馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的HPLC指紋圖譜建立及其中10種有效成分的含量測(cè)定

胡靜 楊媛媛 崔小敏 任慧 雷琨 陳志永

摘 要 目的：建立馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的高效液相（HPLC）指紋圖譜，并測(cè)定其中10種有效成分的含量。方法：采用HPLC 法。色譜柱為Inertsil ODS-3 C18，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水溶液（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，柱溫為25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm（10～15 min，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿）、300 nm（70～120 min，桂皮醛）、345 nm（15～70 min，新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C），進(jìn)樣量為10 μL。以東莨菪內(nèi)酯峰為參照，繪制10批樣品的HPLC指紋圖譜，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，確定共有峰。結(jié)果：10批樣品共有18個(gè)共有峰，相似度均大于0.980，共指認(rèn)出鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸B、柚皮苷、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛等12個(gè)成分。鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛等10個(gè)成分檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍分別為2.475～247.5、2.600～260.0、3.820～382.0、3.900～390.0、3.060～306.0、4.760～476.0、4.540～454.0、4.900～490.0、4.540～454.0、7.590～759.0 μg/mL（r 均大于 0.999 0）;定量限分別為0.320 0、0.350 0、0.021 4、0.024 3、0.036 8、0.025 7、0.152 1、0.042 9、0.025 1、0.350 3 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.160 0、0.180 0、0.007 9、0.004 0、0.001 2、0.007 3、0.076 0、0.001 4、0.008 1、0.201 4 μg/mL;精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD均小于2%;加樣回收率為95.03%～106.85%（RSD為0.67%～2.68%，n=6）;上述10種成分的含量分別為0.013 3～0.214 1 mg/mL。結(jié)論：所建指紋圖譜穩(wěn)定、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可用于馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的質(zhì)量控制;含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確可靠，可用于同時(shí)測(cè)定其中10種有效成分的含量。

關(guān)鍵詞 馮了性風(fēng)濕跌打藥酒;高效液相色譜法;指紋圖譜;含量測(cè)定

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish an HPLC fingerprint for Fengliaoxing fengshi dieda wine， and to determine the contents of 10 effective constituents. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on Inertsil ODS-3 C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile -0.1% phosphoric acid water （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 25 ℃， and detection wavelength was set at 210 nm（10-15 min， hydrochloride ephedrine， hydrochloride pseudoephedrine）， 300 nm（70-120 min， cinnamaldehyde）， 345 nm（15-70 min， neochlorogenic acid， scopolin， chlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， scopoletin， isochlorogenic acid A， isochlorogenic acid C）. The sample size was 10 μL. Using scopoletin peak as reference， HPLC fingerprints of 10 batches of samples were drawn. The similarity evaluation was performed by using Similarity Evaluation System of? TCM Chromatographic Fingerprint （2012 edition） to confirm common peak. RESULTS： There were 18 common peaks in HPLC chromatograms of 10 batches of samples， and the similarity was above 0.980. Totally 12 components including hydrochloride ephedrine， hydrochloride pseudoephedrine， neochlorogenic acid， scopolin， chlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， scopoletin， isochlorogenic acid B， narigin， isochlorogenic acid A， isochlorogenic acid C and cinnamaldehyde widentified. The linear range of hydrochloride ephedrine， hydrochloride pseudoephedrine， neochlorogenic acid， scopolin， chlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， scopoletin， isochlorogenic acid A， isochlorogenic acid C and cinnamaldehyde were 2.475-247.5， 2.600-260.0， 3.820-382.0， 3.900-390.0， 3.060-306.0， 4.760-476.0， 4.540-454.0， 4.900-490.0， 4.540-454.0， 7.590-759.0 μg/mL （r>0.999 0）. The limits of quantitation were 0.320 0， 0.350 0， 0.021 4， 0.024 3， 0.036 8， 0.025 7， 0.152 1， 0.042 9， 0.025 1， 0.350 3 μg/mL， respectively;the limits of detection were 0.160 0， 0.180 0， 0.007 9， 0.004 0， 0.001 2， 0.007 3， 0.076 0， 0.001 4， 0.008 1， 0.201 4 μg/mL， respectively. RSDs of precision， stability and reproducibility tests were all lower than 2%. The? recoveries were 95.03%-106.85% （RSD were 0.67%-2.68%，n=6）.The contents were 0.013 3- 0.214 1 mg/mL. CONCLUSIONS： Established fingerprint is stable， accurate and specific， and can be used for quality control of Fengliaoxing fengshi dieda wine; the content determination method is rapid， accurate and reliable， and can be used for simultaneous determination of 10 components.

