屠宰環(huán)節(jié)禽產(chǎn)品中金黃色葡萄球菌污染狀況調(diào)查

謝建華 葉潔瑩 王棋 梁望旺 楊澤林 熊仲良 曾政

摘要 [目的]了解重慶市家禽屠宰環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌的污染情況，為防控金黃色葡萄球菌食源性疾病的發(fā)生提供參考依據(jù)。[方法]按照GB 4789.10—2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》對重慶市屠宰環(huán)節(jié)400份樣品進行檢測，同時隨機選擇40株金黃色葡萄球菌進行藥敏試驗和致病性分析。[結果]屠宰環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌污染程度達59.25%，秋季較夏季污染程度重，為67.00%，胴體比環(huán)境污染重，為65.71%，燙洗煺毛和凈膛環(huán)節(jié)污染風險較重均達60%以上。40株分離株中毒素基因檢出率為65.00%，總耐藥率為95.00%，主要對青霉素、四環(huán)素、紅霉素和克林霉素耐藥;70.00%的菌株同時對3種以上抗生素耐藥。[結論]重慶市家禽屠宰環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌污染較重，部分分離株存在多個毒素基因和多重耐藥現(xiàn)象，值得高度重視。

關鍵詞 金黃色葡萄球菌;禽產(chǎn)品;細菌污染

中圖分類號 S852.61? 文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2020）20-0163-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.20.044

Investigation on Staphylococcus aureus Pollution in Slaughtered Poultry Products

XIE Jian-hua，YE Jie-ying，WANG Qi et al （Chongqing Animal Disease Prevention and Control Center，Chongqing 401120）

Abstract [Objective]To understand the pollution of Staphylococcus aureus in slaughtered poultry products in Chongqing. [Method]According to GB 4789.10-2016 National Food Safety Standard-Food Microbiological Examination S.aureus，a total of 400 samples in Chongqing， 40 strains of S.aureus were randomly selected for drug sensitivity test and pathogenicity analysis.[Result]S.aureus pollution reached 59.25%.Autumn was more polluted than summer，67.00%.Carcass was more polluted than environment， 65.71%.The pollution risks in ironing and cleaning was more than 60%.In 40 isolates，the detected rate of toxin gene was 65.00%， and the average drug resistance rate was 95.00%.The S.aureus isolates were highly resistant to penicillin， tetracycline， erythromycin and clindamycin， 70.00% strains displayed multi-drug resistance.[Conclusion]The pollution of S.aureus in slaughtered poultry products in Chongqing is serious，some isolates had multiple toxin genes and multi drug resistance，which should be paid more attention to.

Key words Staphylococcus aureus;Poultry products;Bacterial contamination

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種常見的食源性致病革蘭氏陽性菌，自然界中廣泛存在，可以通過接觸、空氣傳播等多種途徑污染食品，在適當條件下產(chǎn)生腸毒素等多種毒性蛋白，可引起急性金黃色葡萄球菌毒血癥和食物中毒 [1-3]。有關資料表明，無論是在發(fā)達國家還是發(fā)展中國家，金黃色葡萄球菌引起的食物中毒在細菌性食物中毒中占有較大比例 [4-6]。同時隨著耐藥性菌株不斷增多，細菌的耐藥已成為公共衛(wèi)生問題。細菌的耐藥可以通過食物鏈傳播，臨床細菌的耐藥性與食物中細菌的耐藥性直接相關 [7]。了解重慶市家禽屠宰環(huán)節(jié)食源性金黃色葡萄球菌污染程度、產(chǎn)毒素及耐藥性情況，以期為該市金黃色葡萄球菌引起的食源性疾病的發(fā)生提供預警，亦為臨床指導用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 取樣環(huán)節(jié)與數(shù)量 在重慶選取2個大型屠宰場和2個中小型屠宰場，2018年上半年和下半年各取1次，全年共取樣400份。其中胴體表面拭子280份，環(huán)境拭子120份。

1.2 取樣方法

用棉簽擦拭胴體表面和各環(huán)節(jié)環(huán)境表面，然后裝入裝有10 mL運輸培養(yǎng)基的試管中冷藏保存。

1.3 檢測方法

先按照《食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》GB 4789.10—2016進行分離鑒定 [8];應用法國梅里埃VITEK2 Compact 細菌全自動微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)對分離菌株進行生化鑒定和藥敏分析。按照劉穎等 [9]提供的金黃色葡萄球菌毒力基因進行分析。

1.4 檢測數(shù)據(jù)分析 采用t檢驗方法對樣品檢測數(shù)據(jù)進行生物學統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 不同屠宰規(guī)模驗證結果與分析 由表1可知，不同規(guī)模屠宰場都存在金黃色葡萄球菌污染，大型屠宰場與中小型相比差異不顯著（P>0.05）。原因可能是小型屠宰場便于清洗消毒，動物來源主要局限于當?shù)?，而大型屠宰場由于待宰動物多且來源廣，從而加大了污染概率。

2.2 不同季節(jié)驗證結果與分析

不同季節(jié)都存在金黃色葡萄球菌污染。由表2可知，秋季的污染風險較大，檢出率達67.00%，與夏季相比差異極顯著（P<0.01）。

2.3 不同樣品類型驗證結果與分析 由表3可知，胴體和環(huán)境中都存在金黃色葡萄球菌污染，尤以胴體的污染風險較高，達65.71%，與環(huán)境拭子相比差異極顯著（P<0.01）。

