一例副豬嗜血桿菌的分離鑒定及防治措施

劉霞

摘要：副豬嗜血桿菌病是豬群容易感染的細(xì)菌性傳染病，該病在世界范圍的暴發(fā)和廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重危害和巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文結(jié)合一例副豬嗜血桿菌病，主要講述了該病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法和綜合防控措施，為有效防控副豬嗜血桿菌病提供參考。

關(guān)鍵詞：豬；副豬嗜血桿菌??；分離鑒定；綜合防控

副豬嗜血桿菌是嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的重大細(xì)菌性病原體之一，是豬呼吸道疾病綜合征的一種主要原發(fā)性病。副豬嗜血桿菌是需氧或兼性厭氧的巴斯德氏桿菌科的革蘭氏陰性菌，血清型眾多，目前已確定的有15種，尚有一些未定血清型即不可分型（NT），且不同地區(qū)的副豬嗜血桿菌血清型有所差異，4、12和14型等是我國(guó)主要流行血清型。

副豬嗜血桿菌易感1～4月齡的仔豬和保育豬，主要存在于豬的上呼吸道。該病原菌為條件性致病菌，當(dāng)豬群免疫力低下時(shí)易于感染，單獨(dú)感染時(shí)可導(dǎo)致多發(fā)性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎以及腦膜炎，其中以格拉瑟氏病為典型特征。該菌可經(jīng)直接接觸、空氣和污染物進(jìn)行傳播。當(dāng)前該病流行正呈上升趨勢(shì)，常與其他豬病如豬圓環(huán)、豬繁殖與呼吸綜合征等混合感染而導(dǎo)致發(fā)病率和死亡率均較高。臨床患豬多表現(xiàn)呼吸困難、關(guān)節(jié)腫大、發(fā)熱、共濟(jì)失調(diào)等癥狀，給豬場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)對(duì)山東省濱州市某豬場(chǎng)疑似副豬嗜血桿菌感染的發(fā)病豬進(jìn)行了病原菌的分離鑒定、血清型鑒定、藥敏試驗(yàn)等，為其他類似疾病的診治提供參考依據(jù)。

1發(fā)病情況

自2020年4月開(kāi)始，山東濱州某豬場(chǎng)內(nèi)17日齡仔豬陸續(xù)出現(xiàn)精神委頓，體溫升高，畏寒扎堆，呼吸急促，被毛粗亂，食欲不振，逐漸消瘦。有的仔豬腿關(guān)節(jié)腫脹，臥躺在地，發(fā)病1周左右死亡，病死豬多皮膚及黏膜發(fā)紺。初步統(tǒng)計(jì)產(chǎn)房哺乳仔豬死亡率可高達(dá)34%。養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)獸醫(yī)初步懷疑為副豬嗜血桿菌病，采用氟苯尼考、氨芐西林進(jìn)行試探性治療，但效果不理想。

2病理剖檢

隨機(jī)選擇三只病死豬進(jìn)行臨床剖檢，可見(jiàn)胸、腹腔積液增多，有少量的纖維素，各臟器普遍有纖維素性滲出物，胸腔內(nèi)纖維素性漿膜炎、纖維素性胸膜肺炎、關(guān)節(jié)炎等病變明顯，病變的關(guān)節(jié)周圍腫大，且有波動(dòng)感，剖開(kāi)后有大量清亮積液流出。

3細(xì)菌分離

3.1病料采集

無(wú)菌條件下收集腹腔和關(guān)節(jié)處積液，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

3.2細(xì)菌分離

取適量采集的積液接種在含10%新生牛血清、0.02%氧化型輔酶I的TSA培養(yǎng)基上，用無(wú)菌接種環(huán)涂抹均勻，放置于5% CO2 37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24～48h，觀察平板。可見(jiàn)在TSA培養(yǎng)基表面出現(xiàn)光滑透明、針尖大小菌落。

4細(xì)菌鑒定

4.1革蘭氏染色

選取典型的單一菌落涂抹在玻璃片上，進(jìn)行革蘭氏染色，油鏡下可見(jiàn)分離菌為革蘭氏陰性小桿菌，菌體形態(tài)不單一，偶有細(xì)長(zhǎng)絲狀菌體。

4.2 PCR鑒定

利用副豬嗜血桿菌的種特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為：12.5μL 2×Taq PCR Master Mix，1μL模板，RA-F 0.5μL，RA-R 0.5μL，補(bǔ)無(wú)菌H2O至總體積25μL，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組；PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性4min；95℃變性50s，58℃退火50s，72℃延伸50s，一共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。反應(yīng)結(jié)束后取10μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，并在凝膠成像儀上照相。凝膠成像后，擴(kuò)增片段大小與預(yù)期的目的條帶821bp大小一致。由此確定此次發(fā)病的病原菌為副豬嗜血桿菌。

5藥敏試驗(yàn)

