注射用右雷佐生與不同輸液溶媒配伍的穩(wěn)定性考察

張亞坤，劉 劍，貢 瑩，陳 瑋，張志清

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050000)

蒽環(huán)類抗癌藥物屬于廣譜抗癌藥，嚴(yán)重且不可逆心臟毒性的不良反應(yīng)使其臨床應(yīng)用受到限制[1]。作為目前唯一獲批的此類抗癌藥物的心臟毒性保護(hù)劑，右雷佐生(dexrazoxane)被國內(nèi)外多家指南推薦用于蒽環(huán)類藥物心臟毒性的防治[2]。2013版蒽環(huán)類化療藥物心臟毒性防治指南中明確表示，每次給予蒽環(huán)類藥物前均應(yīng)在30 min內(nèi)給予右雷佐生。右雷佐生是雷佐生的右旋體[3]。研究表明，右雷佐生對(duì)改善含蒽環(huán)類藥物治療的患者心臟功能具有積極作用[4-6]。相對(duì)單用蒽環(huán)類藥物，聯(lián)用右雷佐生更具有成本效果優(yōu)勢(shì)[7]。臨床上，右雷佐生應(yīng)與其自帶專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉注射液)配合使用。專用溶媒的包裝容器為25 mL安瓿，瓶體大，瓶頭短小，在實(shí)際臨床工作中，存在不使用專用溶媒或用一支專用溶媒溶解兩支藥物的情況[8]。未使用專用溶媒溶解的右雷佐生穩(wěn)定性如何未見相關(guān)報(bào)道。鑒于此，參考有關(guān)文獻(xiàn)[9-12]，本試驗(yàn)從各組配伍液的外觀、pH值、不溶性微粒數(shù)、相對(duì)百分含量變化等方面考察使用不同溶媒溶解后對(duì)右雷佐生穩(wěn)定性的影響，旨在為臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與試劑

Waters Acquity UPLC系統(tǒng)(包括四元梯度泵、恒溫自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測(cè)器等，美國Waters公司)；電子分析天平(CPA225D，德國Sartorius)；微粒分析儀(GWF-8JA，天津天河醫(yī)療儀器有限公司)；微處理pH計(jì)(DP24，HANNA儀器)。右雷佐生對(duì)照品(遼陽眾諾化學(xué)工業(yè)有限公司，含量99.48%，批號(hào) 20170401)；注射用右雷佐生(江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，規(guī)格250 mg/支，批號(hào) E1711092)；0.9%氯化鈉注射液(石家莊市第四制藥有限公司，批號(hào) 1712263801)；5%葡萄糖注射液(石家莊市第四制藥有限公司，批號(hào) 1801123803)；磷酸二氫鉀(分析純，天津市永大化學(xué)試劑公司有限公司，批號(hào) YD20170303)，甲醇(色譜純，美國Fisher，批號(hào)178338)，水為二次蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相：0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇(90∶10)；流速：0.4 mL/min；檢測(cè)波長：209 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

2.2含量測(cè)定

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取右雷佐生對(duì)照品21 mg于100 mL量瓶中，用水溶解并定容，得214.8 mg/L的對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 室溫條件下，參照藥品說明書，模擬臨床常用給藥劑量，將注射用右雷佐生分別用專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉溶液)或無菌水溶解后，再分別用5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液稀釋，混勻，得質(zhì)量濃度為1 g/L的供試品溶液。

2.2.3專屬性考察 取5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉注射液)和右雷佐生對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，右雷佐生保留時(shí)間為1.11 min，右雷佐生峰形良好，分離完全，理論踏板數(shù)在正常范圍內(nèi)(圖1)。

