高效液相色譜技術(shù)在不同廠家谷維素片成分含量分析中的應(yīng)用

馮久芳，梅 芊

(1.商丘市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 商丘 476000；2.河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州450018)

谷維素片為鎮(zhèn)靜助眠類(lèi)非處方藥品，研究[1-2]顯示，其具有調(diào)節(jié)自主神經(jīng)功能及內(nèi)分泌平衡障礙的作用，在神經(jīng)官能癥、經(jīng)前期緊張綜合征、更年期綜合征等疾病的臨床治療中被廣泛應(yīng)用。查閱相關(guān)資料[3-5]發(fā)現(xiàn)，谷維素及谷維素片的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》，且本品多從米糠油、胚芽油等谷物油脂中提取，并以混合物形式存在，組分組成及含量可受提取物產(chǎn)地、季節(jié)變化及提取工藝影響，故實(shí)行全面質(zhì)控的難度大。本研究基于高效液相色譜分析技術(shù)，對(duì)國(guó)內(nèi)外谷維素片樣本的高效液相特征峰及主要成分含量的進(jìn)行對(duì)比分析，比較不同廠家生產(chǎn)的谷維素片成分含量，旨在為谷維素及其片劑的質(zhì)量控制提供參考，總結(jié)如下。

1 儀器及樣品

1.1 檢測(cè)儀器 本次選用美國(guó)安捷倫公司生產(chǎn)的Agilent 1200高效液相色譜儀，梅特勒托利多儀器有限公司生產(chǎn)的XS205DU電子天平，昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)的KQ-600VDB型三品數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 谷維素片樣品 此次所用的純度99.53%γ-谷維素標(biāo)準(zhǔn)品由Stanford Analytical Chemicals Inc.提供，國(guó)產(chǎn)谷維素片樣品為2014年全國(guó)評(píng)價(jià)性抽樣檢驗(yàn)樣品，涉及山西云鵬制藥有限公司、上海玉瑞生物科技藥業(yè)有限公司、天津力生制藥股份有限公司3家企業(yè)共30批次，規(guī)格均為每片10 mg。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱為Innoval C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：乙腈-甲醇(甲酸銨含量5 mmol·L-1)=50∶50，1 mL·min-1；柱溫設(shè)定35 ℃，進(jìn)樣體積為20 μL，DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)326 nm。

2.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液制備：稱(chēng)取谷維素對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定，置于100 mL量瓶中，加入適量無(wú)水乙醇，超聲處理使溶解后，冷置，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。供試品溶液制備：取供試品10片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于1片量)，精密稱(chēng)定，置于100 mL量瓶，同法處理后冷置、搖勻、濾過(guò)后取濾液，作為供試品溶液。陰性對(duì)照溶液的制備：選取處方量的輔料混合均勻，制備缺谷維素陰性樣品，制成陰性對(duì)照溶液，方法同上。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果在谷維素主峰位置無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 取谷維素對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定，置于100 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇適量，超聲處理使完全溶解后，冷置，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、3、5、10、15、20 mL，分別置于25 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻。分別精密量取上述溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，樣品濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=164.23X+0.17(r=0.999 9)，表明谷維素濃度在4.104～82.080 mg·mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

注：1為谷維素色譜主峰

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 隨機(jī)選取同一批次谷維素片，依照上述方法平行制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，谷維素平均含量約為97.54%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)為0.60%，證實(shí)重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取適量陰性樣品置于200 mL量瓶中，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液4、5、6 mL，依照供試品溶液制備方法配置為80%、100%、120%的回收率溶液，每個(gè)濃度3份，進(jìn)樣測(cè)定后計(jì)算回收率，平均回收率達(dá)101.20%(RSD為0.40%)。

3 結(jié)果

3.1 樣品測(cè)定結(jié)果 3家國(guó)有企業(yè)的30批次谷維素片樣品含量介于95.00%～105.00%，其中含量95.00%～96.99%占11批次，97.00%～98.99%占19批次，99.00%～100.99%占16批次，101.00%～105.00%占14批次。

3.2 國(guó)產(chǎn)谷維素片及相對(duì)成分含量 3家國(guó)有企業(yè)中不同企業(yè)及不同批次生產(chǎn)的谷維素片色譜圖中存在色譜峰差異，依照峰面積歸一化方法計(jì)算得出各色譜峰相對(duì)含量。見(jiàn)表1。

表1 國(guó)產(chǎn)谷維素片相對(duì)成分含量比較

4 討論

4.1 測(cè)定方法選擇 谷維素片臨床廣泛應(yīng)用于調(diào)節(jié)自主神經(jīng)功能及糾正內(nèi)分泌平衡障礙，考慮其提取物來(lái)源及混合物存在形式，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)下的谷維素片劑中亦可能存在元素雜質(zhì)，可能影響藥物安全性[6]。市場(chǎng)現(xiàn)有的谷維素片中各組分存在差異性，有研究[7]采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)不同廠家生產(chǎn)的谷維素片特征譜圖相似的評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，我國(guó)企業(yè)生產(chǎn)的谷維素片含量范圍存在一定差異，且與谷維素原研發(fā)國(guó)日本企業(yè)生產(chǎn)的谷維素片存在一定差異性，因此國(guó)產(chǎn)谷維素片的質(zhì)量控制尤為重要。近紅外漫反射光譜分析技術(shù)、改變?nèi)軇┑腢V法均為目前進(jìn)行谷維素含量測(cè)定的常用方法，但是其測(cè)定過(guò)程較為繁瑣，并不能滿(mǎn)足目前制藥企業(yè)實(shí)施在線質(zhì)控的需求[8]。依照谷維素的化學(xué)性質(zhì)特點(diǎn)，本文采用高效液相色譜技術(shù)分析不同廠家生產(chǎn)谷維素片的含量，方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便易行。

4.2 溶劑的選擇 本研究表明，谷維素可在氯仿、二氯甲烷中溶解，在乙醇及正庚烷中微溶，但不溶于水，此次分別選取二氯甲烷、乙醇及正庚烷三種溶劑溶解，以考量最適用于谷維素的溶劑。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用無(wú)水乙醇作為溶劑，溶解充分且環(huán)境污染小。

4.3 色譜條件優(yōu)化 色譜條件優(yōu)化處理及重復(fù)率實(shí)驗(yàn)、回收率實(shí)驗(yàn)，符合方法學(xué)要求，為谷維素片生產(chǎn)的質(zhì)量控制及含量測(cè)定提供有效參考。但本次研究仍存在一定不足之處，如未對(duì)谷維素片元素雜質(zhì)含量進(jìn)行細(xì)致分析，未明確組分及相對(duì)含量對(duì)谷維素片療效差異性的影響，后續(xù)將加強(qiáng)對(duì)此方面的深入研究。

綜上，基于高效液相色譜技術(shù)分析不同廠家生產(chǎn)谷維素片成分的方法準(zhǔn)確可靠，可用于谷維素片組分及相對(duì)含量的測(cè)定，亦可為后續(xù)的谷維素片組分及療效相關(guān)性分析奠定基礎(chǔ)。