能及哺乳仔兔免疫性能的影響

■熊浩銘 郭勇慶 田漢晨 吳龍飛 鄧 銘 孫寶麗

（華南農業(yè)大學動物科學學院，廣東廣州510642）

兔作為經濟動物，其在我國肉品消費中占有重要地位，但兔腸胃功能與機體免疫功能較差，尤其是消化與免疫器官尚未發(fā)育完全的仔兔，其斷奶前后容易受到腹瀉等疾病的威脅從而死亡，給我國的養(yǎng)兔業(yè)帶來巨大的損失[1]。目前急需開發(fā)有效的新型飼料添加劑增強仔兔胃腸道功能和免疫功能。人參多糖(gin?seng polysaccharide,GPS)是從人參葉中提取的一種活性物質，具有抗腫瘤、抗氧化、抗病原體、抗高血糖、細胞保護、抗疲勞、增強免疫力、促生長等多種生物學作用[2-5]。已有對GPS的研究主要是其對動物體免疫功能的影響和它的抗腫瘤活性。人參莖葉為人參邊角料，但其中仍可提取出與人參根相同的藥用活性成分，可探索將這一資源運用于養(yǎng)兔業(yè)，起到替代抗生素的作用，為養(yǎng)兔業(yè)帶來經濟效益。GPS可通過提高動物體一氧化氮（NO）和細胞因子水平，提高血清補體水平，刺激脾淋巴細胞增殖，從而提高機體免疫力[6-7]。佟彤等[8]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠炎癥模型和免疫抑制模型中，添加GPS表現(xiàn)出對于免疫系統(tǒng)的調節(jié)功能，有利于維持機體內環(huán)境穩(wěn)態(tài)。張皖東等[9]研究發(fā)現(xiàn)，人參多糖和豬苓多糖能夠作用于大鼠腸道黏膜淋巴細胞，影響其腫瘤壞死因子-α和干擾素-γ的分泌，起到調節(jié)的作用。閆曉剛等[10]研究表明，在1～6周齡海蘭褐蛋雛雞飼糧中添加一定量的GPS可以提高飼料養(yǎng)分表觀代謝率，降低雛雞死亡率。孫偉麗等[11]在育成期雄性水貂飼糧中添加GPS，發(fā)現(xiàn)試驗組水貂生長性能、飼料消化率和免疫功能均得到改善。由此可見，GPS在機理研究和生產實踐中均表現(xiàn)出促生長、增強免疫力的效果。將GPS噴灑到母兔的飼料中，待母兔分娩后對仔兔的初生窩重、成活率、生長性能、免疫器官指數、血清部分生化指標、母兔初乳中免疫球蛋白含量進行測定。飼糧中添加GPS對泌乳母兔生產性能及哺乳仔兔免疫性能有無影響，尚無相關報道。本研究通過探究飼糧中添加GPS對泌乳母兔生產性能、初乳中免疫球蛋白及仔兔血清指標的影響，進而為開發(fā)GPS作為家兔飼糧添加劑提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計與試驗動物

采用單因子試驗設計。本研究選取36只妊娠10 d左右、遺傳背景相似的新西蘭種母兔，隨機分為3個處理，每個處理12只種母兔。分別在3個處理的飼糧中添加0、150、300 mg/kg GPS，分別命名為對照組、T150組、T300組。試驗飼糧根據NRC（1994）和中國兔飼養(yǎng)標準（2004）配制，飼糧組成和營養(yǎng)水平見表1。試驗預試期為7 d，正試驗為期34 d，包括種母兔妊娠期20 d，種母兔哺乳期14 d，試驗母兔采用單籠籠養(yǎng)，仔兔出生后采用母子隔離飼養(yǎng)，提供自由飲水和采食。

1.2 GPS獲取

將人參莖葉干燥并粉碎后，與去離子水以1∶10的固液比（g/mL）充分混合，并加熱煮沸，在100℃下攪拌2 h，冷卻后，在15 000×g和25℃下離心10 min，收集上清液。重復3次，最后通過旋轉蒸發(fā)器將3次獲得的上清液混合并在60℃下濃縮至適當體積。濃縮液中的蛋白質雜質通過孫曉玲的方法清除[12]，并將3倍體積的無水乙醇加入到無蛋白溶液中，沉淀24 h后在4 000×g下離心10 min，收集沉淀并在凍干機中干燥，即獲得干燥的GPS。