圖1 UPLC色譜圖

2.2.4線性關(guān)系 精密吸取對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，10 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，得系列濃度的右雷佐生溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。以右雷佐生濃度x為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=19 615x+5 137.8(r=0.999 9，n=6)。結(jié)果表明，右雷佐生質(zhì)量濃度在4.30～42.96 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59，21.48，30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定3 d，記錄峰面積，考察精密度。結(jié)果顯示，各濃度溶液的日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)分別為0.91%、0.95%、0.94%，日間RSD分別為1.36%、1.04%、1.31%，表明精密度良好。

2.2.6重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59、21.48、30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，各濃度溶液的RSD分別為0.75%、0.65%、0.94%，表明重復(fù)性良好。

2.2.7回收率試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59、21.48、30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算濃度，所得濃度與實(shí)際濃度之比為回收率。結(jié)果顯示各濃度溶液的回收率分別為101.4%，100%，99.5%，RSD分別為1.11%、0.65%、0.96%，表明回收率良好。

2.3右雷佐生與不同載體溶媒配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.3.1外觀變化 按“2.2.2”中供試品溶液的制備方法制備溶液(n=3)，依次標(biāo)記為NZ，GZ，NF，GF(N：溶媒為0.9%氯化鈉注射液，G：溶媒為5%葡萄糖注射液，Z：專用溶媒溶解，F(xiàn)：非專用溶媒溶解)，在25 ℃下放置，并于0，2，4，6，8，12，24 h用目測(cè)法觀察配伍溶液的外觀變化，各組配伍溶液均為透明溶液，肉眼未觀察到絮狀物、渾濁或沉淀產(chǎn)生，24 h內(nèi)顏色沒有改變。

2.3.2pH值變化 取“2.3.1”項(xiàng)下各配伍溶液，于0，2，4，6，8，12，24 h用pH計(jì)測(cè)定其pH值。結(jié)果顯示RSD值依次為0.76%、0.78%、0.54%、1.14%，結(jié)果變化趨勢(shì)見圖2。

圖2 注射用右雷佐生配伍后溶液pH值變化(n=3)

2.3.3相對(duì)百分含量變化 在“2.3.1”操作基礎(chǔ)上，各組供試品溶液于0，2，4，6，8，12，24 h采用“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析測(cè)定。將0時(shí)的右雷佐生質(zhì)量濃度計(jì)為100%，計(jì)算出其余各時(shí)間點(diǎn)的藥物相對(duì)百分含量。結(jié)果顯示，前6 h內(nèi)專用溶媒組右雷佐生的相對(duì)百分含量為100.00%～96.33%，RSD<2%，非專用溶媒組右雷佐生的相對(duì)百分含量為100.00%～87.80%，RSD<2%。6 h以后各配伍液的相對(duì)百分含量為100.00%～74.28%，RSD>6%，表明在前6 h內(nèi)，使用專用溶媒溶解的配伍液含量無明顯變化(≥95%初始濃度)，而非專用溶媒組含量發(fā)生明顯變化(<95%初始濃度)；6 h以后，各配伍液的含量顯著下降。結(jié)果變化趨勢(shì)見圖3。

圖3 注射用右雷佐生配伍后含量變化(n=3)

2.3.4不溶性微粒數(shù)變化 在“2.3.1”操作基礎(chǔ)上，于0，2，4，6，8，12，24 h以微粒分析儀測(cè)定供試品溶液中粒徑≥10 μm以及≥25 μm的微粒數(shù)。結(jié)果顯示，使用專用溶媒溶解的配伍液，其不溶性微粒數(shù)均在規(guī)定范圍內(nèi)。非專用溶媒組，右雷佐生擴(kuò)容至5%葡萄糖注射液中，粒徑≥10 μm的不溶性微粒數(shù)超出了規(guī)定值。專用溶媒組和非專用溶媒組配伍液粒徑≥25 μm的不溶性微粒數(shù)均在規(guī)定值范圍內(nèi)。結(jié)果變化見圖4，5。

圖4 注射用右雷佐生配伍后≥10 μm微粒數(shù)變化(n=3)