2.4 不同環(huán)節(jié)中金黃色葡萄球菌檢測結果 由表4可知，不同環(huán)節(jié)中都存在金黃色葡萄球菌污染，燙洗煺毛和凈膛環(huán)節(jié)污染風險較重，與清洗和分割環(huán)節(jié)相比差異顯著 （0.01

2.5 藥敏試驗結果

根據(jù)采樣時間和樣品類型從分離的237株金黃色葡萄球菌中隨機抽取40株進行藥物敏感試驗，以金黃色葡萄球菌ATCC25923作質(zhì)控菌株，由圖1可知，40株金黃色葡萄球菌中38株存在不同程度的耐藥性，總耐藥率為95.00%，其中青霉素耐藥菌株為85.00%，四環(huán)素耐藥菌株為67.50%，紅霉素耐藥菌株為62.50%，克林霉素耐藥菌株為57.50%。40株分離株對苯唑西林、萬古霉素、呋喃妥因、替加環(huán)素、奎奴普丁-達福普汀和利奈唑胺敏感。多重耐藥性分析可見，70.00%的金黃色葡萄球菌同時對3種以上抗生素耐藥。

2.6 致病性分析

對隨機選出的40株金黃色葡萄球菌進行sea等毒素基因及mecA基因的檢測，結果26株菌株含有毒素基因，占65.00%，剝脫毒素檢出率最高達40.00%（16/40），其次是腸毒素，達35.00%（14/40），其中含傳統(tǒng)腸毒素基因的檢出率20.00%（8/40），新型腸毒素的檢出率32.50%（13/40）。腸毒素基因中sec、seg和sej檢出率較高，均為15.00%，seb為 5.00%，未檢出see基因毒素，14株腸毒素陽性菌株中有10株至少含2種腸毒素基因，pvl檢出率為10.00%（4/40），tst檢出率為2.50%（1/40），MecA基因檢出率為5.00%（2/40），其中一株基因型為mecA+seb，另外一株為mecA+sea+sei+pvl（圖2）。

3 討論

綜上所述，家禽屠宰環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌污染程度較高，達59.25%，污染風險與季節(jié)和清洗消毒程度有很大關系，金黃色葡萄球菌主要的流行季節(jié)是夏秋兩季，自古重慶初秋就有“秋老虎”的稱號，高溫天氣有利于細菌的繁殖和流行。經(jīng)調(diào)查，燙洗過程用的都是靜止的水且屠宰分區(qū)不明，這就導致水中糞便、羽毛和其他污物與胴體接觸，加大了金黃色葡萄球菌的污染風險。屠宰分區(qū)合理，清潔消毒徹底、宰后檢疫把關，是禽產(chǎn)品中金黃色葡萄球菌污染風險顯著下降的主要原因。

隨機選取的40株金黃色葡萄球菌對青霉素、四環(huán)素、紅霉素和克林霉素等具有不同程度的耐藥性，這與林君等 [10]和章海通等 [11]報道一致，70.00%的金黃色葡萄球菌同時對3種以上抗生素耐藥，這與臨床上大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類等抗生素的大量使用密切相關。細菌耐藥性通過動物源性的食物鏈傳播給人類并成為人類病原菌耐藥重要原因，同時抗菌藥物的使用也會影響人體內(nèi)的微生態(tài)及其生產(chǎn)環(huán)境 [12]。多重耐藥金黃色葡萄球的出現(xiàn)預示著食用這類菌污染產(chǎn)品帶來的風險更大，同時為臨床給藥和治療帶來更大的挑戰(zhàn)。應加強耐藥監(jiān)測，在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)加大宣傳力度，減少抗生素濫用，從源頭上控制細菌耐藥的增強。

此外，40株金黃色葡萄球菌中65%的菌株含有毒素基因，其中腸毒素達35.00%。14株腸毒素陽性的菌株中有10株至少含2種腸毒素基因，占比達71.43%（10/14），產(chǎn)腸毒素的種類越多，引起食物中毒的風險越大。有2株含有seb基因，seb是目前食品中毒常見的重要生物毒素之一，微量的seb會引起機體免疫失調(diào)、嘔吐、腹瀉、器官損傷等其他癥狀。由于具有耐高溫、耐酸堿、易于制備氣溶膠等特點，目前已經(jīng)被美國疾病預防控制中心（Centers for Disease Control and Prevention，CDC）列為B類潛在生物制劑 [13]。另外有2株金黃色葡萄球菌檢出mecA基因，但這2株細菌的藥敏結果顯示其對萬古霉素和苯唑西林敏感，不屬于超強耐藥菌株，可見mecA基因不能作為甲氧西林和苯唑西林抗性的指示劑，這也與劉穎等 [10]和Pereira等 [14]報道一致。

通過此次調(diào)查，家禽屠宰環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌污染較重，由于重慶市氣候溫和，相對濕度較大，一旦存在金黃色葡萄球菌污染極易繁殖產(chǎn)生毒素，從而造成食源性疾病的發(fā)生。摸清屠宰環(huán)節(jié)禽產(chǎn)品中金黃色葡萄球菌的污染水平，可為禽產(chǎn)品質(zhì)量安全的監(jiān)管提供科學依據(jù)。

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