不同模式乙肝五項與HBV-DNA定量及ALT的關(guān)系研究

朱昕 熊丹

摘要：目的? 探討不同模式乙肝五項與乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）及血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）相關(guān)性分析。方法? 選擇2018年1～6月在高安市人民醫(yī)院確診的509例乙型肝炎病毒（HBV）陽性患者為研究對象，乙肝五項用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、HBV-DNA用熒光定量PCR（FQ-PCR）法、ALT用乳酸脫氫酶法測定。根據(jù)乙肝五項的結(jié)果分為A組大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、B組小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、C組小二陽（HBsAg+、HBcAb+），分析不同模式乙肝五項與HBV-DNA及ALT相關(guān)性。結(jié)果? ①A組HBV-DNA定量陽性率（87.50%）高于B組（50.64%）和C組（34.33%），B組陽性率高于C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;②A組HBV-DNA定量>1.0×105比例（64.84%）高于B組（18.47%）和C組（30.43%），A組HBV-DNA定量<1.0×104比例（23.08%）低于B組（64.33%）、C組（60.87%）;三組HBV-DNA定量為1.0×104～1.0×105的比例在10%～20%;③509例乙肝患者血清中ALT≥50 U/L有70例，A組中ALT≥50 U/L的比例（34.61%）高于B組（0.90%）、C組（0.89%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但B組與C組ALT≥50 U/L的比例比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論? 不同模式乙肝五項檢測結(jié)果與HBV-DNA量及血清酶ALT含量有關(guān)，對不同模式的乙型肝炎患者采取不同模式模式乙肝五項檢測，對乙肝診治具有臨床意義。

關(guān)鍵詞：乙肝五項;HBV-DNA;血清標志物ALT;慢性乙型肝炎

中圖分類號：R512.6+2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.19.052

文章編號：1006-1959（2020）19-0162-03

Abstract：Objective? To explore the correlation analysis of five different models of hepatitis B with hepatitis B virus DNA （HBV-DNA） and serum alanine aminotransferase （ALT）.Methods? A total of 509 hepatitis B virus （HBV） positive patients diagnosed in Gao'an Peoples Hospital from January to June 2018 were selected as the research subjects. Five hepatitis B items were tested by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and HBV-DNA by fluorescence quantitative PCR （FQ-PCR） method， ALT was determined by lactate dehydrogenase method. According to the results of the five items of hepatitis B， they were divided into three major yang （HBsAg+， HBeAg+， HBcAb+） in group A， three small yang （HBsAg+， HBeAb+， HBcAb+） in group B， and two small yang （HBsAg+， HBcAb+） in group C. Five hepatitis B items of different modes were analyzed. Correlation with HBV-DNA and ALT.Results? ①The positive rate of HBV-DNA in group A （87.50%） was higher than that of group B （50.64%） and group C （34.33%）. The positive rate of group B was higher than that of group C，the difference was statistically significant （P<0.05）; ②The ratio of HBV-DNA quantification>1.0×105 （64.84%） in group A was higher than that of group B （18.47%） and group C （30.43%）， and the ratio of HBV-DNA quantification <1.0×104 （23.08%） in group A was lower than that of group B （64.33%）， group C （60.87%）; the proportion of the three groups with HBV-DNA quantification of 1.0×104～1.0×105 is 10%～20%; ③There were 70 cases of 509 patients with hepatitis B in serum ALT≥50 U/L. The proportion of ALT≥50 U/L in group A （34.61%） was higher than that in group B （0.90%） and group C （0.89%），the difference was statistically significant （P<0.05）， but there was no significant difference in the ratio of ALT≥50 U/L between group B and group C （P>0.05）.Conclusion? The five test results of different models of hepatitis B were related to the amount of HBV-DNA and the content of serum enzyme ALT. The five test results of different models of hepatitis B for patients with different models of hepatitis B had clinical significance for the diagnosis and treatment of hepatitis B.