KEYWORDS? ?Fengliaoxing fengshi dieda wine; HPLC; Fingerprints; Content determination

馮了性風(fēng)濕跌打藥酒收載于2015年版《中國(guó)藥典》（一部），該藥由丁公藤、麻黃、桂枝等27味中藥組成[1]。方中丁公藤祛風(fēng)濕為主藥，配以桂枝、麻黃、羌活、蠶沙、白芷發(fā)散風(fēng)寒、祛風(fēng)濕、舒筋絡(luò)，香附、木香、厚樸、枳殼、陳皮、蒼術(shù)、苦杏仁、豬牙皂行氣燥濕化痰，小茴香、當(dāng)歸、川芎、乳香、沒(méi)藥、五靈脂、牡丹皮溫經(jīng)活血祛瘀，白術(shù)、山藥、補(bǔ)骨脂、黃精、菟絲子、澤瀉補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝，臨床主要用于治療風(fēng)寒濕痹（風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕）、瘀滯腫痛、跌打損傷諸癥，療效確切[2-3]。目前，2015年版《中國(guó)藥典》（一部）關(guān)于該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未有含量測(cè)定和指紋圖譜測(cè)定項(xiàng)[1]，且現(xiàn)有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道中未有綠原酸類(lèi)和異綠原酸類(lèi)等有效成分的檢測(cè)[4-6]。雖然關(guān)紅暉等[7]建立了馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的高效液相（HPLC）指紋圖譜，但存在特征峰數(shù)量少、指紋特征不明顯等不足。由于馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的藥效成分較多，因此以單一成分或者單一藥材所含的有效成分作為定量測(cè)定指標(biāo)，不能全面控制其內(nèi)在質(zhì)量，也無(wú)法體現(xiàn)整體質(zhì)量。

中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段[8-10]，是國(guó)際公認(rèn)的控制中藥或天然藥材質(zhì)量的方法[11-12]，能夠體現(xiàn)中藥質(zhì)量控制的整體性[13-14]?；诖耍狙芯吭谇捌谘芯康幕A(chǔ)上，建立了馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的HPLC指紋圖譜，并測(cè)定了其中10種有效成分的含量，旨在為其整體質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀，包括G7114A紫外檢測(cè)器、G7129A自動(dòng)進(jìn)樣器、G7111A四元泵、OpenLAB? CDS色譜工作站（美國(guó)Agilent公司）;KQ-100型超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）;BS210S型、Max210g型萬(wàn)分之一電子分析天平，BT25S、Max21g型十萬(wàn)分之一電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

