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    pH-磁雙響應Janus籠

    2021-06-16 09:10:14紀旭陽梁福鑫
    功能高分子學報 2021年3期
    關鍵詞:油溶性介孔二氧化硅

    紀旭陽, 張 楊, 梁福鑫

    (1. 航天特種材料及工藝技術研究所,北京 100074;2. 清華大學化學工程系,高分子研究所,北京 100084)

    Janus材料的不對稱結構和化學組成使其呈現(xiàn)出獨特性能[1-5]。具有中心對稱結構的Janus籠,其內外表面化學組分有著嚴格的分區(qū),因此可以利用表面浸潤性差異對目標物質進行選擇性富集[6]。Chen等[7]將具有溫度響應性的聚合物接枝于Janus籠內部,通過調節(jié)環(huán)境溫度,實現(xiàn)了對油溶性物質的富集以及可控釋放。Zhao等[8]以pH響應性聚合物Janus籠作為藥物載體,在不同的pH條件下,實現(xiàn)了油溶性藥物阿霉素(DOX)的可控裝載及釋放。

    相較于有機聚合物,無機物殼層的Janus籠的結構穩(wěn)定性及生物惰性更好。本文對磁性顆粒內外表面進行了改性,分別將具有良好靶向性的葉酸基團[9,10]和具有pH響應性的聚合物[11,12]接枝于介孔殼層的內外表面,通過調節(jié)環(huán)境的pH實現(xiàn)對油溶性物質的選擇性富集和釋放。根據(jù)前期工作[13],我們制備了磁性介孔二氧化硅(Fe3O4@mSiO2)顆粒,進一步通過溶膠-凝膠反應在表面接枝羧基基團,再通過羧基與氨基的縮合反應將具有良好靶向性的葉酸(FA)修飾的聚乙二醇(PEG-FA)接枝于Fe3O4@mSiO2外側,得到了Fe3O4@mSiO2@PEGFA顆粒。抽提除去制孔模板十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)后,利用稀鹽酸對Fe3O4內核進行部分刻蝕,得到Yolk-Shell結構的磁性Janus籠。通過帶雙鍵的硅烷偶聯(lián)劑對介孔二氧化硅殼層內側進行改性后,利用自由基聚合在二氧化硅殼層內側接枝聚甲基丙烯酸二乙氨基酯(PDEAEMA),得到外側是PEG-FA修飾、內側是PDEAEMA修飾的pH-磁雙響應Janus籠。

    1 實驗部分

    1.1 原料和試劑

    三氯化鐵(FeCl3·6H2O)、乙二醇、正硅酸乙酯(TEOS)、聚乙二醇(PEG)、乙酸鈉(CH3COONa)、CTAB、鹽酸阿霉素(DOX·HCl):分析純,國藥試劑公司;甲基丙烯酸二乙氨基酯(DEAEMA)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS):化學純,TCI公司;偶氮二異丁腈(AIBN):化學純,百靈威公司;氨基聚乙二醇葉酸(NH2-PEG-FA):分析純,Mn, PEG=5.0×103,西安凱新生物科技有限公司;三乙氧基硅基丙基馬來酸:w=95%,Sigma-Aldrich公司;3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS):w=95%,Alfa Aesar試劑公司。

    1.2 測試與表征

    掃描電鏡(SEM):樣品經(jīng)冷凍干燥后真空鍍鉑,通過Hitachi S-4800型場發(fā)射掃描電鏡觀察微觀形貌,加速電壓15 kV;透射電鏡(TEM):樣品經(jīng)乙醇分散后滴于超薄碳膜,干燥后通過JEOL-JEM-100 CX 型透射電鏡對其結構進行觀察,加速電壓100 kV;傅里葉紅外光譜(FT-IR):Bruker Equinox 55 FT-IR型紅外光譜儀;熱失重分析(TGA):PerkinElmer Pyris 1型TGA儀,空氣氣氛,升溫速率為10 ℃/min;激光共聚焦顯微鏡(CLSM):激光共聚焦顯微鏡(Leica TCS-sp 2);紫外-可見光譜(UV-Vis):普析通用TU 1901型。

