兒茶素對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖的抑制作用及機(jī)制初探

董建將　閆磊　梁軍　劉陽

【摘要】目的 對兒茶素對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖的抑制作用以及作用機(jī)制進(jìn)行調(diào)查。方法 制作不同濃度的兒茶素培養(yǎng)基開展甲基噻唑?qū)嶒?，并采用流式?xì)胞術(shù)對兒茶素在細(xì)胞周期中的影響進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251在兒茶素的作用下會發(fā)生顯著的形態(tài)變化，且其變化與兒茶素濃度成正比。當(dāng)兒茶素濃度為62.5～125 mg/ml時腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡情況非常明顯，而在低于10 μg/ml濃度中腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的凋亡情況并不明顯。兒茶素不同濃度下作用24 h的細(xì)胞凋亡率均高于作用12 h（P<0.05）;相同作用時間下兒茶素濃度越高細(xì)胞凋亡率越高（P<0.05）。結(jié)論 兒茶素能夠在S期對細(xì)胞增值進(jìn)行抑制，進(jìn)而抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖。

【關(guān)鍵詞】兒茶素;腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251;細(xì)胞增殖;細(xì)胞抑制

【中圖分類號】R73 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.20..02

神經(jīng)膠質(zhì)瘤是一種惡性腫瘤，其發(fā)病部位主要為中樞神經(jīng)系統(tǒng)，本病通過手術(shù)治療后生長更快，患者死亡率更高。因此，臨床中多采用藥物化療、放療等方式進(jìn)行治療，通過藥物殺滅腫瘤細(xì)胞。但多數(shù)化療藥物存在較大的毒性，患者治療過程中副作用發(fā)生率非常高，給患者帶來的痛苦和負(fù)擔(dān)較大[1]。且部分腫瘤細(xì)胞對化療物質(zhì)以及放射線的敏感度較低，導(dǎo)致治療效果并不理想，因此，需要采取其他方式進(jìn)行治療[2]。兒茶素是茶葉中提取的多酚物質(zhì)，近年來研究發(fā)現(xiàn)，兒茶素能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞的增殖進(jìn)行抑制。為此，本次研究將針對兒茶素對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖的抑制機(jī)理進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般材料

標(biāo)本：U251細(xì)胞株系采購于中山大學(xué)并于本實驗室內(nèi)冷凍保存;兒茶素（95.0%）選購于南京清澤科技有限公司。將兒茶素用完全培養(yǎng)基配置成8個不同的濃度，初始濃度為500 μg/ml，而后每個培養(yǎng)基以50.0%濃度遞減，最終培養(yǎng)基濃度為3.90625 μg/ml。

儀器：顯微鏡（德國萊卡）;壓力鍋;CO2培養(yǎng)箱;流式細(xì)胞儀;酶標(biāo)儀（Multiskan MK3）。

試劑：胎牛血清;胰酶;甲基噻唑藍(lán);液體培養(yǎng)基;臺盼藍(lán);碘化丙錠;RnaseA;枸櫞酸鈉。

1.2 一般方法

細(xì)胞培養(yǎng)：將U251細(xì)胞株培養(yǎng)于含有胎牛血清、青霉素、鏈霉素培養(yǎng)基中，隔天換液，培養(yǎng)條件為5%CO2、37攝氏度。

試劑配制：兒茶素通過完全培養(yǎng)基配置成8個不同的濃度;臺盼藍(lán)用無菌水配置成濃度為0.4%的溶液。

增殖抑制：收集對數(shù)期生長細(xì)胞將其接種在96孔板中，通過8個不同濃度兒茶素處理24 h，而后計算細(xì)胞成功率。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用SPSS 21.0軟件處理文中數(shù)據(jù)，計量資料以（x±s）表示，t/F為檢驗值，計數(shù)資料采用%表示，x2檢驗，P<0.05視為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞形態(tài)變化

腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251在兒茶素的作用下會發(fā)生顯著的形態(tài)變化，且其變化與兒茶素濃度成正比。隨著兒茶素濃度不斷遞增，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞體積不斷增加、細(xì)胞核輪廓逐漸模糊，細(xì)胞處于S期時開始出現(xiàn)增大表現(xiàn)。而對照組則無明顯變化，細(xì)胞生理形態(tài)基本完整。

2.2 細(xì)胞凋亡率

當(dāng)兒茶素濃度為62.5～125 mg/ml時腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡情況非常明顯，而在低于10μg/ml濃度中腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的凋亡情況并不明顯。兒茶素不同濃度下作用24 h的細(xì)胞凋亡率均高于作用12 h（P<0.05）;相同作用時間下兒茶素濃度越高細(xì)胞凋亡率越高（P<0.05），詳見表1。

3 討 論

惡性腫瘤患者死亡率非常高，臨床治療多以手術(shù)、放化療等方式為主，但由于常規(guī)放化療藥物毒性較大，其不僅會殺滅腫瘤細(xì)胞同時也會殺滅機(jī)體正常細(xì)胞，因此所產(chǎn)生的副作用非常大，患者通常存在明顯的毒副反應(yīng)，嚴(yán)重影響患者治療效果[3]。加之部分細(xì)胞對放化療的敏感度非常低因此急需采取其他的方式開展治療，降低患者治療副作用，提升患者治療安全性。

兒茶素是一種茶葉中的多酚物質(zhì)，兒茶素能夠清除自由基，因此具有抗衰老的作用，其抗衰老作用甚至超過維生素E[4]。兒茶素具有類氟作用，能夠減少牙菌斑、延緩牙周病的發(fā)生;兒茶素還能夠改善腸道內(nèi)維生素的分布，抑制致病菌的同時不會損傷益生菌生態(tài)[5]。其同時具有除臭、抗菌、抑制血壓等作用。在近年來研究中發(fā)現(xiàn)，兒茶素具有抑制癌細(xì)胞增殖的作用，早期已經(jīng)證實其能夠誘發(fā)白血病Molt4B細(xì)胞凋亡。

在本次研究中可見，兒茶素能夠誘發(fā)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞凋亡，且隨著兒茶素濃度的升高，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡率也持續(xù)提升。此外，兒茶素作用時間不斷延長腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的凋亡率也呈現(xiàn)上升趨勢，證明了兒茶素確實能夠?qū)δX膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞增殖進(jìn)行抑制。在實驗中發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251在S期時開始增大，細(xì)胞比例不斷下降，證明細(xì)胞抑制從S期開始。

總的來說，兒茶素能夠抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖，可作為臨床治療新方向。

參考文獻(xiàn)

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