馮了性風(fēng)濕跌打藥酒[國(guó)藥集團(tuán)馮了性（佛山）藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z44022914，批號(hào)：170908、171106、171215、180521、180710、180823、180917、190104、190113、190325，規(guī)格：500 mL/瓶;依次編號(hào)為S1～S10];鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)：171241-201809，純度：≥98%）、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)：171237-201510，純度：≥98%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;柚皮苷對(duì)照品（批號(hào)：wkq19012809，純度：≥98%）、桂皮醛對(duì)照品（批號(hào)：wkq19031207，純度：≥98%）均購(gòu)自四川維克奇生物有限公司;東莨菪苷對(duì)照品（批號(hào)：16040805）、東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)：161208）、綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：1701904）、隱綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：17061401）、新綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：17062003）、異綠原酸A對(duì)照品（批號(hào)：18090301）、異綠原酸B對(duì)照品（批號(hào)：17121201）、異綠原酸C對(duì)照品（批號(hào)：18070401）均購(gòu)自上海圻明生物科技有限公司（純度均不低于98%）;乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 指紋圖譜的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-3 C18（150 mm ×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～15 min，5%A;15～15.01 min，5%A→10%A;15.01～40 min，10%A→15%A;40～70 min，15%A→25%A;70～90 min，25%A→40%A;90～110 min，40%A→70%A;110～120 min，70%A）;檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm（10～15 min，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿）、300 nm（70～120 min，桂皮醛）、345 nm（15～70 min，新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C、柚皮苷、異綠原酸B）;流速：1.0 mL/min;柱溫：25 ℃，進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2 混合對(duì)照品溶液Ⅰ的制備 精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸B、柚皮苷、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛對(duì)照品各適量，置于25 mL量瓶中，加甲醇制成上述12種成分質(zhì)量濃度分別為0.247 5、0.260 0、0.382 0、0.390 0、0.306 0、0.476 0、0.454 0、0.463 0、0.389 5、0.490 0、0.450 0、0.759 0 mg/mL的混合對(duì)照品Ⅰ溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密量取樣品10 mL，置于20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：S1）適量，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，以東莨菪內(nèi)酯峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，18個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.29%～1.68%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.22%～1.27%（n=6），表明本方法精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：S1）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以東莨菪內(nèi)酯峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，18個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.69%～1.31%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.51%～1.83%（n=6），表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品（編號(hào)：S1）約10 mL，共6份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以東莨菪內(nèi)酯峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，18個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.19%～0.81%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.41%～1.59%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.7 HPLC指紋圖譜的建立 取10批樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按 “2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》，以S4樣品（隨機(jī)選?。┥V圖作為對(duì)照色譜，設(shè)定時(shí)間窗為0～120 min，時(shí)間寬度為0.3 min，經(jīng)多點(diǎn)校正后自動(dòng)匹配，采用平均值法生成HPLC疊加指紋圖譜和對(duì)照指紋圖譜，詳見(jiàn)圖1、圖2。

2.1.8 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》對(duì)10批樣品進(jìn)行相似度分析。結(jié)果，10批樣品的相似度均大于0.980，提示不同批次樣品的相似度較高，生產(chǎn)工藝相對(duì)穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.1.9 共有峰的指認(rèn) 10批樣品共有18個(gè)共有峰，通過(guò)與混合對(duì)照品溶液Ⅰ（圖3）的保留時(shí)間比對(duì)，指認(rèn)了12個(gè)共有峰，分別為鹽酸麻黃堿（1號(hào)峰）、鹽酸偽麻黃堿（2號(hào)峰）、新綠原酸（3號(hào)峰）、東莨菪苷（4號(hào)峰）、綠原酸（5號(hào)峰）、隱綠原酸（6號(hào)峰）、東莨菪內(nèi)酯（8號(hào)峰）、異綠原酸B（11號(hào)峰）、柚皮苷（12號(hào)峰）、異綠原酸A（13號(hào)峰）、異綠原酸C（15號(hào)峰）、桂皮醛（18號(hào)峰）。其中，東莨菪內(nèi)酯峰（8號(hào)峰）峰形好、與相鄰色譜峰的分離度好、色譜響應(yīng)值較高，其對(duì)照品價(jià)廉易得且保留時(shí)間居中，故選擇東莨菪內(nèi)酯峰（8號(hào)峰）為參照，計(jì)算其他共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 同“2.1.1”項(xiàng)。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液Ⅱ的制備 按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛質(zhì)量濃度分別為0.247 5、0.260 0、0.382 0、0.390 0、0.306 0、0.476 0、0.454 0、0.490 0、0.454 0、0.759 0 mg/mL的混合對(duì)照品溶液Ⅱ。

2.2.3 供試品溶液的制備 同“2.1.3”項(xiàng)。

2.2.4 空白對(duì)照溶液的制備 精密量取40%乙醇10 mL，置于20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取上述混合對(duì)照品溶液Ⅱ、供試品溶液（編號(hào)：S1）、空白對(duì)照溶液各適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，各待測(cè)峰與相鄰峰間的分離度均大于1.5，理論板數(shù)不低于10 000，詳見(jiàn)圖4。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液Ⅱ0.1、0.5、1、5、10 mL，分別用甲醇定容至10 mL量瓶中，得系列濃度工作溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以各待測(cè)成分質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.2.7 定量限與檢測(cè)限考察 取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液Ⅱ，用甲醇逐級(jí)稀釋?zhuān)?“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1計(jì)算定量限、檢測(cè)限。結(jié)果，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛的定量限分別為0.320 0、0.350 0、0.021 4、0.024 3、0.036 8、0.025 7、0.152 1、0.042 9、0.025 1、0.350 3 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.160 0、0.180 0、0.007 9、0.004 0、0.001 2、0.007 3、0.076 0、0.001 4、0.008 1、0.201 4 μg/mL。

