當(dāng)歸芍藥散加味黃芪對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的腎病綜合征大鼠的治療作用

范勝楠，歐美鳳，王運(yùn)來(lái)，楊 沫，宣自華，許 釩

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥230011）

腎病綜合征（nephrotic syndrome，NS）是一種常見(jiàn)的腎臟疾病，臨床表現(xiàn)為水腫、蛋白尿和低白蛋白血癥，常伴高脂血癥［1］。治療多使用激素和免疫抑制劑，但長(zhǎng)期使用會(huì)干擾免疫系統(tǒng)，易引發(fā)并發(fā)癥和感染，復(fù)發(fā)率較高［2］。中醫(yī)藥治療腎臟疾病歷史悠久，以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，在治療NS 方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。當(dāng)歸芍藥散出自張仲景的《金匱要略》，具有養(yǎng)血活血、健脾行水的功效。課題組前期實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，當(dāng)歸芍藥散可降低NS 大鼠尿蛋白，改善電解質(zhì)紊亂，恢復(fù)腎功能［3］。當(dāng)歸芍藥散與黃芪配伍可益氣、活血、利水，臨床治療NS 療效顯著，但其研究多為臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，缺少實(shí)驗(yàn)研究支持。本文采用尾靜脈注射阿霉素建立NS 大鼠模型，并引入生物電阻抗法（Bioelectrical impedance analysis，BIA）評(píng)估NS 大鼠各組間水液分布差異，結(jié)合尿蛋白、血液生化指標(biāo)、電解質(zhì)、免疫功能和腎組織形態(tài)學(xué)變化，評(píng)價(jià)當(dāng)歸芍藥散、黃芪、當(dāng)歸芍藥散加味黃芪對(duì)NS 大鼠的治療效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

動(dòng)物：SPF級(jí)雄性SD 大鼠，體重為（200±20）g，購(gòu)于安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)：SCXK（皖）2013-002。飼養(yǎng)條件：濕度（45±15）%，溫度（23±1.5）℃，12 h 光照和暗照循環(huán)，普通飼料，自由飲水。

1.2 主要試劑及儀器

試劑：當(dāng)歸、芍藥、川芎、白術(shù)、茯苓、澤瀉、黃芪均購(gòu)自安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)金傳山教授鑒定，均符合2015 版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)；阿霉素（浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：130704）；福辛普利（中美上海施貴寶制藥有限公司，批號(hào)：1406053）；BCA 試劑盒（碧云天生物科技有限公司，批號(hào)：P0012S）。

儀器：BX53 光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司）；RM2135 切片機(jī)（德國(guó)Leica 公司）；YB-7B 石蠟包埋機(jī)（湖北孝感亞光）；Impedi VET BIS1 型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體組成測(cè)定分析儀（澳大利亞ImpediMed 公司）；1500 型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo scientific公司）。

1.3 藥物制備

當(dāng)歸芍藥散提取液按經(jīng)典處方比例當(dāng)歸∶白芍∶川芎∶白術(shù)∶茯苓∶澤瀉=3∶16∶8∶4∶4∶8，準(zhǔn)確稱量各藥材飲片，混勻至1 000 mL 的圓底燒瓶中，加入10倍量的75%的乙醇浸泡藥材，水浴加熱回流1.5 h，濾出藥液；再加入8倍量的75%乙醇，繼續(xù)加熱回流1.5 h，過(guò)濾并擠壓藥材濾渣，將2 次濾出的藥液合并進(jìn)行加熱濃縮，濃縮至1.72 g/mL 生藥濃度藥液備用，臨用時(shí)配制成生藥濃度為0.43 g/mL 的藥液。當(dāng)歸芍藥散加味黃芪提取液按當(dāng)歸∶白芍∶川芎∶白術(shù)∶茯苓∶澤瀉∶黃芪=3∶16∶8∶4∶4∶8∶16 制備，方法同當(dāng)歸芍藥散提取液，濃縮成生藥濃度為0.59 g/mL 的藥液備用。黃芪提取液按當(dāng)歸芍藥散加黃芪提取液中黃芪比例制備，濃縮成生藥濃度為0.16 g/mL 的藥液備用。準(zhǔn)確稱取福辛普利加入純凈水配置成0.9 g/L 福辛普利溶液備用。