表1 基礎日糧組成和營養(yǎng)水平(干物質基礎)

1.3 測定指標與方法

1.3.1 母兔初乳中免疫球蛋白含量測定

仔兔出生后采用母子隔離飼養(yǎng)，從各處理組各隨機選取4只母兔，共12只，采集2 mL初乳。使用試劑盒（南京建成生物工程有限公司）檢測初乳中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）的含量。

1.3.2 仔兔的免疫指標的測定

于仔兔出生后第0、7、14 d從每個處理組隨機選取4只空腹仔兔，共36只，采集血清、肝臟、脾臟、胸腺，并稱量宰前活重、肝重、脾重、胸腺重。

計算胸腺指數、肝臟指數、脾臟指數，公式如下所示：

胸腺指數（%）=（胸腺重/宰前活重）×100

肝臟指數（%）=（肝臟重/宰前活重）×100

脾臟指數（%）=（脾臟重/宰前活重）×100

采集的仔兔血清使用試劑盒（南京建成生物工程有限公司）檢測血清白細胞介素-2（IL-2）和干擾素-γ（IFN-γ）含量。

1.3.3 仔兔平均窩重與成活數指標測定

于仔兔出生后第0 d記錄每窩窩產仔數、窩產活仔數、仔兔窩重，第7、14 d記錄窩活仔數、仔兔窩重，計算第0、7、14 d各個處理的仔兔平均重量、記錄各窩的仔兔成活數。

1.4 統(tǒng)計分析

試驗數據采用Excel軟件進行統(tǒng)計。采用SPSS 25軟件進行多重比較及方差分析，數據以“平均數和標準誤”（Means±SEM）的形式呈現(xiàn)。若P＜0.05，表示差異顯著，有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 添加人參多糖對泌乳母兔初乳中免疫球蛋白含量的影響

泌乳母兔初乳中免疫球蛋白含量如表2所示。由表2可知，與對照組相比，T150和T300兩個試驗組顯著提高了初乳中的IgA含量（P＜0.05），T150和T300組之間沒有顯著性差異（P＞0.05）；3個處理之間初乳IgM含量無顯著差異（P＞0.05）。

表2 人參多糖對泌乳母兔初乳中免疫球蛋白含量的影響(μl/mL)

2.2 添加人參多糖對仔兔免疫器官指數及血清IL-2、IFN-γ的影響

仔兔的胸腺、肝臟、脾臟指數見表3。由表3可知，添加人參多糖對仔兔出生第0、7、14 d的胸腺指數、脾臟指數、肝臟指數有一定提升，但未達到顯著水平(P＞0.05)。

表3 人參多糖對哺乳仔兔胸腺、肝臟、脾臟指數的影響(%)

由表4可知，在仔兔出生第0 d時，T150和T300兩個試驗組的血清IL-2含量較對照組顯著提高(P＜0.05)，T150組與T300組間無顯著差異；在仔兔出生第7 d時，T300組的血清IL-2含量顯著高于其他組(P＜0.05)，對照組與T150兩組之間無顯著差異(P＞0.05)；仔兔出生第14 d時，3個處理組之間血清IL-2含量無顯著差異(P＞0.05)。在泌乳母兔飼糧中添加GPS對仔兔血清IFN-γ含量沒有顯著影響(P＞0.05)。

表4 人參多糖對哺乳仔兔血清IL-2、IFN-γ的影響(pg/mL)

2.3 添加人參多糖對仔兔平均重量與成活數的影響

仔兔的平均重量和成活數見表5。由表5可知，與對照組相比，T150組和T300組均顯著提高了仔兔出生0、7 d和14 d的平均重量（P＜0.05），T150組 與T300組之間平均重量未有顯著差異（P＞0.05）。3個處理組之間窩均產仔數未達到顯著水平（P＞0.05），T150組和T300組在仔兔出生后第0、7、14 d窩均活仔數與對照組相比差異顯著（P＜0.05），T150組和T300組之間沒有達到顯著水平（P＞0.05）。

