牦牛布氏桿菌病流行病學(xué)調(diào)查

張文秀

牦牛布魯氏桿菌病是由布魯氏桿菌引發(fā)的一種人畜共患病，除了危害牛之外，還可以危害羊、豬等多種牲畜動(dòng)物，同時(shí)也是一種人畜共患病。該種疾病的典型特征是隱性感染，只有牛群進(jìn)入繁殖階段之后，才會(huì)表現(xiàn)出突然流產(chǎn)，產(chǎn)下死胎，僵尸胎等癥狀。牛布魯氏桿菌病廣泛分布于世界各地，給畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成的危害十分嚴(yán)重。

一、試驗(yàn)材料與方法

1、實(shí)驗(yàn)材料選取

本次研究共選擇化隆縣昂思多鎮(zhèn)10個(gè)自然村的160頭牦牛，6個(gè)家庭牧場(chǎng)的103頭牦牛和3個(gè)中小養(yǎng)殖場(chǎng)的160頭牦牛開(kāi)展牦牛布魯氏桿菌病流行病學(xué)調(diào)查。隨機(jī)采集血液，帶回實(shí)驗(yàn)室之后常規(guī)方法分離，得到血清放置在-20℃的環(huán)境下保存。

2、檢測(cè)方法

本次牦牛布魯氏桿菌病檢測(cè)主要選擇使用牛布氏桿菌病毒抗體檢測(cè)ELISA試劑盒。在檢測(cè)過(guò)程中涉及到蒸餾水，5μL，10μL，50μL，100μL，200μL，500μL，1000μL的加樣器，震蕩器和磁力攪拌器、操作之前需要做好血清的處理工作。操作過(guò)程中避免受到任何細(xì)胞的刺激，選擇使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管收極血液之后，放置在1000轉(zhuǎn)的離心機(jī)內(nèi)，離心處理10min，將血清和紅細(xì)胞迅速分離。細(xì)胞上清液放置在1000轉(zhuǎn)的離心機(jī)內(nèi)，離心處理10min去除顆粒和聚合物，將組織當(dāng)中加入適量生理鹽水充分搗碎，放在離心機(jī)內(nèi)離心處理10min取上層清液。如果獲得到的血清樣本不立即使用，應(yīng)該將其分成小部分，放置在-20℃環(huán)境下保存，避免反復(fù)冷凍。首先，操作前的準(zhǔn)備工作。操作之前所涉及到的實(shí)驗(yàn)吸射液應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中準(zhǔn)備，不能夠儲(chǔ)存，稀釋之前應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)品震蕩均勻稀釋比例，按照說(shuō)明書(shū)要求開(kāi)展。緩沖稀釋液，選擇使用50倍的蒸餾水稀釋。在使用之前，所有的試劑就應(yīng)該混合均勻，不能夠產(chǎn)生大量泡沫，以免加樣過(guò)程中出現(xiàn)誤差;其次，操作步驟。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋。本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。40pg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，20pg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，10pg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，5pg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5pg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30min。將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min。每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 min以?xún)?nèi)進(jìn)行;最后，計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)即為樣品的實(shí)際濃度。

二、結(jié)果分析

檢測(cè)結(jié)果顯示不同養(yǎng)殖模式下牦牛的陽(yáng)性率分別為0.63%、0.97%、0.00%，其中以家庭牧場(chǎng)和自然村散養(yǎng)戶(hù)陽(yáng)性率最高，中小養(yǎng)殖場(chǎng)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性病例。總體檢測(cè)陽(yáng)性2份，陽(yáng)性率為0.47%。不同養(yǎng)殖模式之下的發(fā)病率存在差異。造成不同結(jié)果出現(xiàn)的原因主要是因?yàn)椴煌B(yǎng)殖模式之下所采用的養(yǎng)殖管理方案存在很大差異性，其中散養(yǎng)養(yǎng)殖模式、家庭牧場(chǎng)的養(yǎng)殖戶(hù)普遍存在著不合理養(yǎng)殖管理。由于一直堅(jiān)持傳統(tǒng)放牧養(yǎng)殖模式，牛群在戶(hù)外活動(dòng)過(guò)程中接觸病原微生物的幾率大大增加。再加上養(yǎng)殖較為分散，養(yǎng)殖隨意性很強(qiáng)，整體的衛(wèi)生環(huán)境普遍較差，給病原微生物的繁殖傳播提供了條件。該種疾病的發(fā)生流行詳細(xì)情況，如表1所示。

三、討論

本次調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)殖模式之下，牛布魯氏桿菌病的感染率呈現(xiàn)很大的差異性，其中以家庭牧場(chǎng)的感染率最高達(dá)到0.97%，其次是自然村散養(yǎng)戶(hù)達(dá)到0.63%，中小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病率0.00%，超過(guò)了農(nóng)業(yè)衛(wèi)生部所制定的布病控制在0.2%以下的標(biāo)準(zhǔn)。出現(xiàn)該種情況，主要是因?yàn)殛笈２剪斒蠗U菌病屬于慢性傳染性疾病，其危害程度雖然不及重特大傳染性疾病傳播速度快，致死率高，但是由于慢性感染會(huì)嚴(yán)重威脅到動(dòng)物的身體抵抗能力。再加上動(dòng)物防疫重心發(fā)生轉(zhuǎn)移，一年兩次的血清檢測(cè)比例相對(duì)較低，檢測(cè)數(shù)量較少，很難查明本地區(qū)布魯氏桿菌病的整體發(fā)生情況，使得布魯氏桿菌病發(fā)生之后得不到有效控制，不能夠做到有的放矢。對(duì)此就需要我們提高重視程度，構(gòu)建針對(duì)性的防控方案，更好的控制該種疾病的發(fā)生流行

（作者單位：810907青海省海東市化隆縣昂思多鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）