1.4 造模、分組及給藥

雄性SD 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，隨機(jī)抽取10 只大鼠作為正常組，其余大鼠按體重6 mg/kg 一次性尾靜脈注射阿霉素溶液，正常組大鼠注射等容積的生理鹽水。于造模后第1 周、第2 周末放入代謝籠內(nèi)，收集尿液檢測(cè)蛋白水平。根據(jù)造模第2 周末大鼠尿蛋白情況將造模成功的大鼠分為模型組、福辛普利組、黃芪組、當(dāng)歸芍藥散組、當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組，按100 g/mL 灌胃給藥，正常組和模型組給予生理鹽水，其余各組給予相應(yīng)藥物。每日1 次，連續(xù)給藥4 周。

1.5 尿蛋白檢測(cè)

于造模后第1 周、第2 周以及給藥第4 周收集尿液，BCA 試劑盒檢測(cè)尿蛋白。

1.6 動(dòng)物體液檢測(cè)

末次給藥2 h 后，將大鼠乙醚麻醉，使之四肢垂直軀干，尾巴伸直，平趴在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。將4 個(gè)貼電極處的體毛剃干凈以便貼電極片或在這4 處插入針電極，按照電極布置圖將導(dǎo)線與貼好的電極連結(jié)，測(cè)量電極兩兩間的距離，打開(kāi)儀器，輸入大鼠信息，檢測(cè)大鼠總含水率（TBW）、細(xì)胞內(nèi)液含水率（ECF）和細(xì)胞外液含水率（ICF）。

1.7 電解質(zhì)檢測(cè)

末次給藥24 h 后，各組大鼠以10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血。血液靜置30 min，3 500 r/min 離心10 min 取上清，分裝備用。使用全自動(dòng)生化分析儀分別對(duì)各組大鼠尿液和血清進(jìn)行電解質(zhì)濃度檢測(cè)。

1.8 血液指標(biāo)檢測(cè)

按照試劑盒操作說(shuō)明檢測(cè)各組大鼠血清中尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）含量。

1.9 蘇木精伊紅（HE）染色檢測(cè)腎組織病理學(xué)形態(tài)

采集腎組織，置于4%福爾馬林中固定48 h，常規(guī)制備石蠟組織切片，經(jīng)HE 染色觀察腎組織病理學(xué)形態(tài)。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS23.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果按照均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用ANOVA 進(jìn)行分析，組內(nèi)使用LSD 法進(jìn)行比較，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 尿蛋白檢測(cè)

與正常組比較，大鼠建模后第2 周模型組尿蛋白顯著升高，給藥4 周后與模型組比較，給藥組大鼠尿蛋白均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組大鼠尿蛋白較當(dāng)歸芍藥散和黃芪組改善更明顯。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠尿蛋白比較（n=8，g/L，±s）Tab 1 Comparison of urinary protein of rats in each group（n=8，g/L，±s）

表1 各組大鼠尿蛋白比較（n=8，g/L，±s）Tab 1 Comparison of urinary protein of rats in each group（n=8，g/L，±s）

注：與正常組比較,**P＜0.01；與模型組比較,##P＜0.01。

組別正常組模型組福辛普利組當(dāng)歸芍藥散組黃芪組當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組組F給藥4 周末11.53±3.21 53.60±10.57**29.30±3.41##31.38±4.18##34.43±7.68##29.90±4.79##37.196建模第2 周17.16±3.84 74.06±15.30**74.38±17.42 75.78±14.87 74.25±14.75 74.70±15.83 0.939

2.2 各組大鼠體液分布情況

與正常組比較，模型組大鼠體內(nèi)TBW、ICF 顯著降低，ECF 顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠體內(nèi)TBW、ECF、ICF 有不同程度的改善；與當(dāng)歸芍藥散組和黃芪組比較，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組TBW 升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 給藥4 周后大鼠體液分布情況（n=8，%，±s）Tab 2 Body fluid distribution of rats after 4 weeks of administration（n=8，%，±s）