表5 人參多糖對哺乳仔兔平均重量和成活數的影響

3 討論

3.1 人參多糖對泌乳母兔生產性能的影響

人參多糖具有抗氧化、抗疲勞、免疫促進等一系列生理活性，能改善營養(yǎng)代謝環(huán)境，減輕不良應激，增強健康。張邑帆等[13]添加5 g/kg含有植物多糖的中草藥混合物提取物于斷奶仔豬飼糧中，試驗組豬日增重比對照組提高13.53%，料重比比對照組降低11.03%。李春震等[14]試驗結果表明，飼料中添加0.4 g/kg人參多糖能顯著增加黑鯛日增重和肝臟指數。人參多糖在生產中具有改善動物的生長性能、提高其存活率的功效。在本研究中，添加150、300 mg/kg人參多糖到新西蘭種母兔飼糧中能顯著提高哺乳仔兔出生第0、7、14 d的成活數與平均重量，GPS對種母兔的生產性能有一定的促進作用。

3.2 人參多糖對哺乳仔兔免疫器官指數的影響

胸腺、脾臟和肝臟都是哺乳動物重要的免疫器官，其指數可以在一定程度上反映機體免疫能力[15]。關于植物多糖對免疫器官指數的研究已有報道。李婉雁[16]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加100～200 mg/kg的白術多糖能提高粵黃雞的免疫器官指數。Ding等[17]用龍葵多糖喂養(yǎng)小鼠，發(fā)現(xiàn)小鼠胸腺和脾臟指數明顯增加，分別以五味子、甘草、灰樹花為實驗材料，獲得相同結果[18-20]。Kim等[21]將粗GPS分離成中性和酸性部分，發(fā)現(xiàn)酸性部分在增加小鼠脾臟指數方面更有效。韋曉晨等[23]研究發(fā)現(xiàn)，飲水投喂人參葉多糖能夠促進粵黃雞胸腺、脾臟和法氏囊的發(fā)育。植物多糖有增加動物免疫器官指數的作用，可在一定程度上增強動物免疫力。在本研究中，于妊娠母兔飼糧中添加150 mg/kg和300 mg/kg GPS對哺乳仔兔出生第0、7、14 d的肝臟指數、胸腺指數和脾臟指數有一定提升，但差異未達顯著水平。試驗母兔飼喂含GPS的飼料，通過母嬰途徑給初生哺乳仔兔傳遞活性物質，其效果可能不如直接飼喂明顯。

3.3 人參多糖對哺乳仔兔指血清生化指標的影響

IL-2是白細胞受到應激時分泌的一種調節(jié)蛋白，其能調控白細胞生物活性和參與抗體反應[23]。IFN-γ主要由活化的Th細胞和NK細胞產生，其有免疫調節(jié)功能[24-25]。南慧靜等[27]研究發(fā)現(xiàn)，人參莖葉多糖能夠增強小鼠單核巨噬細胞系統(tǒng)的作用，進而提高小鼠的細胞免疫性能，維持免疫環(huán)境的恒定。韋曉晨等[22]研究發(fā)現(xiàn)，通過飲水投喂人參葉多糖能夠提高粵黃雞血清中IL-2、IL-12、IFN-γ、NK細胞的含量，提升粵黃雞的免疫性能。馬俊杰[27]研究發(fā)現(xiàn)，給非小細胞肺癌患者注射GPS聯(lián)合樹突狀細胞，與治療前和注射樹突狀細胞對照組相比患者血清IL-2和IFN-γ水平顯著升高。姚麗媛[28]研究發(fā)現(xiàn)，給妊娠期母豬飼喂復合人參多糖，可以提高母豬泌乳前期IL-2、IL-6、IgA和IgM的表達，提高哺乳仔豬哺乳前期血清IL-2、IL-6、IgA和IgM的含量。人參多糖可刺激免疫細胞的增殖活化，提高動物抗炎因子的表達。在本研究中，在妊娠母兔飼糧中添加150 mg/kg和300 mg/kg的GPS能有效增加母兔分娩后初乳中的IgA含量、增加仔兔出生第0 d時的血清IL-2含量，添加300 mg/kg GPS能顯著增加仔兔出生第7 d時的血清IL-2含量。這些結果表明，妊娠期母兔采食含有GPS的飼糧，可以增強初生仔兔的免疫功能。

4 結論

飼糧中添加GPS可顯著提高泌乳母兔初乳中IgA的含量，哺乳仔兔的平均重量和存活率提高，顯著提高初生仔兔的血清IL-2含量，本試驗條件下，添加300 mg/kg GPS的效果更好。試驗結果表明GPS具有提高母兔生產性能和哺乳仔兔免疫性能的作用，可作為養(yǎng)兔生產中一種有效的飼料添加劑進行開發(fā)利用。