老年乙肝及HBV相關肝硬化患者外周血Th17細胞水平與IL—17、α—SMA及肝功能的相關性研究

伍建業(yè)+++楊苗苗+++錢賢峰

[摘要] 目的 分析老年乙肝（CHB）和乙肝病毒（HBV）相關肝硬化患者外周血輔助性T細胞17（Th17）臨床意義，探討Th17對相關疾病的診斷價值。 方法 將我院收治的老年HBV感染者按病變類型分為CHB組及HBV相關性肝硬化組，另選80例老年健康體檢者納入正常組。比較各組Th17頻率、白細胞介素-17（IL-17）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達與分布，探討Th17、IL-17、α-SMA表達的相關性。 結(jié)果 HBV相關肝硬化組Th17頻率、IL-17、IL-17 mRNA及α-SMA水平顯著高于CHB組，CHB組上述指標顯著高于正常組（P<0.05）。CHB組ALT、HBV DNA載量顯著高于HBV相關性肝硬化組，而TBIL顯著低于后者，兩組ALT、TBIL均顯著高于正常組（P<0.05）。相關性分析表明，Th17頻率與IL-17、α-SMA呈正相關（P<0.05），與ALT、TBIL、HBV DNA載量無明顯相關性（P>0.05）。結(jié)論 老年肝病患者Th17頻率與肝臟炎癥程度變化密切關聯(lián)，檢測Th17頻率有助于早期明確疾病嚴重程度，預測病情轉(zhuǎn)歸。

[關鍵詞] 乙型肝炎病毒；慢性乙型肝炎；肝硬化；輔助性T細胞17；α-平滑肌肌動蛋白

[中圖分類號] R512.62 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2016）26-0037-03

乙型肝炎病毒（HBV）感染導致的慢性乙型肝炎（CHB）是我國常見病、高發(fā)病[1]。研究表明，輔助性T細胞17（Th17）可產(chǎn)生大量白細胞介素-17（IL-17），并參與肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展環(huán)節(jié)[2]。已有學者證實，Th17細胞頻率改變、Th17/調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）比例失衡與多種免疫性疾病的發(fā)病密切關聯(lián)[3]。作為以免疫病理為主要發(fā)病機制的疾病，CHB和HBV相關性肝硬化亦可能與Th17細胞頻率改變存在一定相關性。老年人群因其肝功能的自然衰減，其肝病轉(zhuǎn)歸對其生命健康有著至關重要的影響?；跒槔夏暌腋渭耙腋蜗嚓P疾病的臨床診治提供高效診斷依據(jù)的目的，本文選取我院收治的174例老年HBV感染者及同期80名老年健康體檢者，進行了對照研究，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2013年10月～2015年10月收治的174例老年HBV感染者，按照其病變類型分為CHB組（n=77）及HBV相關性肝硬化組（n=97），另選同期80健康體檢者納入正常組。CHB組男41例，女36例；年齡65～83歲，平均（69.26±12.37）歲；HBV相關肝硬化組男52例，女45例；年齡67～86歲，平均（68.83±9.26）歲；正常組男42例，女38例；年齡65～85歲，平均（66.94±10.31）歲。各組年齡、性別等比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。本臨床研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準，受試者均知情同意且自愿參與。

1.2 納入排除標準

HBV感染者納入標準：①年齡≥65歲；②參照《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》[4]確診CHB或HBV相關性肝硬化；③6個月內(nèi)無抗病毒或免疫調(diào)節(jié)治療史；④未合并其他肝炎病毒感染。健康體檢者納入標準：①年齡≥65歲；②無肝炎病史；③HBV血清學標志物檢測陰性。排除標準：①年齡<65歲；②合并心、肝、腎等其他重要臟器嚴重病變；③合并HIV感染、惡性腫瘤患者。

1.3方法

（1）Th17細胞頻率：受試者空腹采靜脈血3 mL，使用Calibur流式細胞儀（美國BD公司）檢測CD4+、IFNγ-、IL17+、IL22-，即為Th17細胞頻率[5]。（2）IL-17：取離心血漿以酶免法檢測IL-17水平；取肝組織以實時熒光定量PCR檢測IL-17 mRNA。（3）α-SMA：取肝組織石蠟包埋標本，以SP法依次切片—脫蠟—水化—修復—一抗、二抗溫育—顯色—復染—脫水—透明—封片，以PBS代替一抗為空白對照，胞漿呈棕黃色即可判定為陽性細胞[6]，由Image 6.0軟件計算平均光密度（AOD）。（4）其他指標：使用C8000生化分析儀（美國雅培公司）檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）等指標，使用ABI7300型熒光定量PCR儀（美國ABI公司）檢測HBV血清學標志物及HBV DNA載量。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗；計量資料以（x±s）表示，行t檢驗；采用Pearson法或Spearman法分析Th17細胞頻率與ALT、TBIL等其他指標的相關性；P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Th17細胞頻率、IL-17表達水平、α-SMA表達水平比較