表2 給藥4 周后大鼠體液分布情況（n=8，%，±s）Tab 2 Body fluid distribution of rats after 4 weeks of administration（n=8，%，±s）

注：與正常組比較,**P＜0.01；與模型組比較,##P＜0.01。

組別正常組模型組福辛普利組當(dāng)歸芍藥散組黃芪組當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組F ICF 58.64±0.79 45.80±4.13**56.09±1.42##52.72±1.04##50.51±2.2##55.28±1.35##36.556 TBW 51.57±4.59 43.41±4.14**49.52±3.66 46.45±4.12 46.36±2.82 51.15±3.65##5.46 ECF 41.36±0.79 54.20±4.13**43.91±1.42##47.28±1.04##49.49±2.2##44.72±1.35##36.556

2.3 血清、尿液Na+、K+、Cl-檢測(cè)

與正常組比較，模型組大鼠的血清Na+、K+、Cl-濃度顯著下降，而尿液中Na+、K+、Cl-濃度顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清Na+、K+、Cl-濃度上升，尿液中Na+、K+、Cl-濃度下降；與當(dāng)歸芍藥散組比較，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組大鼠血清和尿液Na+改善更加明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與黃芪組比較，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組大鼠血清Na+、Cl-濃度明顯升高，尿液K+濃度明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 給藥4 周后大鼠血清和尿液Na+、K+、Cl-結(jié)果（n=8，mmol/L，±s）Tab 3 Concentration of Na+，K+，Cl- in serum and urine of rats after 4 weeks of administration（n=8，mmol/L，±s）

表3 給藥4 周后大鼠血清和尿液Na+、K+、Cl-結(jié)果（n=8，mmol/L，±s）Tab 3 Concentration of Na+，K+，Cl- in serum and urine of rats after 4 weeks of administration（n=8，mmol/L，±s）

注：與正常組比較,**P＜0.01；與模型組比較,#P＜0.05，##P＜0.01；與當(dāng)歸芍藥組組比較,△△P＜0.01；與黃芪組比較,▲▲P＜0.01。

組別正常組模型組福辛普利組黃芪組當(dāng)歸芍藥散組當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組F血清Na+136.45±16.84 92.15±4.29**126.05±13.96##120.20±12.16##114.70±6.16##132.11±6.53##△△▲▲82.761血清K+5.15±0.81 3.65±0.32**4.65±0.52##3.66±0.36 4.41±0.40#4.52±0.32##11.675血清Cl-107.48±8.37 64.00±4.27**91.48±8.77##70.33±3.67 90.75±3.62##91.08±4.50##▲▲57.467尿液Na+24.08±1.90 54.58±4.23**23.80±4.71##36.98±4.61##39.40±4.92##32.75±3.67##△△61.37尿液K+44.78±1.52 68.87±0.63**44.31±0.90##56.83±4.35##45.29±2.91##44.92±2.15##▲▲136.764尿液Cl-154.43±18.89 237.73±28.40**150.68±26.24##203.73±52.47 191.48±16.73#176.18±24.96#9.343

2.4 血液生化指標(biāo)檢測(cè)

與正常組比較，模型組血清BUN、Scr、TC、TG含量顯著升高，TP 和ALB 含量顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清BUN、Scr、TC、TG 含量顯著降低，TP、ALB濃度顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與當(dāng)歸芍藥散組和黃芪組比較，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪不同程度降低了大鼠BUN，Scr、TC、TG 含量，升高了TP、ALB 含量，且BUN 和TP 含量變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 給藥4 周后大鼠血清BUN、Scr、TC、TG、TP、ALB 含量（n=8，mmol/L，±s）Tab 4 Serum concents of BUN，Scr，TC，TG，TP and ALB in rats after four weeks of administration（n=8，mmol/L，±s）