采用藥敏紙片K-B瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。選用慶大霉素、新霉素、阿莫西林、氨芐西林、鹽酸多西環(huán)素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、替米考星、四環(huán)素、土霉素、硫酸卡那霉素、頭孢氨芐、甲砜霉素、硫酸黏菌素、林可霉素、氟苯尼考共16種常規(guī)抗生素對(duì)副豬嗜血桿菌分離株進(jìn)行藥物敏感性分析。挑取純化后的分離菌均勻接種于直徑約10cm的TSA培養(yǎng)基平板上，待稍干后，將各種藥敏紙片均勻分布于TSA培養(yǎng)基上，5% CO2培養(yǎng)24h，觀察抑菌圈的大小。結(jié)果顯示，分離菌對(duì)鹽酸多西環(huán)素、硫酸黏菌素高敏，對(duì)甲砜霉素、環(huán)丙沙星中敏，對(duì)新霉素、氟苯尼考、恩諾沙星低敏，其余耐藥。通過(guò)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選擇2～3種敏感藥物交替使用，并對(duì)健康豬群通過(guò)拌料或飲水適量的輔喂維生素和抗生素，提高豬的抵抗力。1周后，疫情得到有效控制，無(wú)新發(fā)和死亡病例出現(xiàn)。同時(shí)建議該豬場(chǎng)對(duì)場(chǎng)內(nèi)2～3周齡仔豬進(jìn)行副豬嗜血桿菌疫苗的常規(guī)免疫。

6副豬嗜血桿菌病預(yù)防措施

副豬嗜血桿菌病是豬群易感的一種傳染病，在全世界范圍內(nèi)流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重危害和巨大經(jīng)濟(jì)損失。近幾年我國(guó)副豬嗜血桿菌病的發(fā)病率呈現(xiàn)了升高的趨勢(shì)，感染后病程通常比較短，如果不及時(shí)治療，病豬死亡率非常高。該病還多與其他疾病混合感染，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

預(yù)防副豬嗜血桿菌病的發(fā)生，可以從以下幾個(gè)方面入手：①加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善飼養(yǎng)環(huán)境，保證圈舍干燥清潔和良好通風(fēng)，提供適宜的溫濕度。采用全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，實(shí)行分級(jí)飼養(yǎng)，豬舍消毒后要保證一定的空置期，控制或者減少豬群流動(dòng)；②飼養(yǎng)區(qū)內(nèi)嚴(yán)禁飼養(yǎng)其他動(dòng)物如貓狗等，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)定期開(kāi)展滅鼠、驅(qū)蟲、消毒等工作；③給豬群飼喂優(yōu)質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)全面的豬飼料，同時(shí)做好日常的藥物保健工作，提高豬只的抗病力；④制定科學(xué)合理的免疫程序，并定期進(jìn)行疫病的免疫排查工作；⑤飼養(yǎng)過(guò)程中，盡可能避免各種應(yīng)激對(duì)豬群的影響，如做好季節(jié)交替時(shí)的防寒保暖、避免長(zhǎng)途運(yùn)輸和驚嚇豬群等；⑥一旦發(fā)病，應(yīng)及時(shí)隔離，及時(shí)治療，并對(duì)全群加以防控。同時(shí)還應(yīng)對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)15～60日齡的仔豬實(shí)施緊急接種。目前治療副豬嗜血桿菌病主要治療方法還是依賴抗菌藥物。用藥最好在藥敏試驗(yàn)的指導(dǎo)下進(jìn)行，有利于疫情的有效控制及避免抗生素類藥物的濫用。

7小結(jié)

近年來(lái)，隨著養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，飼養(yǎng)密度過(guò)大、飼養(yǎng)管理水平差等原因使豬群整體免疫力下降，副豬嗜血桿菌病的易感率和病死率呈逐漸上升的趨勢(shì)，帶菌豬和慢性感染豬長(zhǎng)期存在，給健康豬群帶來(lái)了嚴(yán)重的威脅。因此加強(qiáng)副豬嗜血桿菌的防治顯得尤為重要。由于副豬嗜血桿菌病的發(fā)病速度很快，且常與豬鏈球菌病、豬圓環(huán)病毒病、豬細(xì)小病毒病等疾病混合感染，給臨床診斷帶來(lái)了一定的難度。通常健康豬的呼吸道中帶有非致病性的副豬嗜血桿菌，病豬和帶菌豬是副豬嗜血桿菌的主要傳染源。豬只的免疫狀況、應(yīng)激刺激很容易誘發(fā)該病，尤其以斷奶仔豬和保育豬更易感染發(fā)病。目前副豬嗜血桿菌病的防治主要通過(guò)藥物和接種疫苗，但由于副豬嗜血桿菌血清型眾多，不同血清型間缺乏交叉保護(hù)或保護(hù)效果較差，而且不同地區(qū)流行株也有所差異，因此僅僅依靠疫苗進(jìn)行該病的防控尚有些難度。█