試論HPLC法測(cè)定不同品種雞蛋中的膽固醇含量

馬丹霞

借助于HPLC法對(duì)不同種類雞蛋里面的膽固醇含量進(jìn)行有效測(cè)定，本文以濃度為2.0mol/L的KOH-乙醇溶液開展皂化，石油醚萃取，以C18反相色譜柱進(jìn)行分離，HPLC法測(cè)定，對(duì)操作環(huán)節(jié)進(jìn)行了簡(jiǎn)化，減少了試劑的總體使用量，并且進(jìn)一步節(jié)省了探究時(shí)間，整個(gè)探究過程只需要1.5小時(shí)。本方法用來測(cè)定實(shí)際樣品，效果明顯。

膽固醇是生物膜以及神經(jīng)髓鞘的核心構(gòu)成部分，而且是膽汁酸以及類固醇激素的前體?？缮眢w內(nèi)部太多的膽固醇會(huì)進(jìn)一步引起高血脂等疾病，于是，人們需要對(duì)日常飲食中膽固醇的攝入量進(jìn)行控制。雞蛋是人體進(jìn)一步攝入膽固醇的核心渠道。HPLC法對(duì)蛋黃里面膽固醇的具體含量進(jìn)行測(cè)定，操作快速、方便，在短期內(nèi)就能夠完成探究，能夠滿足快速探究以及大批量樣品測(cè)定的雙重需要。

材料與方法

儀器與試劑。Agilentl100化學(xué)工作站，紫外檢測(cè)器G1314A，Agilent 1100高效液相色譜儀，異丙醇、乙腈、甲醇、石油醚、膽固醇、氯化鈉、氫氧化鉀以及無水乙醇。制定濃度為1.0mg/ml的膽固醇溶液：將100mg膽固醇放在100ml的容量瓶里面，以少量甲醇進(jìn)行溶解后，用甲醇稀到刻度。

樣品處理以及測(cè)定。將稱好的0.20g雞蛋放在50ml的具塞比色管里面，添加5.0ml濃度為2.0moL/L的KOH一乙醇液，進(jìn)行充分振蕩，放在65℃的水浴里面實(shí)施皂化30分鐘后取出，利用流動(dòng)的水實(shí)施冷卻，添加2.0ml的飽和氯化鈉溶液后，然后添加20.0ml的石油醚，旋渦混合均勻后開展離心分離，將10.0ml的上清液放進(jìn)10ml刻度的比色管中，通入氮?dú)膺M(jìn)行吹干，再采取1.0ml甲醇對(duì)殘?jiān)M(jìn)行有效溶解，過0.45μm濾膜之后，將10.0μl有效添加到液相色譜儀，根據(jù)以上色譜條件有效實(shí)施測(cè)定，外標(biāo)法定量。

結(jié)果

線性范圍以及方法的最低檢出限。按照探究步驟對(duì)膽固醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行配制，在本實(shí)驗(yàn)的背景下，膽固醇的濃度從0至1.0mg/ml范圍，標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)一步呈現(xiàn)優(yōu)良的線性關(guān)系。檢出限低至0.005mg/ml，如果取樣1.0g，雞蛋里面膽固醇的最低檢出濃度是0.5mg/100g。

準(zhǔn)確度以及精密度試驗(yàn)。在0.20g的雞蛋樣品里面依次添加0.15、0.30以及0.45mg的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)，操作方法與樣品一致，獲得的回收率如表1所示。由表1能夠得知，本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果是真實(shí)的，其平均回收率是92.1%，各種濃度的測(cè)定結(jié)果的誤差都不超過5%。

雞蛋測(cè)定。借助于HPLC法對(duì)購買的10份雞蛋樣品有效實(shí)施了測(cè)定，結(jié)果膽固醇含量依次在（180至545）mg/100g之間。

結(jié)論

第一，現(xiàn)如今，在借助于比色法以及HPLC法進(jìn)一步測(cè)定雞蛋中膽固醇含量的過程中，一般需要對(duì)樣品實(shí)施皂化操作以及若干次提取，以減少蛋黃里面其他成分帶來的影響，操作復(fù)雜且耗時(shí)，一般需要很多個(gè)小時(shí)才可以測(cè)定完一個(gè)樣品，不適合快速檢測(cè)大批量的樣品。

第二，實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明，不同種類雞蛋的膽固醇含量有所區(qū)別，于是對(duì)不同種類雞蛋的膽固醇含量的相關(guān)參考值進(jìn)行測(cè)定，有利于充分指導(dǎo)當(dāng)?shù)爻鞘芯用竦暮侠砩攀场?/p>