表4 給藥4 周后大鼠血清BUN、Scr、TC、TG、TP、ALB 含量（n=8，mmol/L，±s）Tab 4 Serum concents of BUN，Scr，TC，TG，TP and ALB in rats after four weeks of administration（n=8，mmol/L，±s）

注：與正常組比較,**P＜0.01；與模型組比較,##P＜0.01；與當(dāng)歸芍藥組組比較,△P＜0.05，△△P＜0.01；與黃芪組比較, ▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

ALB 23.11±2.59 13.07±2.40**18.95±1.94##21.69±2.51##21.91±1.37##24.00±2.61##24.618組別正常組模型組福辛普利組當(dāng)歸芍藥散組黃芪組當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組F BUN 3.23±0.90 7.94±1.35**3.88±0.82##5.48±1.39##4.83±1.13##3.74±0.55##△▲20.763 Scr 45.95±14.97 140.31±36.61**46.08±8.72##76.11±15.86##54.90±8.21##53.64±3.09##32.305 TC 2.04±0.80 7.16±1.00**3.44±0.57##3.87±0.87##3.48±0.81##3.00±0.59##39.312 TG 0.34±0.12 0.98±0.11**0.45±0.05##0.41±0.07##0.57±0.11##0.35±0.11##48.303 TP 55.10±2.18 27.83±2.97**40.50±5.51##45.09±4.11##47.94±3.62##55.55±1.68##△△▲▲67.085

2.5 血清IgM、IgG 檢測(cè)

與正常組比較，模型組大鼠血清IgM、IgG 含量顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；各給藥組較模型組顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與當(dāng)歸芍藥散組和黃芪組比較，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組大鼠血清IgM、IgG 含量明顯上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。見(jiàn)表5。

2.6 腎組織病理觀察

HE 染色結(jié)果顯示，空白組無(wú)明顯病理改變。模型組大鼠腎組織中腎小球基底膜界限不清，有明顯增生，球囊出現(xiàn)粘連；腎小管上皮細(xì)胞可見(jiàn)顆粒變性或萎縮，部分腎小管部分?jǐn)U張，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，可見(jiàn)蛋白管型。與模型組相比，當(dāng)歸芍藥散組腎小球基底膜增生有一定改善，蛋白管型減少。黃芪組腎小球基底膜增生有所改善，但仍有黏連。當(dāng)歸芍藥組加味黃芪組基底膜增生情況明顯改善，腎小管細(xì)胞胞體清晰，空泡變性和蛋白管型顯著減少，較當(dāng)歸芍藥散組和黃芪組腎小球、腎 小管病變程度減輕。見(jiàn)圖1。

表5 給藥4 周后大鼠血清IgM 和IgG 水平（n=8，ng/mL，±s）Tab 5 Serum concentration of IgM and IgG of rats after 4weeks of administration（n=8，ng/mL，±s）

表5 給藥4 周后大鼠血清IgM 和IgG 水平（n=8，ng/mL，±s）Tab 5 Serum concentration of IgM and IgG of rats after 4weeks of administration（n=8，ng/mL，±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01；與當(dāng)歸芍藥散組比較，△P＜0.05；與黃芪組比較，▲▲P＜0.01。

IgG組別IgM 8.08±0.67 2.09±0.57**6.24±0.82##4.72±0.55##4.07±0.55##5.53±0.51##△▲▲85.68正常組模型組福辛普利組當(dāng)歸芍藥散組黃芪組當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組F 2 162.79±264.40 674.63±85.20**1 683.91±43.97##1 318.93±199.81##1 374.08±66.76##1 572.80±80.66##△▲▲88.68