Key words：Five items of hepatitis B;HBV-DNA;Serum marker ALT;Chronic hepatitis B

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）具有廣泛傳染性，是世界范圍內(nèi)流行病變[1]。可通過血液傳播、性傳播及母嬰傳播等多種途徑感染正常人群[2，3]，發(fā)病率較高。我國為乙肝高發(fā)區(qū)，人群表面抗原攜帶率高達 7.18%，慢性乙肝患者約2000萬[1]，流行形勢較嚴峻。臨床常用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測乙肝病毒血清標志物包括乙肝表面抗原 （HBsAg）、乙肝表面抗體 （HBsAb）、乙肝e抗原 （HBeAg）、乙肝e抗體 （HBeAb） 和乙肝核心抗體 （HBcAb），即乙肝五項，但此檢測法對其病情嚴重程度的評估效果并不理? 想[4]。隨著分子診斷技術(shù)的發(fā)展，對乙肝患者血清中HBV-DNA及血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanineaminotransferase，ALT）定量檢測，可反映乙肝傳染性及患者的肝功損害情況[5]。因此，本研究為進一步明確乙肝患者的兩對半模式與HBV-DNA、ALT的關(guān)系，對乙肝病毒陽患者血清中的乙肝五項、HBV-DNA及ALT進行測定，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2018年1～6月在高安市人民醫(yī)院確診的509例HBV陽性患者為研究對象，其中男366例，女143例。年齡14～75歲，平均年齡（40.1±12.6）歲。入組患者均自愿參與本次研究，并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1儀器和試劑? 乙肝五項應(yīng)用半自動酶標分析儀（SK201，深圳市盛信科技有限公司）測定，乙肝五項檢測試劑盒購自珠海麗珠試劑股份有限公司;HBV-DNA定量檢測使用達安實時熒光PCR儀（DA7600，達安基因股份有限公司），HBV-DNA定量檢測試劑盒購自中山大學(xué)達安基因股份有限公司;血清酶ALT使用全自動生化分析儀（AU5800，貝克曼庫爾特商貿(mào)有限公司），其檢測試劑盒購自貝克曼庫爾特商貿(mào)有限公司 。

1.2.2乙肝五項測定? 將試劑盒各組分別從試劑盒中取出，平衡至室溫。將20倍濃縮洗液按照1∶19的比例加入到蒸餾水中，混勻備用。預(yù)包被板條固定于板架，按序編號。按具體使用試劑盒說明書加樣、溫育、洗版、顯色、終止。用酶標儀讀值，在單波長450 nm下讀取各孔OD值。結(jié)果判斷：①HBsAg臨界值=陰性對照平均OD值+0.09;②HBsAb臨界值（C.O.）=2.1×陰性對照平均OD值;③HBeAg臨界值（C.O.）=2.1×陰性對照平均OD值;樣本OD值<臨界值（C.O.）為HBsAg陰性，樣本OD值≥臨界值（C.O.）為HBsAg陽性。④HBeAb臨界值（C.O.）=陰性對照平均OD值×0.5;HBeAb臨界值（C.O.）=陰性對照平均平均OD值×0.5;樣本OD值<臨界值（C.O.）為HBeAb陽性，樣本OD值≥臨界值（C.O.）為HBeAb陰性。根據(jù)乙肝五項的結(jié)果分為A組大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、B組小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、C組小二陽（HBsAg+、HBcAb+）。

1.2.3 HBV-DNA定量檢測? 采用FQ-PCR法對HBV-DNA進行定量檢測。標本2500 rpm離心5 min，取360 μl血清加入微型管B后12000 rpm離心5 min。另取微型管A加入DNA提取液（大瓶）450 μl，于B中取200 μl血清加入A中，機器震蕩混勻離心? ?2000 rpm，10 s，放入干燥器中加蓋100℃煮10 min取出，待其冷卻后12000 rpm離心5 min，取出20 μl加入PCR管，然后離心8000 rpm，10 s上機，反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的Start值、End值以及Threshold值，點擊Analysis自動獲得分析結(jié)果，在Report界面查看結(jié)果。判定標準：<5.00 ×102 copies/ml為陰性，大于5.00 ×102 copies/ml為陽性。PCR實驗室通過衛(wèi)生部認定標準。

1.2.4 ALT測定? 采用乳脫氫酶法測定，取患者靜脈血3 ml，溫育10 min后，4000 rpm離心4 min分離血清。試劑準備：該試劑是即用型ALT檢測試劑盒，所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。將樣本編號、掃碼、輸項目、上生化檢測儀檢測，系統(tǒng)自動計算各樣本ALT濃度。ALT正常設(shè)定范圍為9～50 U/L。