2.2.8 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液Ⅱ適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛峰面積的RSD分別為0.45%、0.64%、0.91%、0.31%、1.01%、1.14%、0.66%、0.80%、1.11%、0.81%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：S1）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛峰面積的RSD分別為1.76%、0.73%、0.87%、0.49%、0.34%、0.95%、1.23%、1.08%、0.68%、0.71%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取樣品（編號(hào)：S1）10 mL，共6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量。結(jié)果，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸A、異綠原酸C、桂皮醛含量的RSD分別為1.57%、0.42%、0.87%、0.89%、1.45%、1.09%、0.56%、0.63%、0.99%、1.83%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.11 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取樣品（編號(hào)：S1）5 mL，置于20 mL量瓶中，共6份，加入一定量的“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液Ⅱ，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，10種待測(cè)成分的加樣回收率范圍為95.03%～106.85%（RSD為0.67%～2.68%，n=6），結(jié)果見(jiàn)表5。

2.2.12 樣品含量測(cè)定 取10批樣品各10 mL，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品中各成分的含量。各樣品平行操作3次，結(jié)果見(jiàn)表6。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

本研究采用紫外檢測(cè)器在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，比較各待測(cè)成分在不同波長(zhǎng)下的色譜圖。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各待測(cè)成分的最大吸收波長(zhǎng)有顯著差異，大部分成分的最大吸收波長(zhǎng)在345 nm附近，且分離度較好，響應(yīng)值較高;雖然在300 nm波長(zhǎng)處時(shí)色譜峰信息最豐富，但各峰整體響應(yīng)較345 nm低，吸收不均勻，卻可指認(rèn)桂皮醛色譜峰，故選擇300 nm波長(zhǎng)檢測(cè)桂皮醛;鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿在210 nm波長(zhǎng)處有最大吸收且在其他波長(zhǎng)處的紫外吸收急劇下降，為保證共有峰數(shù)目多、分離度好、靈敏度高、干擾少，故選擇于210 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，于300 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)桂皮醛，于345 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)其余成分。

3.2 參照峰的選擇

由于鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的末端吸收干擾大，綠原酸類(lèi)、異綠原酸類(lèi)成分及桂皮醛易分解，故選擇對(duì)照品價(jià)廉易得、性質(zhì)穩(wěn)定、與其他峰分離度較好且藥理作用明確的東莨菪內(nèi)酯作為參照峰。

3.3 指標(biāo)性成分的選取

本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，丁公藤中含有大量的綠原酸類(lèi)、異綠原酸類(lèi)和香豆素類(lèi)成分，尤其是異綠原酸類(lèi)成分中的異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C等含量較高[15]，且具有抗炎[16]、抗氧化[17]等藥理活性，這些藥理活性與丁公藤具有的抗風(fēng)濕作用有關(guān)。有研究證實(shí)，麻黃中生物堿類(lèi)成分具有發(fā)汗和解熱作用，與桂枝配伍可增強(qiáng)其發(fā)汗解肌的功效[18-19]。故選擇丁公藤、麻黃和桂枝中的藥效成分作為質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分具有可行性（由于柚皮苷、異綠原酸B的分離度較差，均小于1.5，故未選擇其作為定量分析的指標(biāo)性成分）。

3.4 指紋圖譜分析

馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的HPLC指紋圖譜中共有18個(gè)共有峰，本研究指認(rèn)了其中12個(gè)成分，分別為鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新綠原酸、東莨菪苷、綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、異綠原酸B、柚皮苷、異綠原酸A、異綠原酸C及桂皮醛。10批馮了性風(fēng)濕跌打藥酒樣品相似度較好，均大于0.980，提示馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的原料質(zhì)量和制備工藝較穩(wěn)定，不同批次樣品中指標(biāo)性成分的一致性較好。

3.5 含量測(cè)定結(jié)果分析

本研究結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿等10種有效成分為不同批次馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的共有成分，但各批樣品間含量存在較大差異，特別是綠原酸和異綠原酸C的含量相差約0.01 mg/mL。因此，建議將這10種有效成分含量納入樣品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可提高其整體質(zhì)量。

綜上所述，本研究所建指紋圖譜穩(wěn)定、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可用于馮了性風(fēng)濕跌打藥酒的質(zhì)量控制;所建含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確可靠，可用于同時(shí)測(cè)定該藥中10種有效成分的含量。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：808-809.

