新癀片外用制劑鎮(zhèn)痛模型的溶媒篩選及研究

侯紅平，關(guān)斌，詹志學(xué)，張廣平，陳西翌，高云航，宋玲，李晗，陳曉琳，陳騰飛，南淑華，葉祖光

新癀片是廈門(mén)中藥廠有限公司生產(chǎn)的現(xiàn)代研制方，為國(guó)家中藥保護(hù)品種，主要由三七、人工牛黃、珍珠層粉、腫節(jié)風(fēng)、水牛角濃縮粉、紅粬、豬膽汁膏、肖梵天花、吲哚美辛等藥物組成。其中三七可活血化瘀、消腫止痛，人工牛黃具有清熱解毒之功效，珍珠層粉燥濕斂瘡，腫節(jié)風(fēng)具有消腫止痛的作用，水牛角可清熱消腫、涼血，紅粬可起到化瘀的作用，豬膽汁可清熱解毒、消腫止痛，肖梵天花具有活血消腫、清熱解毒之功效，其中的西藥成分吲哚美辛具有清熱止痛、活血消腫的作用[1-2]。新癀片具有清熱止痛、活血消腫作用。目前，臨床發(fā)現(xiàn)新癀片除口服外，外用于骨性關(guān)節(jié)炎、帶狀皰疹、糖尿病足等方面亦具有明顯的療效[3-4]，但對(duì)于溶媒的使用臨床醫(yī)師往往根據(jù)其用藥習(xí)慣，無(wú)統(tǒng)一的要求，不同溶媒對(duì)藥效的影響缺乏研究數(shù)據(jù)的支撐。本研究采用2種鎮(zhèn)痛模型，對(duì)新癀片目前在臨床外用制劑常用的溶媒冷開(kāi)水、醋和酒進(jìn)行平行比較研究，為臨床合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g。(2)試劑試藥：藥品：新癀片，為淡棕灰色至棕色的片劑，每片含吲哚美辛6.8 mg，由廈門(mén)中藥廠有限公司提供，批號(hào)：180327。扶他林凝膠，每克藥膏含雙氯芬酸二乙胺0.01 g，白色或淡黃色乳脂樣乳膏，規(guī)格20 g/支，由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：VP2012。溶媒：冷開(kāi)水：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水，由易神州(北京)科技有限公司生產(chǎn)的RO-300型反滲透制水機(jī)制得，燒開(kāi)后冷卻待用。醋：海天白醋，5度，購(gòu)于佛山市海天調(diào)味食品股份有限公司，生產(chǎn)日期：20190428，批號(hào)：HB082415C。酒：老即墨酒，酒精度：11.5 %VOL，常溫、干燥保存，山東即墨黃酒廠有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)日期：201811198。不同溶媒溶解的新癀片配制：一定量的新癀片用研缽研成細(xì)末狀，加入不同的溶劑冷開(kāi)水、醋、酒溶媒混勻配置成膏狀，4 ℃待用。(3)儀器：RCY-2熱板測(cè)痛儀(上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)儀器發(fā)展有限公司)，Sartorius BSA 3202S-CW天平(德國(guó))，Sartorius BSA 8201-CW天平(德國(guó))。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 給藥劑量及方法：分組及給藥劑量：(1)生理鹽水組：給予生理鹽水0.15 ml/只；(2)陽(yáng)性對(duì)照組：給予扶他林凝膠0.15 ml/只；(3)溶媒水組：用冷開(kāi)水溶解新癀片，1 片/ml，0.32 g/ml，0.2 ml/只，相當(dāng)于3.2 g/kg；(4)溶媒醋組：用海天白醋溶解新癀片，1 片/ml，0.32 g/ml，0.2 ml/只，相當(dāng)于3.2 g/kg；(5)溶媒酒組：用老即墨酒溶解新癀片，1 片/ml，0.32 g/ml，0.2 ml/只，相當(dāng)于3.2 g/kg。給藥面積：3 cm×2 cm。給藥方法：所有組別小鼠均背部脫毛，將相應(yīng)藥物均勻涂抹在小鼠背部，按摩40周，促進(jìn)吸收，覆蓋紗布，醫(yī)用膠帶固定，動(dòng)物單籠飼養(yǎng)，給藥后4 h拆除固定紗布，用沾有純凈水的紗布擦拭殘留在皮膚上的藥物，連續(xù)給藥3 d。

1.2.2 扭體實(shí)驗(yàn)：ICR小鼠60只，雌雄各半，18～22 g，動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d，根據(jù)小鼠體質(zhì)量隨機(jī)分為5組：生理鹽水組、陽(yáng)性對(duì)照組、溶媒水組、溶媒醋組、溶媒酒組，每組12只，雌雄各半。各組小鼠均按1.2.1項(xiàng)下給藥劑量和給藥方法給藥3 d，第3天給藥后40 min腹腔注射1%冰醋酸生理鹽水溶液0.1 ml/10 g，比較各組小鼠首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間(潛伏期)及20 min內(nèi)發(fā)生扭體反應(yīng)的次數(shù)。20 min內(nèi)未出現(xiàn)扭體的小鼠，其潛伏期記為20 min。

