HPLC法同時測定絲棉木中2種成分含量

龐 策 趙鵬慧 張冠騰 左亞奇 丁 孟 郭晶晶 甄 攀

1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系，張家口，075000，中國

2.河北北方學(xué)院應(yīng)用化學(xué)研究所，張家口，075000，中國

絲棉木（Euonymus maackii）又名白杜、華北衛(wèi)矛，為衛(wèi)矛科衛(wèi)矛屬植物，主要分布在吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、山西、陜西等地。性辛、溫，可用于祛風(fēng)濕、消炎解毒、活血止痛［1］。衛(wèi)矛屬中化學(xué)成分及藥理活性研究已有報道，但絲棉木相關(guān)報道較少。方振峰等［2-3］對衛(wèi)矛屬植物的化學(xué)成分和藥理作用進行總結(jié)；丁業(yè)等［4］從絲棉木的果實中提取出多糖并探討其體外抗小鼠骨髓瘤細胞活性；周軍良等［5-6］對絲棉木的三萜成分進行研究；張啟東等［7］對冬青衛(wèi)矛的化學(xué)成分進行研究；黃麗剛等［8-9］對隱脈假衛(wèi)矛枝葉的三萜和黃酮類成分進行研究；趙荀等［10］對衛(wèi)矛干燥嫩葉的化學(xué)成分進行研究。課題組前期研究中，從絲棉木種子中分離出2種化合物，分別為衛(wèi)矛羰堿（compound 1）和6α，12-二乙酸基-1β，9α-二乙酸（β-呋喃甲酸酯基）-4α-羰基-2β-2-甲基丁酯-β-二氫沉香呋喃（compound 2）。建立可以同時測定絲棉木中2種化學(xué)成分含量的高效液相色譜法（HPLC）法，并測定絲棉木葉、種子和莖中compound 1和compound 2含量。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

絲綿木葉、種子和莖（采集于張家口市長城西大街景觀樹種，由河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)院魏會平教授鑒定為Euonymus mmackii）、對照品（compound 1和compound 2的純品，由課題組從絲棉木種子中分離制備，純度大于98%）。高效液相色譜儀，美國Waters e2695；電子恒溫水浴鍋，北京中興偉業(yè)儀器有限公司DZKW-4；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠RE52CS；甲醇、石油醚（分析純，均購自天津津東天正有限公司）；娃哈哈純凈水。

1.2 制備溶液

1.2.1 供試品溶液的制備

5株絲棉木隨機編號。分別取5株絲棉木的葉、種子和莖，干燥、粉碎，各稱取約10 g，精密稱定，置于圓底燒瓶，加入藥材10倍量（100 mL）的石油醚，回流提取2次，每次1 h，收集上清液，過濾，揮干石油醚，甲醇溶解，定至5.00 mL，搖勻，即得供試品溶液。

1.2.2 對照品溶液的制備

稱取compound 1和compound 2對照品適量，精密稱定，甲醇溶解，得到compound 1濃度為5.44 mg·mL-1、compound 2濃度為3.20 mg·mL-1的對照品溶液。

1.2.3 色譜條件

高效液相色譜（美國Waters e2695）條件：色譜柱：Syncronis C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（72∶28），流速：1 mL·min-1；紫外檢測器，檢測波長為254 nm；柱溫：25℃；進樣量：15 μL。絲棉木色譜圖和對照品色譜圖見Fig.1。

Fig.1 Sample drawing of Euonymus maackii （A） and Reference drawing of Euonymus maackii（B）

2 結(jié)果

2.1 線性范圍考察

取對照品儲備液，甲醇稀釋，配制compound 1濃度為0.17、0.34、0.68、1.36、2.72 mg·mL-1，compound 2濃度為0.10、0.20、0.40、0.80、1.60 mg·mL-1的系列對照品溶液。將compound 1和compound 2由小到大依次混合，配制系列混合對照品溶液。在“1.2.3”色譜條件下，依次進樣，以對照品質(zhì)量濃度（mg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸曲線方程（Tab.1）。

2.2 檢測限考察

取空白溶液適量，按照“1.2.3”色譜條件依次進樣7次，測定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD），根據(jù)LOD（檢測限）=3.3δ/S （δ為甲醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)偏差，S為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率），計算檢測限。compound 1、compound 2的檢測限分別為1.03、1.38 μg·mL-1。

2.3 精密度考察

精密吸取混合對照品溶液15 μL，按照“1.2.3”色譜條件，依次進樣6次，計算2種化合物峰面積的RSD，分別為0.52%、1.40%，表明儀器精密度良好。

2.4 加樣回收率考察

精密吸取第1株絲棉木種子提取液0.50 mL，共9份，每份中compound 1和compound 2含量分別為3.06和1.14 mg。按低、中、高（分別為原供試品溶液濃度的80%、100%、120%）順序依次加入compound 1和compound 2對照品。按照“1.2.3”色譜條件進行測定，結(jié)果表明測定方法可靠（Tab.2）。

2.5 絲棉木樣品中2種化合物含量測定

隨機采集5株絲棉木的葉、種子和莖，干燥，粉碎，按“1.2.1”制備供試品溶液。按照“1.2.3”色譜條件進行測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計算compound 1、compound 2的含量，結(jié)果見Tab.3。

Tab.1 Linear range of two compounds in Euonymus maackii

Tab.2 Investigation results of recovery of two compounds in Euonymus maackii

Tab.3 Contents of two compounds in Euonymus maackii（mg·g-1）

3 討論

本文建立了同時測定絲棉木中2種化合物含量的HPLC法，該方法具有較好的精密度、穩(wěn)定性及較高的準(zhǔn)確度，方便快捷，易于操作，為絲棉木質(zhì)量控制提供了可靠的檢測方法。

從測定結(jié)果來看，隨機采集的5株絲棉木的種子中均含有compound 1和compound 2，葉中只檢出compound 1，且含量較低，莖中compound 1和compound 2均未檢出。同一株絲棉木的葉、種子、莖中2種化合物含量不同，種子含量最高；不同株絲棉木的相同部位2種化合物的含量差異顯著，5株絲棉木種子中compound 1含量范圍1.64～3.06 mg·g-1，compound 2含量范圍0.53～1.41 mg·g-1。5株絲棉木生長環(huán)境相同，個體差異卻較大。