    1.3 實驗步驟

    1.3.1 Fe3O4@mSiO2顆粒的制備將2.36 g FeCl3·6H2O,1.75 g PEG(Mw=2.0 × 104),3.14 g CH3COONa加入到70 mL乙二醇中,在水熱釜中200 ℃下反應8 h后洗滌3次,得到黑色Fe3O4納米顆粒(Fe3O4NPs)。取0.3 g Fe3O4NPs,0.45 g CTAB加入到525 mL去離子水中并使其完全分散。隨后依次加入25 mL乙酸乙酯和15 mL氨水(w=30%),超聲2 h后加入0.525 g TEOS,室溫下反應8 h后,在磁場下將產(chǎn)物分離,洗滌3次后真空干燥,得到黑色Fe3O4@mSiO2顆粒。

    1.3.2 PEG-FA修飾的磁性介孔二氧化硅(Fe3O4@mSiO2@PEG-FA)顆粒的制備取100 mg Fe3O4@mSiO2顆粒分散于50 mL乙醇中,隨后向其中加入50 mg三乙氧基硅基丙基馬來酸,70 ℃下反應12 h后,磁場下使產(chǎn)物分離,用乙醇洗3次后真空干燥,得到羧基修飾的磁性介孔二氧化硅(Fe3O4@mSiO2@-COOH)顆粒。取100 mg Fe3O4@mSiO2@-COOH顆粒分散于50 mL DMSO中,加入20 mg EDC和20 mg NHS,室溫攪拌24 h。隨后加入20 mg NH2-PEG-FA,室溫攪拌24 h,得到Fe3O4@mSiO2@PEG-FA顆粒。

    1.3.3 pH-磁雙響應Janus籠的制備取100 mg Fe3O4@mSiO2@PEG-FA顆粒分散于20 mL無水乙醇中,加入1 mL 2 mol/L鹽酸后在70 ℃下反應2 h,對Fe3O4內核進行部分刻蝕,得到蛋黃-蛋殼結構Janus籠。隨后將Janus籠分散于乙醇中,向其中加入一定量的MPS,70 ℃下反應12 h后在磁場下使產(chǎn)物分離,洗滌3次后真空干燥,得到外側是PEG-FA修飾,內側是雙鍵修飾的Janus籠。取上述Janus籠20 mg分散于10 mL甲苯中,再加入5 mg AIBN和20 mg DEAEMA,氮氣氣氛70 ℃下反應8 h,得到外側是PEG-FA,內側是PDEAEMA修飾的pH-磁雙響應Janus籠(圖(1))。

    圖1 pH-磁雙響應Janus籠的合成:(a)外側修飾羧基的Fe3O4@mSiO2顆粒;(b)外側由PEG-FA基團修飾的“蛋黃-蛋殼”結構磁性Janus籠;(c)pH-磁雙響應Janus籠Fig. 1 Preparation of pH and magnetic responsive Janus cages: (a)Fe3O4@mSiO2 particles with carboxyl modified on external surface;(b)Magnetic “yolk-shell” Janus cages with PEG-FA groups modified on external surface; (c)pH and magnetic responsive Janus cages

    1.3.4 pH-磁雙響應Janus籠的載藥實驗在20 mL一定濃度DOX·HCl的DMF溶液中加入0.05 g三乙胺,室溫下攪拌12 h。將20 mg pH-磁響應Janus籠加入到20 mL DMF中,分散后在前述DOX溶液中攪拌12 h。分離后加入pH為7.4的PBS緩沖溶液重新分散。測定其在480 nm處的熒光強度,進一步利用DOX的釋放標準曲線計算得到DOX的濃度,載藥率(E)公式為:

    其中:mDrug為DOX的裝載質量;mCages為Janus籠的質量。

    1.3.5 DOX的體外釋放將裝載了DOX的Janus籠分別分散于pH為7.4和6.5 的PBS,以及pH為5.5的醋酸緩沖溶液中。Janus籠的質量濃度為1 mg/mL,放入15 mL PBS或醋酸緩沖溶液中,37 ℃下勻速攪拌。每隔一段時間,取樣5 mL進行熒光強度檢測,同時補充5 mL相應溶液,以保持液體總量不變。釋放量(Er)公式為:

    其中:mDOX為Janus籠中DOX的質量;cn為第n個樣品的DOX濃度;樣品溶液的原始體積V0為20 mL;Ve為每次取樣溶液的體積,Ve=5 mL。

    2 結果與討論

    2.1 Fe3O4@mSiO2顆粒的表征

    圖2為Fe3O4納米顆粒的SEM及TEM照片。結果顯示:所制備顆粒尺寸較為均一,約為200 nm(圖2(a, b))。以CTAB為制孔模板,在Fe3O4納米顆粒表面覆蓋一層介孔二氧化硅,得到的Fe3O4@mSiO2顆粒介孔層厚度約為20 nm(圖2(c, d))。Fe3O4納米顆粒以及Fe3O4@mSiO2顆粒的XRD表征結果見圖3,兩種樣品顆粒晶型均與PDF-2標準卡片89-0691一致。

    2.2 Fe3O4@mSiO2@PEG-FA顆粒的表征

    由圖4中改性前的Fe3O4@mSiO2顆粒,與改性后的Fe3O4@mSiO2@-COOH顆粒的FT-IR譜圖可見,改性后,1700 cm?1處出現(xiàn)了―COOH的紅外特征峰。Fe3O4@mSiO2@PEG-FA的FT-IR圖中,1700 cm?1處的羧基特征峰顯著增強。同時,UV-Vis光譜對FA的接枝表征結果顯示(圖5),F(xiàn)e3O4@mSiO2@PEG-FA顆粒在277 nm處出現(xiàn)了FA的紫外特征吸收峰。TGA的結果顯示(圖6),PEG-FA的接枝量為2.5%。

    圖2 Fe3O4納米顆粒的(a)SEM和(b)TEM照片;Fe3O4@mSiO2顆粒的(c)SEM和(d)TEM照片F(xiàn)ig. 2 (a)SEM and (b) TEM images of Fe3O4 NPs; (c)SEM and (d)TEM images of Fe3O4@mSiO2 particles

    圖3 樣品的XRD光譜Fig. 3 XRD patterns of samples

    圖4 樣品的FT-IR譜圖Fig. 4 FT-IR spectra of samples

    圖5 樣品的UV-Vis曲線Fig. 5 UV-Vis curves of samples

    圖6 樣品的TGA曲線Fig. 6 TGA curves of samples

    2.3 Janus籠的表征

    圖7為Janus籠的SEM和TEM照片。鹽酸乙醇溶液刻蝕之后,磁性介孔二氧化硅顆粒的外部形貌(圖7(a))得以保持,而內部(圖7(b, c))因部分Fe3O4內核被刻蝕出現(xiàn)空腔,且保持了原有的磁性。

    圖7 Janus籠的 (a)SEM和 (b, c)TEM照片F(xiàn)ig. 7 (a) SEM and (b, c)TEM images of the Janus cages

    FT-IR數(shù)據(jù)證明Janus籠在1550 cm?1處出現(xiàn)了PDEADMA的特征峰(圖4)。圖6中的TGA結果顯示,PDEADMA的接枝量為39.2%。利用PMMA對Janus籠進行包埋,在室溫下對樣品進行超薄切片,其切片樣品的TEM表征結果見圖8。結果顯示,PDEAEMA完全接枝于Janus籠內側。

    圖8 接枝PDEAEMA(a)前、(b)后的Janus 籠的TEM照片F(xiàn)ig. 8 TEM images of Janus cages (a)before and (b) after grafting the PDEAEMA

