高效液相色譜法測定洗手液中水楊酸和對氯間二甲苯酚

杜文龍，傅力行，何健，葉益峰

（納愛斯集團(tuán)有限公司，浙江麗水 323000）

水楊酸為植物柳樹皮提取物，是一種天然的消炎藥，具有殺菌功效；對氯間二甲苯酚是一種低毒性抗菌劑，對多數(shù)革蘭氏陽性、陰性菌、真菌、霉菌都有殺滅功效，兩種成分均可用于生產(chǎn)洗手液中［1］。對于洗手液中水楊酸和對氯間二甲苯酚含量的測定，目前使用的測定標(biāo)準(zhǔn)是消毒衛(wèi)生規(guī)范中甲酸、水楊酸和山梨酸含量的測定［2］以及GB 27947-2011 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對氯間二甲苯酚含量的測定［3］， 兩種方法中的液相色譜測定條件不同，要先用一種液相測定條件測定水楊酸含量，再用另一種液相測定條件測定對氯間二甲苯酚含量，操作繁瑣，因此研究用一種液相條件同時測定水楊酸和對氯間二甲苯酚兩種成分的含量很有必要。

目前對水楊酸和對氯間二甲苯酚含量的測定主要有高效液相法［2-14］、紫外分光光度法［15］，但是還沒有哪一種方法是針對洗手液中同時測定水楊酸和對氯間二甲苯酚含量的，而紫外分光光度法比高效液相法準(zhǔn)確度低。筆者采用高效液相色譜儀同時測定洗手液中水楊酸和對氯間二甲苯酚，該方法能很好地分離水楊酸和對氯間二甲苯酚，而且峰型良好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，不需要單獨使用兩種方法分別測定水楊酸和對氯間二甲苯酚含量［2-3］，節(jié)約了時間，減少了試劑儀器損耗，不需要進(jìn)行繁瑣的梯度洗脫［4］。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-20AT 型，配備手動進(jìn)樣閥(20 μL 定量環(huán))和SPD-M20A 型二極管陣列檢測器，日本島津公司。

電子天平：LE204E 型，分度值為0.000 1 g，瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)。

水楊酸：純度為99.0%，西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司。

對氯間二甲苯酚：純度為99.0%，西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司。

甲醇、磷酸：色譜純。

實驗用水：超純水。

1.2 儀器工作條件

色譜柱：Shim-pack Scepter C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，日本島津公司)；檢測器：SPD-M20A型二極管陣列檢測器；檢測波長：280 nm；流量：1.0 mL／min；柱溫：室溫；流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(體積比為70∶30)；進(jìn)樣體積：20 μL。

1.3 對照品溶液配制

水楊酸與對氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品0.2 g 與對氯間二甲苯酚標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g 至100 mL 容量瓶中，用流動相溶解定容至標(biāo)線，混勻。得到水楊酸與對氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，濃度分別為2 000、1 000 μg／mL。

水楊酸與對氯間二甲苯酚系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶 液：分 別 移 取2.00、5.00、10.00、15.00、20.00 mL上述溶液至5 只100 mL 容量瓶中，得到水楊酸質(zhì)量濃度分別為40、100、200、300、400 μg／mL 與對氯間二甲苯酚質(zhì)量濃度分別為20、50、100、150、200 μg／mL 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品處理

稱取洗手液樣品2.5 g，用流動相甲醇-0.1%磷酸水溶液(體積比為70∶30)溶解，并定容至50 mL 容量瓶中，混勻，超聲溶解去除氣泡后定容。溶液經(jīng)0.45 μm 有機(jī)濾膜過濾，所得濾液按色譜條件1.2 進(jìn)行測定，記錄色譜峰的保留時間和峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出相應(yīng)的被測物濃度。水楊酸和對氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。

圖1 水楊酸和對氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的確定

從參考文獻(xiàn)［2-14］來看，使用C18柱可以分離水楊酸和對氯間二甲苯酚，因此選擇C18色譜柱作為分離柱。

消毒衛(wèi)生規(guī)范中甲酸、水楊酸和山梨酸含量的測定液相條件是強酸性條件，對氯間二甲苯酚不出峰、峰型不好或峰值較低；GB 27947 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對氯間二甲苯酚含量測定的液相色譜條件為中性條件，得到的水楊酸峰型化為雙峰，峰型不好。使用多種流動相進(jìn)行試驗，發(fā)現(xiàn)要想水楊酸峰型好，必須是在酸性的流動相條件抓，所以對酸性的流動相條件嘗試，最終發(fā)現(xiàn)流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(70∶30)時，水楊酸和對氯間二甲苯酚均得到很好的分離效果，峰型較好，色譜圖見圖1。