圖5 注射用右雷佐生配伍后≥25 μm微粒數(shù)變化(n=3)

3 討 論

3.1含量測(cè)定方法的建立 右雷佐生屬于雙氧代二嗪類化合物，本試驗(yàn)采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，該色譜柱可耐受高比例水，適合分析水溶性物質(zhì)。參考右雷佐生含量HPLC方法[13-14]，本實(shí)驗(yàn)使用超高效液相色譜儀，調(diào)整流動(dòng)相為0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇(90:10，V/V)；流速0.4 mL/min，進(jìn)樣量2 μL。在上述色譜條件下，右雷佐生保留時(shí)間為1.11 min，樣品分析時(shí)長為3 min，基線平穩(wěn)，不受其他物質(zhì)干擾，分離度良好，理論踏板數(shù)在正常范圍內(nèi)。故該方法可用于右雷佐生含量的快速測(cè)定。

3.2專用/非專用溶媒溶解后不同配伍液的穩(wěn)定性 靜脈輸液的pH值應(yīng)接近體液的酸堿度，一般控制在4～9范圍內(nèi)。pH值在此范圍外的溶液，會(huì)造成血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷導(dǎo)致疼痛，并誘發(fā)血栓性靜脈炎和血小板聚集，且靜脈炎的嚴(yán)重程度與輸液的pH直接相關(guān)，pH值越低，靜脈炎會(huì)越嚴(yán)重[15]。本研究結(jié)果顯示，使用非專用溶媒組溶解的右雷佐生配伍液pH值為3.1左右；使用專用溶媒溶解的右雷佐生配伍液的pH值保持在4.7左右，可以在一定程度上減輕輸液時(shí)對(duì)患者的刺激性和潛在危害。專用溶媒為0.167 mol/L乳酸鈉注射液,可起到調(diào)節(jié)配伍液pH值的作用。

藥物含量降低會(huì)導(dǎo)致藥物療效降低，影響藥物治療的有效性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用專用溶媒溶解的右雷佐生溶液的藥物含量下降緩慢，且在配制6 h內(nèi)無明顯變化，而非專用溶媒組含量下降較快；各組配伍液藥物含量在配制6 h后均發(fā)生明顯下降(以含量是否≥95%初始濃度為判定依據(jù)[16])。

靜脈輸液不溶性微粒是指不溶于輸液且肉眼不可見的非代謝性顆粒雜質(zhì)(粒徑<50 μm)，進(jìn)入人體將對(duì)微循環(huán)有不同程度的影響。研究發(fā)現(xiàn)，不溶性微粒能夠引起熱源反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、肉芽腫及血管栓塞，嚴(yán)重的甚至能引起癌癥[17]。據(jù)2015版《中國藥典》，除另有規(guī)定外，裝量>100 mL的靜脈注射液，粒徑≥10 μm的不溶性微粒數(shù)不得超過25粒/mL，≥25 μm的不溶性微粒數(shù)不得超過3粒/mL。上述試驗(yàn)結(jié)果顯示，使用專用溶媒溶解后稀釋的配伍液，以及使用非專用溶媒+氯化鈉注射液稀釋的配伍液不溶性微粒數(shù)均符合規(guī)定，而使用非專用溶媒+葡萄糖注射液的配伍液粒徑≥10 μm的微粒數(shù)超出規(guī)定值。初步認(rèn)為這與右雷佐生在5%葡萄糖注射液中溶解性較差，加專用溶媒可改善其溶解性能有關(guān)。

綜上所述，使用專用溶媒溶解的注射用右雷佐生溶液在6 h內(nèi)的含量、不溶性微粒數(shù)和pH值均在正常范圍內(nèi)，穩(wěn)定性優(yōu)于非專用溶媒組。建議，為保證藥物治療的安全性和有效性，臨床在使用注射用右雷佐生時(shí)，應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求配制使用該藥并在溶解后6 h內(nèi)輸注完畢。