藏藥四味姜黃湯中10種有效成分含量測定及其煎煮工藝優(yōu)化

王小艷 向宇楠 高潔 潘琳 畢若紅 賴先榮 李啟恩 李先加

摘 要 目的：建立同時測定藏藥四味姜黃湯中10種有效成分的含量，并對其煎煮工藝進(jìn)行優(yōu)化。方法：采用高效液相色譜法測定含量。以浸泡時間、加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為考察因素，10種成分的含量及出膏率的綜合得分為響應(yīng)值，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化其煎煮工藝。結(jié)果：沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素進(jìn)樣量的線性范圍分別為0.280 6～1.683 6、0.289 6～1.737 6 、0.320 8～1.924 8、0.116 0～0.696 0、0.018 9～0.113 5、0.013 3～0.079 9、0.092 3～0.553 8、0.025 5～0.153 0、0.036 1～0.216 3、0.041 0～0.245 7 ?g（r均為0.999 9）;定量限分別為0.28、14.48、3.21、11.60、1.89、4.44、0.46、0.26、0.36、0.41 ng，檢測限分別為0.11、4.14、1.24、3.32、0.58、1.33、0.13、0.09、0.14、0.12 ng;精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD均小于3%;加樣回收率為92.56%～103.69%（RSD為0.90%～3.81%，n=6）。該方的最優(yōu)煎煮工藝為浸泡60 min，加入8倍量（mL/g）水，煎煮2次，每次65 min。6次驗證試驗中，綜合得分為3.323 2～3.422 4分，與預(yù)測值（3.437 4）相對誤差的絕對值均小于2%。結(jié)論：所建含量測定方法操作簡單，重復(fù)性較好，可用于同時測定四味姜黃湯中10種有效成分的含量;優(yōu)化所得煎煮工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)鍵詞 藏藥;四味姜黃湯;煎煮工藝優(yōu)化;高效液相色譜法;Box-Behnken響應(yīng)面法;含量測定

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the method for simultaneous determination of 10 kinds of active components in Tibetan medicine Siwei jianghuang prescription， and to optimize its decoction technology. METHODS： HPLC method was adopted. Using soaking time， the amount of added water， decoction time and decoction times as factors， comprehensive score of the contents of 10 kinds of components and solid extracts rate as response values， one the basis of single factor test， Box-Behnken response surface method was used to optimize its decoction technology. RESULTS： The linear range of gallic acid， corilagin， magnoflorine， ellagic acid， hydrochloric jatrorrhizine， hydrochloride palmatine， hydrochloride berberine， bisdemethoxycurcumin， demethoxycurcumin and curcumin were 0.280 6-1.683 6， 0.289 6-1.737 6， 0.320 8-1.924 8， 0.116 0-0.696 0， 0.018 9-0.113 5， 0.013 3-0.079 9， 0.092 3-0.553 8， 0.025 5-0.153 0， 0.036 1-0.216 3， 0.041 0-0.245 7 ?g （all r were 0.999 9）， respectively. The limits of quantitation were 0.28， 14.48， 3.21， 11.60， 1.89， 4.44， 0.46， 0.26， 0.36， 0.41 ng， respectively. The limits of detection were 0.11， 4.14， 1.24， 3.32， 0.58， 1.33， 0.13， 0.09， 0.14， 0.12 ng， respectively. RSDs of precision， stability and reproducibility tests were all lower than 3%. The recoveries were 92.56%-103.69% （RSDs were 0.90%-3.81%， n=6）. The optimal decoction technology included soaking 60 min， adding 8-fold （mL/g） water， decoction for twice， lasting for 65 min each time. In 6 validation tests， comprehensive scores were 3.323 2-3.422 4， and the absolute value of the relative error with the predicted value （3.437 4） was less than 2%.CONCLUSIONS： Established method is simple and repeatable， and can be used for simultaneous determination of 10 kinds of active components in Siwei jianghuang prescription. Optimized decoction technology is stable and feasible.