1.3觀察指標? 觀察A組大三陽、B組小三陽、C組小二陽的乙肝五項檢測值、HBV-DNA定量血清ALT水平。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法? 應(yīng)用SPSS 21.0軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以（%）表示，采用？字2檢驗;計量資料用（x±s）表示，t檢驗，多組間的比較行方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同模式乙肝五項與HBV-DNA定量檢測的關(guān)系? A組HBV-DNA定量陽性率高于B組和C組，B組高于C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 HBV-DNA定量分析? A組HBV-DNA定量>1.0×105占比（64.84%）高于B組（18.47%）和C組（30.43%）; A組HBV-DNA定量<1.0×104占比（23.08%）低于B組（64.33%）和C組（60.87%）。三組HBV-DNA定量在1.0×104～1.0×105均為10%～20%，見圖1。

2.3不同模式乙肝五項與血清轉(zhuǎn)氨酶ALT的關(guān)系? 509例乙肝患者血清中ALT≥50 U/L有70例，A組ALT≥50 U/L的比例高于B組和C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），B組與C組占比比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

3討論

乙型肝炎是有乙肝病毒引起的肝臟慢性炎癥，HBV是病毒型肝炎中常見的病原體[6]。HBV感染是全球性的公共衛(wèi)生問題，臨床應(yīng)高度重視以控制感染率。乙肝五項檢查是臨床檢測HBV感染的常見方法，可判斷是否感染HBV，反映病毒復(fù)制水平[7]。但乙肝五項模式多用于早期篩查，且其組合方式復(fù)雜多樣，導(dǎo)致臨床無法判斷患者體內(nèi)病毒復(fù)制狀態(tài)，造成漏診、誤診發(fā)生，對病情嚴重程度的評估參考性不大[8]。

隨著近年FQ-PCR等分子生物學(xué)方法不斷涌現(xiàn)，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)其具有靈敏度高、特異性好的優(yōu)點，很好地解決免疫學(xué)方法的缺陷，降低漏檢率[9]。其中，F(xiàn)Q-PCR法因其具有更高的靈敏度，且可對病毒進行精確定量、操作簡便等優(yōu)勢，在臨床上應(yīng)用最為廣泛[10]。一般HBV-DNA定量檢測值越高，傳染性越強[7]。因此，進一步明確乙肝患者的兩對半模式與HBV-DNA定量之間的關(guān)系，可更好地協(xié)助臨床醫(yī)生判斷患者的病情，制定更具體的治療方案。

本研究結(jié)果顯示，A組HBV-DNA定量陽性率（87.50%）高于B組（50.64%）和C組（34.33%），B組陽性率高于C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與王碧玉等的研究結(jié)果一致[11]。A組HBV-DNA定量>1.0×105比例（64.84%）高于B組（18.47%）和C組（30.43%），A組HBV-DNA定量<1.0×104比例（23.08%）低于B組（64.33%）、C組（60.87%），說明不同模式的乙肝五項與HBV-DNA定量值有相關(guān)性，患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況不一樣。此外，乙肝五項檢測結(jié)果e抗原陽性患者中，HBV-DNA陽性檢出率均較高，HBV-DNA定量值也高于未檢出e抗原陽性患者，說明e抗原與HBV復(fù)制有關(guān)，這與其他文獻報道的結(jié)果相一致[12]。本研究中部分血清學(xué)陽性的患者熒光定量PCR檢測顯示為陰性，分析原因可能如下：①部分患者用藥治療后，HBV-DNA先于血清標志物消失;②HBV整合進宿主肝細胞，導(dǎo)致血清中無法檢測到游離HBV-DNA[13]。ALT在肝臟中含量最多，主要存在于肝細胞胞漿中，病毒性肝炎發(fā)病導(dǎo)致機體ALT濃度變化[14]。研究發(fā)現(xiàn)，ALT正常的HBV慢性感染者中20.7%有明顯的肝纖維化，該類患者ALT輕微升高，其肝纖維化的風(fēng)險則高達48%[15，16]。此外，A組患者中ALT≥50 U/L的比例為34.61%，高于B組（0.90%）和C組（0.89%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），B組與C組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），說明大三陽患者的ALT波動比較大，肝功能活動性與乙肝模式相關(guān)。

綜上所述，不同模式乙肝五項與HBV-DNA定量以及ALT定量有關(guān)。因此，對不同模式的乙型肝炎患者采取不同模式模式乙肝五項檢測，對乙肝診治具有臨床意義。

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收稿日期：2020-05-24;修回日期：2020-06-15

編輯/肖婷婷