圖1 各組大鼠腎組織染色（HE，×200）Fig 1 E staining of renal tissues（HE，×200）

3 討論

中醫(yī)將NS 歸為“水腫”范疇，由于患者肺失宣發(fā)、脾失轉(zhuǎn)運(yùn)、腎失開(kāi)合，導(dǎo)致三焦氣化不利，水精輸布失調(diào)，從而誘發(fā)本病。正氣虛，氣血運(yùn)行無(wú)力，凝滯不暢，久而成瘀，正如《讀醫(yī)隨筆》所言，“氣虛不足以推血，則血必有瘀”。血不利亦可為水，唐容川《血證論》云：“瘀血化水，亦發(fā)水腫”，濕和瘀內(nèi)留，導(dǎo)致氣機(jī)不行，水濕更難消解，周而復(fù)始，氣、血、水三者關(guān)系失調(diào)，以致病程遷延難愈［4］。故中醫(yī)在治療NS 上多采用益氣兼活血利水的治療法則，兼顧氣、血、水三個(gè)環(huán)節(jié)，阻斷其惡性循環(huán)。當(dāng)歸芍藥散全方由當(dāng)歸、芍藥、川芎、白術(shù)、茯苓、澤瀉組成。當(dāng)歸、芍藥、川芎活血祛瘀，白術(shù)、茯苓、澤瀉利水健脾。黃芪具有補(bǔ)氣升提、固表、攝精和利尿的作用，《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》謂：“為其補(bǔ)氣之功最優(yōu)，故推補(bǔ)藥之長(zhǎng)，而名之曰耆也”。當(dāng)歸芍藥散加用黃芪，意在補(bǔ)益元?dú)?，氣旺則血行，瘀祛絡(luò)通，七藥合用，活血而水利，驅(qū)邪不傷正，扶正不留邪，從而達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。

課題組前期研究表明當(dāng)歸芍藥散可提高NS 大鼠一氧化氮合酶的表達(dá)，增加大鼠體內(nèi)一氧化氮含量，減少尿蛋白含量，延緩NS 病理進(jìn)程［5］，糾正NS大鼠電解質(zhì)紊亂［6］。細(xì)胞研究表明當(dāng)歸芍藥散提取液對(duì)阿霉素誘導(dǎo)IMCD3 細(xì)胞損傷模型具有一定的保護(hù)作用，這與提高Na+、K+-ATP 酶活性，激活環(huán)磷酸腺苷-蛋白激酶A-環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白通路有關(guān)［7］。黃芪現(xiàn)代藥理研究表明，其有效成分黃芪多糖和黃芪甲苷能夠通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白激酶C/絲裂原活化蛋白激酶通路的活性進(jìn)而影響人足細(xì)胞裂孔膜上的特異性蛋白nephrin 及podocin 的表達(dá)，維持裂孔膜結(jié)構(gòu)完整，保護(hù)足細(xì)胞，延緩腎病進(jìn)程［8］。黃芪水提物干預(yù)多柔比星腎病大鼠的分子機(jī)制與凋亡相關(guān)基因和脂質(zhì)代謝相關(guān)基因密切相關(guān)，且黃芪對(duì)腎臟具有明顯抗炎、利尿作用，能夠增加腎小球?yàn)V過(guò)功能，減少水的重吸收，緩解多種腎小球疾病水鈉潴留，并能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能［9］。