KEYWORDS? ?Tibetan medicine; Siwei jianghuang prescription; Decoction technology optimization; HPLC; Box-Behnken response surface method; Content determination

標(biāo)準(zhǔn)湯劑即以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)、臨床應(yīng)用為基礎(chǔ)，參考現(xiàn)代提取方法，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化工藝制備而成的中藥水煎劑，可用于表征中藥湯劑的一般狀態(tài)[1]。藏藥四味姜黃湯為藏醫(yī)經(jīng)典，《藍(lán)琉璃》[2]中記載其由姜黃、小檗皮、余甘子、蒺藜等濃煎，內(nèi)服，可用于治療尿頻癥，是藏醫(yī)藥治療“京尼薩庫病”即糖尿病及其并發(fā)癥的傳統(tǒng)方劑[3]。藏藥四味姜黃湯含有生物堿類、多酚類、姜黃素類、蒺藜皂苷類等有效成分[4-5]，具有抗氧化、改善血糖等作用[6-10]。由于藏醫(yī)經(jīng)典文獻(xiàn)中并未記載其具體的制備方法，為此本研究前期按照《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑簡化注冊審批管理規(guī)定》[11]中經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)及經(jīng)典名方制劑的要求，同時參考《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》[12]制備了藏藥四味姜黃湯，并以方中生物堿類成分木蘭花堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿，多酚類成分沒食子酸、柯里拉京、鞣花酸，姜黃素類成分雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素等為指標(biāo)，建立了測定上述成分含量的高效液相色譜法（HPLC）;通過Box-Behnken響應(yīng)面法對其煎煮工藝進(jìn)行優(yōu)化，以得到符合臨床用藥要求的液體制劑，并為藏藥四味姜黃湯的新藥研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀，包括G1311B型四元泵、內(nèi)置真空脫氣機(jī)、G1329B型標(biāo)準(zhǔn)自動進(jìn)樣器、G1315D型二極管陣列檢測器、G1316A型柱溫箱、Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）;UPH-I-10T型優(yōu)普純水制造系統(tǒng)（成都超純科技有限公司）;DZKW-4型電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）;CPA225D型十萬分之一、BSA124S型萬分之一電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司];RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

沒食子酸對照品（批號：DST180226-008，純度：≥99%）、柯里拉京對照品（批號：DST170313-012，純度：≥98%）、鞣花酸對照品（批號：DST170105-004，純度：≥98%）、雙去甲氧基姜黃素對照品（批號：DST171220-21，純度：≥98%）、去甲氧基姜黃素對照品（批號：DST171220-30，純度：≥98%）均購自成都德思特生物技術(shù)有限公司;姜黃素對照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-16050404，純度：≥99.59%）;鹽酸小檗堿對照品（批號：Y-035-171216，純度：>98%）、鹽酸巴馬汀對照品（批號：Y-156170227，純度：>98%）、木蘭花堿對照品（批號：M-026170913，純度：>98%）、鹽酸藥根堿對照品（批號：Y-023-171216，純度：>98%）均購自成都瑞芬思生物科技有限公司;乙腈、磷酸為色譜純，其余試劑均為分析純，水為飲用水（煎煮用）或純化水（色譜分析用）。

姜黃飲片（批號：180601231）、蒺藜飲片（批號：190100791）均購自成都康美藥業(yè)有限公司;余甘子飲片（批號：20180704）購自成都荷花池藥材市場;小檗皮飲片（批號：20190609001）購自青海省西寧市藥材市場，均經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院賴先榮教授鑒定，分別為姜科植物姜黃（Curcuma longa L.）的干燥根莖、蒺藜科植物蒺藜（Tribulus terrestris L.）的干燥成熟果實、大戟科植物余甘子（Phyllanthus emblica L.）的干燥果實、小檗科植物刺紅珠（Berberis dicryophylla Franch.）的干燥內(nèi)皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 四味姜黃湯中10種成分的含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Capcell Pak C18-MGⅡ（250 mm×4.6 mm，5 ?m）;流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～8 min，3%A;8～15 min，3%A→17%A;15～20 min，17%A;20～33 min，17%A→19%A;33～38 min，19%A→25%A;38～48 min，25%A;48～70 min，25%A→80%A）;流速：1.0 mL/min;進(jìn)樣量：10 ?L;柱溫：30 ℃;檢測波長：270 nm（0～60 min，沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿）、420 nm（60～70 min，雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素）[13]。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素對照品各適量，加甲醇溶解制成含上述各對照品質(zhì)量濃度分別為1.403、1.448 1、1.604、0.58、0.757、0.666、0.923、0.510、0.721、0.819 mg/mL的單一對照品溶液;取上述各單一對照品溶液適量，加甲醇釋釋，制成上述各對照品質(zhì)量濃度分別為140.3、144.8、160.4、58、9.462 5、6.66、46.15、12.75、18.025、20.475 ?g/mL的混合對照品溶液，于4 ℃冷藏，備用。