1.2.3 舔足實(shí)驗(yàn)：ICR小鼠，雌性，18～22 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d，給藥前將小鼠放在預(yù)熱至55 ℃的熱板測(cè)痛儀上，以小鼠舔后足反應(yīng)的潛伏期為痛閾值，測(cè)定基礎(chǔ)痛閾值，將反應(yīng)潛伏期小于5 s、大于40 s和出現(xiàn)跳躍反應(yīng)者剔除后選擇小鼠60只，測(cè)定2次基礎(chǔ)痛閾值，根據(jù)2次痛閾值的平均值并結(jié)合小鼠體質(zhì)量隨機(jī)分為生理鹽水組、陽(yáng)性對(duì)照組、溶媒水組、溶媒醋組、溶媒酒組，每組12只，給藥劑量和給藥方法按1.2.1項(xiàng)下，連續(xù)給藥3 d，測(cè)定小鼠末次給藥后30、60、120、180和240 min的痛閾值，大于60 s記為60 s。

2 結(jié) 果

2.1 扭體實(shí)驗(yàn) 陽(yáng)性對(duì)照組、溶媒水組和溶媒酒組的潛伏期長(zhǎng)于生理鹽水組(P<0.05或P<0.01)，且溶媒水組和溶媒酒組的潛伏期長(zhǎng)于溶媒醋組(P<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組、溶媒水組、溶媒醋組和溶媒酒組扭體次數(shù)均少于生理鹽水組(P<0.01)；溶媒水組、溶媒醋組和溶媒酒組小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同溶媒溶解的新癀片對(duì)醋酸導(dǎo)致疼痛模型的影響

2.2 舔足實(shí)驗(yàn) 各組動(dòng)物基礎(chǔ)痛閾值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。溶媒水組、溶媒醋組小鼠給藥30、60、120、180和240 min痛閾值高于生理鹽水組(P<0.05或P<0.01)，起效時(shí)間為給藥后30 min，維持時(shí)間大于給藥后240 min。陽(yáng)性對(duì)照組、溶媒酒組小鼠給藥后60、120、180和240 min痛閾值高于生理鹽水組(P<0.05或P<0.01)，起效時(shí)間為給藥后60 min，維持時(shí)間大于給藥后240 min。見(jiàn)表2。

表2 不同溶媒溶解的新癀片對(duì)小鼠熱板舔足時(shí)間影響

3 討 論

新癀片具有活血化瘀、消腫止痛、鎮(zhèn)痛抗炎、緩解肌肉痙攣等作用，臨床應(yīng)用較為普遍[5-6]?，F(xiàn)代藥理研究顯示，新癀片外涂給藥對(duì)大、小鼠水浴甩尾、小鼠醋酸扭體等溫?zé)岽碳?、化學(xué)刺激引起的疼痛有非常顯著的鎮(zhèn)痛作用，對(duì)小鼠耳腫、大鼠角叉菜膠足腫、棉球肉芽腫等急慢性炎性反應(yīng)有非常顯著的抑制作用[7]。臨床研究表明，新癀片外用制劑可明顯改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎或者的癥狀和疼痛，具有確切的療效[3,8]。

外用制劑的溶媒眾多，包括冷開(kāi)水、醋、酒等，效果不同。酒一般用高梁、大麥、米、甘薯、玉米、葡萄等為原料釀制而成，具有通血脈、行藥勢(shì)之功效[9-10]，常用于風(fēng)寒痹痛、筋脈攣急、胸痹、心痛、脘腹冷痛，在臨床上應(yīng)用較為廣泛。

本研究結(jié)果顯示，在醋酸致小鼠疼痛模型上，除溶媒醋組小鼠的潛伏期與生理鹽水組比較未見(jiàn)顯著性差異外，水、酒溶媒組均顯示出明顯的鎮(zhèn)痛作用。3組溶媒組扭體次數(shù)未見(jiàn)顯著性差異，但從數(shù)據(jù)上可看出鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)弱順序分別為：溶媒酒≥溶媒水>溶媒醋。在熱刺激致小鼠疼痛模型上，3組溶媒組均顯示出明顯的鎮(zhèn)痛作用，均可維持到給藥后240 min。但起效時(shí)間存在差異，溶媒水組和溶媒醋組的起效時(shí)間為給藥后30 min，溶媒酒組的起效時(shí)間為給藥后60 min。從整體數(shù)據(jù)上可看出鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)弱順序分別為：溶媒水>溶媒醋>溶媒酒。在兩種疼痛模型上，溶媒導(dǎo)致的鎮(zhèn)痛作用有所差異問(wèn)題，我們又重復(fù)進(jìn)行了熱刺激致痛模型上三種溶媒的比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，兩次實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近，三種溶媒的作用趨勢(shì)相同。對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，我們認(rèn)為存在以下幾種可能：(1)對(duì)于鈍痛型疼痛，即化學(xué)刺激致痛模型，溶媒酒≥溶媒水>溶媒醋；(2)對(duì)于銳痛型疼痛，即熱刺激致痛模型，溶媒水>溶媒醋>溶媒酒。鑒于溶媒水在兩種疼痛模型上均作用顯著，因此水應(yīng)為最佳溶媒；(3)傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，酒或醋均具有一定的活血作用，但在該實(shí)驗(yàn)條件下未觀察到與溶媒水比較的優(yōu)勢(shì)作用。具體原因有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，新癀片外用制劑的溶媒中溶媒水的鎮(zhèn)痛效果較佳，但不同溶媒的藥效特點(diǎn)可能有所不同，需進(jìn)一步研究和探索。