本實(shí)驗(yàn)在課題組既往研究基礎(chǔ)上，通過(guò)尾靜脈注射阿霉素建立NS 大鼠模型［10］。水腫是NS 最明顯的臨床癥狀，但NS 大鼠模型水腫較難判斷，BIA法可在無(wú)損的情況下實(shí)現(xiàn)對(duì)大鼠水液代謝情況的測(cè)定，故采用BIA 法測(cè)定NS 大鼠水液代謝情況［11］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，模型組大鼠TBW、ICF 顯著降低，ECF 顯著升高（P＜0.01）。進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行電解質(zhì)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠血清Na+、K+、Cl-濃度顯著降低，尿液Na+、K+、Cl-濃度顯著升高（P＜0.01），提示NS 大鼠存在水液代謝紊亂。腎小球?yàn)V過(guò)屏障損壞，腎小球基底膜通透性的改變是影響NS 疾病進(jìn)程的重要因素。腎小球?yàn)V過(guò)屏障損壞導(dǎo)致蛋白從尿液中大量丟失形成蛋白尿，且血漿蛋白和高密度脂蛋白的大量丟失會(huì)促進(jìn)TG 及TC 在肝臟中的合成，最終導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂形成高血脂［12］。腎小球?yàn)V過(guò)功能嚴(yán)重受損時(shí)，還會(huì)降低Scr和BUN 濾過(guò)，使其血液濃度增加［13］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組大鼠尿蛋白和血清BUN、Scr、TC、TG 含量顯著升高（P＜0.01），血清TP、ALB 含量顯著降低（P＜0.01）。病理觀察發(fā)現(xiàn)腎組織中腎小球基底膜界限不清，有明顯增生，腎小管上皮細(xì)胞可見(jiàn)顆粒變性或萎縮，可見(jiàn)蛋白管型。這些結(jié)果均與阿霉素誘導(dǎo)的NS 模型相符，提示造模成功，可以進(jìn)行后續(xù)的藥物干預(yù)研究。本研究數(shù)據(jù)表明，與模型組相比，給藥組大鼠體內(nèi)TBW、ECF、ICF 和電解質(zhì)有不同程度改善，尿蛋白、血清BUN、Scr、TC、TG 含量不同程度降低，血清TP、ALB 含量不同程度升高（P＜0.01）。組間比較發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組較當(dāng)歸芍藥散組血清Na+濃度明顯上升，尿液Na+濃度明顯降低（P＜0.01）；較黃芪組Na+、Cl-濃度明顯上升，尿液K+濃度明顯降低（P＜0.01），與當(dāng)歸芍藥散組和黃芪組相比，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組大鼠BUN、Scr、TC、TG 含量降低和TP、ALB 含量升高更為明顯，且BUN 含量明顯降低，TP 含量明顯升高（P＜0.05）。病理結(jié)果也顯示給藥后系膜細(xì)胞核基質(zhì)增生情況有改善，腎小管病變減輕。這提示當(dāng)歸芍藥散、黃芪和當(dāng)歸芍藥散加味黃芪均具有一定的腎功能保護(hù)作用，且當(dāng)歸芍藥散加味黃芪治療效果更優(yōu)。

NS 的病理過(guò)程極為復(fù)雜，機(jī)體免疫功能異常是引起NS 發(fā)生的主要原因之一，NS 的并發(fā)癥和復(fù)發(fā)與自體免疫密切相關(guān)，西醫(yī)臨床上治療NS 多采用免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素類藥物［14，15］。機(jī)體體液免疫主要通過(guò)免疫B 細(xì)胞分泌相應(yīng)的免疫球蛋白介導(dǎo)，IgM、IgG 的是血清免疫球蛋白的主要成分，反映了免疫應(yīng)答的程度［16］。NS 患者體內(nèi)由于各類細(xì)胞相互作用導(dǎo)致IgM 向IgG 轉(zhuǎn)化減少，血清IgG 水平降低直接影響了機(jī)體抵御并發(fā)癥、抗感染的能力。本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組、當(dāng)歸芍藥散組和黃芪組可不同程度升高IgM 和IgG，與當(dāng)歸芍藥散組和黃芪組相比，當(dāng)歸芍藥散加味黃芪組的IgM 和IgG 水平明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），說(shuō)明當(dāng)歸芍藥散與黃芪配伍能顯著改善NS 大鼠免疫功能。

綜上所述，當(dāng)歸芍藥散與黃芪配伍具有協(xié)同增效作用，可顯著改善NS 大鼠水腫、蛋白尿、血脂及免疫功能，且改善效果優(yōu)于單用當(dāng)歸芍藥散和單用黃芪，但是其確切機(jī)制尚不清楚。因此，課題組后續(xù)將結(jié)合中醫(yī)理論和現(xiàn)代研究手段，對(duì)其關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行基因及蛋白水平檢測(cè)，系統(tǒng)深入地探討當(dāng)歸芍藥散加味黃芪治療NS 的相關(guān)分子機(jī)制，為中醫(yī)藥治療NS 提供理論依據(jù)。