2.1.3 供試品溶液的制備 按處方比例稱取姜黃、小檗皮、余甘子、蒺藜飲片共60 g，加入8倍量（mL/g）水，浸泡60 min后，煎煮2次，每次65 min，趁熱過濾，合并濾液。室溫下取濾液1 mL，98～100 ℃水浴揮干，加甲醇溶解并定容至5 mL量瓶中，搖勻，經(jīng)0.45 ?m濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 陰性對照溶液 按藏藥四味姜黃湯的處方比例分別稱取各單味藥材飲片，按“2.1.3”項下方法分別制備缺姜黃、小檗皮、余甘子、蒺藜的陰性對照溶液。

2.1.5 空白對照溶液 以甲醇為空白對照溶液。

2.1.6 系統(tǒng)適用性試驗 取上述混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各適量，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可知，各待測成分基線分離，分離度均大于1.5，其他雜質(zhì)成分對待測成分無干擾，陰性對照對測定亦無干擾，理論板數(shù)以沒食子酸峰計不低于5 000。

2.1.7 線性關(guān)系考察 取“2.1.2”項下混合對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、12 ?L，記錄峰面積。以各待測成分進(jìn)樣量（x，?g）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

2.1.8 定量限與檢測限考察 取“2.1.2”項下混合對照品溶液，以甲醇倍比稀釋，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分別計算定量限、檢測限。結(jié)果，沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的定量限分別為0.28、14.48、3.21、11.60、1.89、4.44、0.46、0.26、0.36、0.41 ng，檢測限分別為0.11、4.14、1.24、3.32、0.58、1.33、0.13、0.09、0.14、0.12 ng。

2.1.9 精密度試驗 取“2.1.2”項下混合對照品溶液適量，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素峰面積的RSD分別為1.14%、0.97%、2.10%、1.27%、2.30%、2.97%、2.25%、1.40%、0.95%、0.94%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.1.10 穩(wěn)定性試驗 取“2.1.3”項下供試品溶液適量，于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h時，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素峰面積的RSD分別為1.11%、1.07%、0.38%、1.70%、0.29%、1.44%、0.75%、3.24%、1.27%、0.54%（n=8），表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.1.11 重復(fù)性試驗 按處方比例精密稱取各藥材飲片每份約60 g，共6份，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品含量。結(jié)果，沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素含量的RSD分別為1.69%、1.87%、1.22%、2.25%、0.92%、1.97%、1.47%、2.97%、1.46%、1.25%（n=6），表明方法重復(fù)性較好。

2.1.12 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的各藥材飲片適量，共6份，加入一定量（加入量按含量的100%計算）的“2.1.2”項下各單一對照品溶液，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率。結(jié)果，沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的加樣回收率分別為96.24%～101.66%（RSD=2.33%，n=6）、92.56%～102.96%（RSD=3.81%，n=6）、98.43%～102.81%（RSD=1.58%，n=6）、96.61%～101.34%（RSD=2.71%，n=6）、98.14%～99.94%（RSD=0.90%，n=6）、97.53%～103.44%（RSD=2.18%，n=6）、97.64%～103.53%（RSD=2.48%，n=6）、99.41%～103.13%（RSD=1.27%，n=6）、100.15%～103.69%（RSD=1.45%，n=6）、99.57%～102.84%（RSD=1.44%，n=6），表明方法準(zhǔn)確度較好。

2.1.13 樣品含量測定 按處方比例稱取各藥材飲片共60 g，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，共3批，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，平行操作3次，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品含量，結(jié)果見表2。

2.2 出膏率測定

精密吸取 “2.1.3”項下供試品溶液10 mL，置于干燥至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中蒸干，浸膏于105 ℃干燥3 h后移至干燥器中冷卻30 min，迅速稱定質(zhì)量，計算出膏率。出膏率（%）=浸膏量（g）/原藥材質(zhì)量（g）×100%。