HBV相關性肝硬化組Th17細胞頻率顯著高于CHB組，CHB組Th17細胞頻率顯著高于正常組（P<0.05）。以正常組肝組織IL-17 mRNA相對表達量為1.00，HBV相關性肝硬化組血漿IL-17、肝組織IL-17 mRNA表達顯著高于CHB組，CHB組上述指標顯著高于正常組（P<0.05）。HBV相關肝硬化組肝組織α-SMA表達水平顯著高于CHB組，CHB組肝組織α-SMA表達水平顯著高于正常組（P<0.05）。見表1。

2.2 各組受試者其他指標比較

CHB組ALT、HBV DNA載量顯著高于HBV相關肝硬化組，而TBIL顯著低于后者，兩組患者ALT、TBIL均顯著高于正常組（P<0.05）。見表2。

2.3 Th17細胞頻率與各項指標的相關性

相關性分析示：Th17細胞頻率與IL-17、α-SMA呈正相關（P<0.05），與ALT、TBIL、HBV DNA載量無明顯相關性（P>0.05）。見表3。

3 討論

CHB的主要特征為肝臟慢性炎癥與繼發(fā)性纖維化，過往觀點認為，CHB患者機體對HBV清除能力的不足是導致HBV感染慢性化的主要原因，其免疫機制與Th1和Th2免疫應答失調(diào)有一定關聯(lián)[7]。最新研究表明，CHB患者外周血Th1細胞比例與健康人群無明顯差別，且與疾病嚴重程度亦無較大關聯(lián)，提示HBV感染的慢性化過程并非僅受單一因素影響，可能存在其他免疫機制影響肝臟損傷進程[8]。

作為一種具有促炎作用的CD4+T淋巴細胞亞群，Th17可促進IL-17等炎癥介質(zhì)分泌，近年來大量研究證實了Th17在自身免疫性疾病、腫瘤及感染性疾病發(fā)生與轉(zhuǎn)歸中扮演的重要角色[9]。本研究結(jié)果示：HBV相關性肝硬化組外周血Th17細胞頻率顯著高于CHB組，CHB組外周血Th17細胞頻率顯著高于正常組，說明隨著HBV感染者肝臟損傷程度的加劇，其Th17細胞頻率逐漸上升。與此同時，受試者IL-17、IL-17 mRNA變化呈現(xiàn)相同趨勢。IL-17是Th17分泌的最重要效應因子，其受體在體內(nèi)有廣泛表達，IL-17可誘導IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、趨化因子表達增加，促進局部炎癥細胞浸潤與組織損傷[10]。相關性分析發(fā)現(xiàn)，外周血Th17細胞頻率與IL-17表達水平呈正相關，表明Th17可通過促進IL-17表達，在肝臟損傷的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

肝星狀細胞（HSC）激活是HBV相關肝硬化的主要病理特征，主要由長期進行性、彌漫性肝損害導致，這一過程的標志為α-SMA高表達[11]。本次研究中隨著肝損傷的加重，肝組織α-SMA表達水平逐漸增高，印證了上述結(jié)論。同時，本研究提示外周血Th17細胞頻率與肝組織α-SMA表達亦呈正相關，與鄭超等[12]研究結(jié)論一致，表明Th17細胞亦參與了α-SMA高表達改變過程，考慮與Th17細胞可能參與HSC激活有關[13]。

有學者發(fā)現(xiàn)，外周血Th17細胞頻率與血清ALT呈一定相關性[14]，但本研究結(jié)果示，外周血Th17與ALT、TBIL、HBV DNA載量均無明顯相關性，與上述研究結(jié)論存在一定出入，考慮與本研究CHB患者多處于輕度階段，Th17細胞頻率與ALT等肝功能指標變化的關聯(lián)性不夠明顯有關。此外，Hobbs等[15]指出，肝損傷部位Th17細胞聚集增多，且其聚集程度與炎癥狀態(tài)呈正相關，其原因為HBV抗原誘導及細胞壞死后大量細胞因子激活Th17細胞并進一步促進免疫反應。因此，針對Th17細胞的靶向調(diào)節(jié)有望為CHB及HBV相關性肝硬化的治療提供新的策略。

綜上所述，隨著CHB及HBV相關性肝硬化患者肝損傷程度的加劇，其外周血Th17細胞頻率顯著上升，Th17細胞誘導的IL-17與α-SMA分泌可能是導致肝損傷發(fā)生、發(fā)展的主要原因，故定期檢測Th17細胞頻率有望早期判斷疾病嚴重程度，為患者病情的控制提供參考。

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（收稿日期：2016-06-30）