    2.4 Janus籠的pH響應性

    Janus籠具有pH響應性。在水中加入一定量的正己烷,其中加入少量油溶性染料Dil-C18,以便區(qū)分油水兩相(圖9(a1))。然后,向該兩相體系中加入一定量Janus籠,通過加入少量的NaOH溶液調節(jié)體系pH至8(圖9(a2))。在此條件下,Janus籠內側的PDEAEMA由于去質子化而表現(xiàn)疏水狀態(tài),從而可實現(xiàn)Janus籠對正己烷的選擇性富集(圖9(a3))。通過加入少量的鹽酸,調節(jié)體系的pH至5,由于Janus籠內側的PDEAEMA在該條件下表現(xiàn)出親水性,被富集裝載在空腔內的正己烷則被釋放(圖9(a4))。

    Janus籠在pH=8時從水中選擇性富集正己烷,在激光共聚焦顯微鏡下,裝載了正己烷的Janus籠呈綠色(圖9(b)),而當pH=5時,Janus籠的熒光消失(圖9(c)),說明正己烷被釋放出Janus籠。

    2.5 Janus 籠的載藥實驗

    不同DOX濃度下Janus 籠的載藥率見表1。在一定范圍內,Janus 籠中空球載藥率隨著DOX含量的增加而升高,而當DOX含量增加到一定程度后,載藥率趨于穩(wěn)定。

    Janus籠分別在pH=5.5,6.5,7.4的環(huán)境下對DOX的釋放曲線見圖10。當pH=5.5時,DOX釋放量可占到載藥量的75%;當pH=6.5時,DOX釋放量下降,約為58%;而當pH=7.4時,DOX釋放量最少,約為35%。相較于正常生理體系的中性環(huán)境,處于癌癥病變的生理體系呈弱酸性,由此證明,所制備pH-磁響應性Janus籠在正常生理環(huán)境下藥物釋放較少,而在癌癥病變的弱酸性環(huán)境下,可實現(xiàn)響應性藥物釋放。

    圖9 Janus籠的pH響應性:(a1)正己烷(上層)-水(下層)兩相體系,正己烷中加入顯色劑dil-C18;(a2)在pH=8條件下加入20 mg Janus籠;(a3)正己烷因被Janus籠富集而從水相中分離;(a4)在pH=5條件下,Janus籠將正己烷釋放;(b)在pH=8條件下,裝載了正己烷的Janus籠和(c)在pH=5條件下,Janus籠將正己烷釋放后的激光共聚焦顯微鏡照片F(xiàn)ig. 9 pH responsive of the Janus cage:(a1)Immiscible mixture of hexane (top) and water(bottom), dil-C18 was added in hexane as the chromogenic agent;(a2)after adding the Janus cage in the mixture under stirring at pH 8; (a3)magnetic collection of the Janus cage at pH 8; (a4)triggered release of hexane from the Janus cage at pH 5; fluorescence microscopy images of (b) the Janus cage filled with hexane at pH 8 and (c) after release of oil at pH 5

    表1 不同DOX含量下Janus籠的載藥率Table 1 Drug loading capacity of Janus cages at different content of DOX

    圖10 裝載DOX的Janus籠的藥物釋放曲線Fig. 10 Drug release profiles of DOX-loaded Janus cages

    3 結 論

    (1)親水基團PEG-FA和響應性的聚合物PDEAEMA分別修飾于Fe3O4@mSiO2顆粒介孔內外表面,得到了Janus籠。

    (2)Janus籠可實現(xiàn)對油溶性物質的選擇性富集及可控釋放。

    (3)在弱堿性條件下實現(xiàn)了Janus籠對油溶性藥物DOX的裝載。

    (4)初步驗證了Janus籠在靶向藥物輸送及腫瘤區(qū)域可控釋藥領域應用的可行性。

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