2.3 單因素試驗

2.3.1 綜合評分 由于綜合評分法要求對選定的指標(biāo)進(jìn)行加權(quán)，經(jīng)驗性加權(quán)法主要根據(jù)選定指標(biāo)的重要程度來確定權(quán)重系數(shù)，具有主觀性和片面性[14-15]，因此本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)[16-17]，同時結(jié)合含量測定結(jié)果，采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析和降維-因子分析。結(jié)果顯示，沒食子酸、柯里拉京、木蘭花堿、鞣花酸、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素含量及出膏率等11個指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)分別為0.111 28、0.111 17、0.111 53、0.110 91、0.109 59、0.109 55、0.111 42、0.110 99、0.111 03、0.112 33、 -0.109 80，綜合得分（Y）=X1×0.111 28+X2×0.111 17+X3×0.111 53+X4×0.110 91+X5×0.109 59+X6×0.109 55+X7×0.111 42+X8×0.110 99+X9×0.111 03+X10×0.112 33-X11×0.109 80（X表示對應(yīng)的指標(biāo)）。

2.3.2 單因素考察 ①浸泡時間：按處方比例稱取各藥材飲片共60 g，考察不同浸泡時間（30、60、90、120 min）對綜合得分的影響;結(jié)果，浸泡90 min時綜合得分最高，為3.294 0分，詳見圖2A。②加水量：按處方比例稱取各藥材飲片共60 g，考察不同加水量（6、8、10、12、14、16倍）對綜合得分的影響，平行測定3次;結(jié)果，雖然加入14倍量水時的綜合得分最高，為3.604 4分，但與10倍（3.579 6分）時相當(dāng)，詳見圖2B。③煎煮次數(shù)：按處方比例稱取各藥材飲片共60 g，考察不同煎煮次數(shù)（1、2、3、4次）對綜合得分的影響，平行測定3次;結(jié)果，雖然煎煮4次時綜合得分最高，為3.569 9分，但與煎煮2次（3.507 3分）相當(dāng)，詳見圖2C。④煎煮時間：按處方比例稱取各藥材飲片共60 g，考察不同煎煮時間（30、60、90、120、150 min）對綜合得分的影響，平行測定3次;結(jié)果，煎煮90 min時綜合得分最高，為3.432 1分，詳見圖2D?？紤]到操作的簡便及成本的控制，故后續(xù)選擇浸泡時間30、60、90 min，加水量6、8、10倍，煎煮次數(shù)1、2、3次，煎煮時間30、60、90 min進(jìn)行后續(xù)試驗。

2.4 Box-Behnken 響應(yīng)面法優(yōu)化煎煮工藝

2.4.1 Box-Behnken響應(yīng)面法試驗設(shè)計與結(jié)果 在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以浸泡時間（A，min）、加水量（B，mL/g）、煎煮時間（C，min）、煎煮次數(shù)（D，次）為考察因素，采用Design-Expert 8.0.6軟件，按Box-Behnken響應(yīng)面法設(shè)計原理[18-19]，以11個指標(biāo)的綜合得分為響應(yīng)值，進(jìn)行4因素3水平試驗設(shè)計。因素與水平見表3，試驗設(shè)計方案與結(jié)果見表4（成分1～10分別為按前文順序排列的10個待測成分，單位為mg/g，下同）。

2.4.2 模型分析與預(yù)測 采用Design-Expert 8.0.6軟件對表4的試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項式回歸擬合，得綜合得分（Y）=3.370-1.435×10-3A+0.047 B+0.051C+0.300D+ 0.012AB+0.014AC+0.051AD-0.020BC-0.085BD-8.684×10-4CD-0.110A2-0.180B2-0.160C2-0.400D2。方差分析結(jié)果見表5。

由表5可見，回歸方程中，一次項D、二次項B2、C2、D2顯著（P<0.05），交互項AB、AC、AD、BC、BD、CD均不顯著（P >0.05）;模型的P<0.05，提示該模型可用于11種指標(biāo)綜合得分的分析和預(yù)測，且各影響因素對綜合得分的順序依次為D（煎煮次數(shù)）> C（煎煮時間）>B（加水倍數(shù)）>A（浸泡時間）。

2.4.3 各因素交互作用分析 采用Design-Expert 8.0.6軟件繪制各影響因素的響應(yīng)面圖，詳見圖3。由圖3可知，因素BD、因素AD交互作用較強(qiáng)，因素AB、因素CD交互作用較弱，其交互強(qiáng)弱順序依次為BD>AD>BC>AC>AB>CD。