[ 2 ] 譚珍，曹穎珍，王永健.馮了性風(fēng)濕跌打藥酒真?zhèn)纹芳皳郊倨返蔫b別[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2006，13（9）：56- 57.

[ 3 ] 姚血明，馬武開(kāi)，唐芳，等.中醫(yī)外治法在痹證中的應(yīng)用[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2014，3（5）：73-75.

[ 4 ] 查道成，馮冬蘭，李林曉，等. HPLC測(cè)定馮了性風(fēng)濕跌打藥酒中鹽酸麻黃堿的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（9）：129-131.

[ 5 ] 楊媛媛，陳志永，廖立平，等.馮了性風(fēng)濕跌打藥酒中東莨菪素、東莨菪苷和綠原酸的測(cè)定[J]. 中成藥，2014，36（3）：551-553.

[ 6 ] 李海燕，謝仕偉，岑志芳. HPLC法測(cè)定馮了性風(fēng)濕跌打藥酒中東茛菪內(nèi)酯的含量[J].佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，27（3）：75-77.

[ 7 ] 關(guān)紅暉，霍嘉茵，林淑明，等.馮了性風(fēng)濕跌打藥酒HPLC指紋圖譜研究[J].廣東藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，33（1）：65- 67.

[ 8 ] XIE RF，ZHAO QH，LI ZC，et al. Comparison on HPLC fingerprints between fraxini cortex and its eye drop[J]. Chin Herb Med，2013，5（4）：301-306.

[ 9 ] 刁嘉茵，徐燦，王淑美，等.中藥指紋圖譜與藥效相關(guān)性研究進(jìn)展[J].藥學(xué)研究，2018，37（3）：165-168.

[10] 陳振華，劉蘇珍，唐芳，等.淺談中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀與幾種質(zhì)量評(píng)價(jià)方法[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2016，27（3）：694-696.

[11] 徐妍，楊華蕊，楊永壽，等.中藥指紋圖譜研究現(xiàn)狀及展望[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，18（76）：91-94.

[12] GAO SM，LIU JS，WANG M，et al. Quantitative and HPLC fingerprint analysis combined with chemometrics for quality evaluation of Codonopsis radix processed with different methods[J]. Chin Herb Med，2019，11（2）：160- 168.

[13] 張婷，鄭奪，王文彤，等.指紋圖譜結(jié)合一測(cè)多評(píng)模式在參芎養(yǎng)心顆粒質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用研究[J].中草藥，2015，46（13）：1920-1925.

[14] 吳雯，吳銳楓，康江麗.參苓健體粉指紋圖譜和含量測(cè)定方法的研究[J].中國(guó)藥師，2019，22（5）：852-856.

[15] CHEN ZY，LIAO LP，YANG YY，et al. Different fingerprinting strategies to differentiate Porana sinensis and plants of erycibe by high-performance liquid chromatography with diode array detection，ultra high performance liquid chromatography with tandem quadrupole mass spectrometry，and chem[J]. J Sep Sci，2015，38（2）：231-238.

[16] 那襲雪，張文濤，談遠(yuǎn)鋒，等.綠原酸及其異構(gòu)體藥理作用及不良反應(yīng)研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，20（3）：140-144.

[17] CHEN ZY，TAO HX，LIAO LP，et al. Quick identification of xanthine oxidase inhibitor and antioxidant from Erycibe obtusifolia by a drug discovery platform composed of multiple mass spectrometric platforms and thin-layer chromatography bioautography[J]. J Sep Sci，2014，37（16）：2253-2259.

[18] 王艷宏，王秋紅，夏永剛，等.麻黃化學(xué)拆分組分的性味藥理學(xué)評(píng)價(jià)：化學(xué)拆分組分的制備及其解熱作用的研究[J].中醫(yī)藥信息，2011，28（5）：7-10.

[19] 王艷宏，王秋紅，夏永剛，等.麻黃化學(xué)拆分組分的性味藥理學(xué)評(píng)價(jià)：麻黃化學(xué)拆分組分“辛溫”發(fā)汗、利水作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2011，18（6）：489-491.

（收稿日期：2019-09-24 修回日期：2020-03-16）

（編輯：陳 宏）