為方便在測定試驗過程中對多個檢測波長對比，選出合適的檢測波長，故使用SPD-M20A 型二極管陣列檢測器。上述兩種標(biāo)準(zhǔn)方法中，檢測的波長不相同［2-3］，水楊酸的檢測波長為280 nm，對氯間二甲苯酚的檢測波長為220 nm。當(dāng)檢測波長為220 nm 時，樣品中有干擾峰，且峰面積比較大；當(dāng)檢測波長為280 nm 時，無干擾峰，故選擇檢測波長為280 nm。從諸多參考文獻(xiàn)來看，流動相流量均為1.0 mL／min，柱溫一般為室溫，所以本實驗也選擇此條件，經(jīng)試驗，水楊酸和對氯間二甲苯酚可以得到有效的分離。

2.2 樣品前處理方法的確定

因為樣品偏中性，所以要想得到良好的水楊酸色譜峰型，必須要對樣品進(jìn)行酸化處理。實驗使用的流動相為酸性溶劑，且洗手液中可能含有難溶解于流動相的物質(zhì)，如硫等，為避免在流動相運行中難溶解的物質(zhì)析出，故選擇樣品前處理方法為使用流動相溶解并定容樣品。

2.3 線性關(guān)系與檢出限

按1.2 色譜條件測定1.3 中配制的水楊酸與對氯間二甲苯酚系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以其對應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計算得水楊酸線性方程為y=14 395x-12 168，對氯間二甲苯酚線性方程為y=13 522x-7 538，相關(guān)系數(shù)均為0.999 9，水楊酸的線性范圍為40～400 μg／mL，對氯間二甲苯酚的線性范圍為20～200 μg／mL。

按儀器的3 倍信噪比(S／N=3)計算檢出限，水楊酸與對氯間二甲苯酚的檢出限均為0.1 μg／mL。

2.4 方法對比

選取3 組洗手液樣品，分別按照消毒衛(wèi)生規(guī)范中水楊酸含量的測定方法［2］與GB 27947-2011 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對氯間二甲苯酚含量的測定方法［3］測定水楊酸和對氯間二甲苯酚含量，與本實驗方法進(jìn)行比對，結(jié)果見表1。

表1 對比試驗結(jié)果

從表1 可以看出，3 種方法測得的數(shù)據(jù)基本一致，說明本方法準(zhǔn)確可靠，可以替代標(biāo)準(zhǔn)消毒衛(wèi)生規(guī)范中甲酸、水楊酸和山梨酸含量的測定以及GB 27947-2011 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對氯間二甲苯酚含量的測定方法。

2.5 精密度試驗

按本實驗方法測定同一個洗手液樣品中水楊酸和對氯間二甲苯酚含量，平行測定5 次，結(jié)果見表2。洗手液樣品色譜圖見圖2。

表2 精密度試驗結(jié)果

從表2 可以看出，水楊酸和對氯間二甲苯酚測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.79%，1.39%，說明本方法測得的數(shù)據(jù)精密度良好。計算得測定結(jié)果的平均值分別為0.400%與0.154%，生產(chǎn)的洗手液中添加的水楊酸和對氯間二甲苯酚含量分別為0.40%和0.15%，測定結(jié)果與添加量基本一致。

圖2 洗手液樣本色譜圖

2.6 加標(biāo)回收試驗

在已知水楊酸和對氯間二甲苯酚含量的洗手液中加入不同濃度的水楊酸和對氯間二甲苯酚，按本實驗方法測定，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗，結(jié)果見表3。由表3 可知，水楊酸的加標(biāo)回收率為97.9%～99.5%，對氯間二甲苯酚的加標(biāo)回收率為96.9%～99.8%，說明該方法具有較高的準(zhǔn)確度，能準(zhǔn)確測定洗手液中的水楊酸和對氯間二甲苯酚含量。

表3 水楊酸回收試驗結(jié)果

3 結(jié)語

建立了高效液相色譜儀同時測定洗手液中水楊酸和對氯間二甲苯酚含量的方法。該方法簡便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好，減少了儀器、試劑損耗，可用于洗手液中水楊酸和對氯間二甲苯酚含量的測定。