2.4.4 最優(yōu)煎煮工藝的確定 采用Design-Expert 8.0.6軟件預(yù)測的最優(yōu)煎煮工藝為浸泡時間62.86 min、加水量8.06倍、煎煮時間64.86 min、煎煮次數(shù)2.38次?？紤]到實際操作，確定最優(yōu)煎煮工藝為浸泡時間60 min、加水8倍、煎煮時間65 min、煎煮次數(shù)2次。

2.4.5 驗證試驗 按處方比例稱取各藥材飲片共60 g，按“2.4.4”項下最優(yōu)煎煮工藝條件進(jìn)行試驗驗證，平行操作3次（結(jié)果見表6序號1～3）;同時，根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》[12]與《中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑》（第1卷）[20]對藥液規(guī)格和濃縮體積（0.2 g/mL）的規(guī)定，按最優(yōu)煎煮工藝進(jìn)行驗證（結(jié)果見表6序號4～6）。結(jié)果顯示，與模型預(yù)測值（預(yù)測綜合得分3.437 4分）比較，相對誤差的絕對值均小于2%，提示優(yōu)化后的煎煮工藝穩(wěn)定、可行。

3 討論

本研究采用HPLC法測定了四味姜黃湯中10種成分的含量，結(jié)果顯示，方中沒食子酸、木蘭花堿、鹽酸小檗堿含量較高，姜黃素類成分含量偏低，其原因可能與各成分在水溶液中的溶解度有關(guān)。在供試品溶液的制備中，筆者分別比較了酚酸類、生物堿類以及姜黃素類成分在25%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇等中的溶解度，結(jié)果顯示各成分相互影響溶出，酚酸類成分在50%甲醇中溶解較好，姜黃素類成分和生物堿成分在甲醇中溶解較好，考慮實際操作，選擇甲醇為溶劑。由于試驗條件欠缺，本研究未對蒺藜藥材中的有效成分進(jìn)行分析，后續(xù)本課題組將進(jìn)一步探索。

中藥標(biāo)準(zhǔn)湯劑是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，按照臨床湯劑煎煮流程的規(guī)范化操作而煎得[21]。臨床用湯劑的標(biāo)準(zhǔn)化煎藥方法十分重要，應(yīng)避免銅、鐵、鋁等易與中藥成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的器具[21]?？紤]到操作方便，可使用玻璃器皿或不銹鋼容器，本研究采用圓底燒瓶進(jìn)行回流煎煮;而煎煮用溶劑可選擇符合標(biāo)準(zhǔn)的飲用水，其成本低廉且方便易得。有研究對中藥經(jīng)典名方的加水量進(jìn)行了探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)根據(jù)藥材的質(zhì)地、疏松程度，加水量不同，一般以沒過藥面2～5 cm為宜[22-23]。另有研究發(fā)現(xiàn)，煎煮2次，每次20～30 min后中藥中的有效成分可大部分溶出[24-25]。而本方中的藥材多為質(zhì)地堅硬的滋補類中藥，煎煮時間可比一般藥材適當(dāng)延長。因此，綜合考慮選擇浸泡時間、加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為指標(biāo)進(jìn)行單因素考察。

四味姜黃湯原方為四味姜黃湯散，亦同于煮散，是將中藥飲片粉碎后與水共煎，去渣取汁得到的中藥液體制劑，兼有湯劑和散劑的共同特點[26]。本研究以四味姜黃湯標(biāo)準(zhǔn)湯劑的工藝研究為基礎(chǔ)，采用Box-Behnken響應(yīng)面法對其煎煮工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到最優(yōu)煎煮工藝為浸泡60 min，加入8倍量水，煎煮2次，每次65 min。經(jīng)驗證，工藝優(yōu)化后的綜合評分與模型預(yù)測值的相對誤差的絕對值均小于2%，表明該工藝穩(wěn)定、可行。

綜上所述，所建含量測定方法操作簡單、重復(fù)性較好，可用于同時測定四味姜黃湯中10種有效成分的含量;優(yōu)化所得煎煮工藝穩(wěn)定、可行。

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（收稿日期：2019-10-16 修回日期：2020-03-07）

（編輯：陳 宏）