精子形態(tài)異常與體外受精移植周期助孕結(jié)局及新生兒畸形率的相關(guān)性分析

劉利敏， 吳志煥， 柯潔榮， 高彩鳳， 李敦高

(1.廣東省惠州市中心人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心， 廣東 惠 州 516000 2.河北工程技術(shù)學(xué)院， 河北 石家莊 050091)

近年來, 不孕不育癥已成為全球性的問題。不孕癥發(fā)病率約為10～15%，其中男性因素約占40%[1]。精子形態(tài)檢查是評估男性生育力的關(guān)鍵指標(biāo)。精子形態(tài)與精子運(yùn)動(dòng)能力、穿透宮頸粘液的能力、頂體反應(yīng)過程、穿透卵母細(xì)胞透明帶的能力密切相關(guān)。精子畸形率增高會延長自然受孕時(shí)間，也會增加自然流產(chǎn)的幾率[2]。而針對精子形態(tài)異常在體外受精移植周期助孕周期中對妊娠及妊娠結(jié)局的影響存在爭議，有研究報(bào)道精子形態(tài)異常會降低受精率，甚至完全不受精，部分精子形態(tài)畸形的患者通過輔助生殖技術(shù)可以成功受孕[3]，而在另一項(xiàng)研究中，精子形態(tài)異常對輔助助孕的妊娠率、抱嬰率及出生畸形率等均無顯著影響[4]。因此，本研究通過回顧性分析精子形態(tài)異?；颊咴诒旧翅t(yī)學(xué)中心就診數(shù)據(jù)，評估精子形態(tài)異常在體外受精移植周期中的臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率、抱嬰率、新生兒出生缺陷率等指標(biāo)，評估精子形態(tài)異常對體外受精移植周期生殖結(jié)局的作用，為輔助生殖的安全性提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對象:通過回顧性分析2013年1月至2020年1月在本生殖醫(yī)學(xué)中心首次做體外受精移植周期助孕期間的結(jié)果，共1820例。排除任何女方不孕的因素，包括年齡>38歲、卵巢功能不良、多囊卵巢綜合征、高泌乳素血癥、子宮內(nèi)膜異位癥，遺傳性疾病家族史及先天性生殖道發(fā)育不全等。

1.2精液形態(tài)分析:在不孕癥的初步咨詢中，男性在禁欲2～7d后通過手淫法收集精液樣本，并評估了精子形態(tài)。精液的采集、處理及分析過程均依據(jù)WHO5相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，在輔助助孕周期之前至少對2個(gè)精液樣品進(jìn)行了精子形態(tài)學(xué)評估。至少評估了200個(gè)精子，以達(dá)到可接受的低采樣誤差。以改良巴氏染色法染色后，進(jìn)行精子形態(tài)玻片的制備，并嚴(yán)格按照WHO第五版精子形態(tài)分類進(jìn)行閱片，為避免主觀性，閱片結(jié)果采用雙人復(fù)核的方式進(jìn)行。根據(jù)精子形態(tài)分析結(jié)果分為三組，分別為<1.0%、1.0%～4.0%及>4.0%。

1.3促排卵方案:根據(jù)個(gè)體差異采取不同的方案，有卵泡期長方案、長效長方案、拮抗劑、微刺激方案，B超和血激素(E2、p、LH)測定檢測卵泡發(fā)育，當(dāng)主導(dǎo)卵泡≥18mm，肌注HCG5000～10000IU，36h后經(jīng)陰道取卵。

1.4精液處理:取卵日收集精液以CASA進(jìn)行常規(guī)分析，根據(jù)精子濃度和活力選擇不同的處理方法(密度梯度或上游法)處理精液，使用瑞典Vitrolife公司提供的密度梯度分離試劑盒進(jìn)行梯度離心，調(diào)整前向運(yùn)動(dòng)精子濃度調(diào)整至2.0～10×106/mL，低于2.0×106/mL的精液樣本，直接用于ICSI。

1.5體外受精:采用集中受精法進(jìn)行體外受精，在1mL受精皿中受精，精子最終濃度為0.2×106/mL。受精皿置于5% CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.6胚胎培養(yǎng)及移植:加精后4～6h部分體外受精(in vitro fertilization, IVF)周期進(jìn)行早脫顆粒細(xì)胞，觀察2極體情況，必要時(shí)做早期補(bǔ)救卵泡漿內(nèi)單精子注射(rescue intracytoplasmic sperm injection, RICSI)。加精后16～20h(即胚胎培養(yǎng)Day1)觀察受精情況。卵母細(xì)胞內(nèi)可見2原核(2PN)表示正常受精，并于72h后(即胚胎培養(yǎng)Day3)觀察胚胎發(fā)育情況。Day3，實(shí)驗(yàn)室選擇優(yōu)質(zhì)卵裂胚移植入女方不孕患者子宮。備注：優(yōu)質(zhì)卵裂胚標(biāo)準(zhǔn)：將D1為2PN，第3天卵裂球數(shù)介于7～9之間的胚胎和碎片評分為1級或2級的胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎。

1.7妊娠結(jié)局隨訪:移植胚胎后14日測血清人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)，測血β-HCG后兩周B超見孕囊、胚芽及原始心血管搏動(dòng)者為臨床妊娠。經(jīng)超聲確診臨床妊娠后保持電話隨訪，以獲取有關(guān)活產(chǎn)和出生異常的信息。

2 結(jié) 果

2.1患者一般資料:正常形態(tài)精子百分率<1.0%、1.0～4.0%及>4.0%的分別有145、726及949例，通過對患者一般資料對比發(fā)現(xiàn)，女方年齡、基礎(chǔ)FSH及體重指數(shù)等女方基本資料無顯著性差異(P>0.05)，男方患者年齡及患不孕癥年數(shù)亦未見明顯差異(P>0.05)，詳見表1。

表1 三組患者的一般資料

2.2正常形態(tài)精子百分率對輔助助孕結(jié)局的影響:結(jié)果表明，三組患者的臨床妊娠率分別為44.83%、48.90%及49.21%，抱嬰率分別為35.86%、42.98%及43.52%，自然流產(chǎn)率分別為8.97%、5.92%及5.69%，各組數(shù)據(jù)數(shù)值雖有一定差距，但主要是由于患者人數(shù)的差異，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，各組數(shù)據(jù)之間并無顯著差異(P>0.05)，表明精子形態(tài)異常對體外受精移植周期助孕結(jié)局無明顯影響，詳見表2。

表2 正常形態(tài)精子百分率對輔助助孕結(jié)局的影響n(%)

2.3正常形態(tài)精子百分率對新生兒出生安全性的影響:對已成功分娩患者進(jìn)行隨訪，并結(jié)合治療前檢測數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，精子形態(tài)異?；颊叩木簼舛燃扒跋蜻\(yùn)動(dòng)精子率具有顯著性差異。三組患者的妊娠期分別為38.30±1.89、38.10±2.04及38.14±2.20，并無顯著性差異(P>0.05)，早產(chǎn)率與精子形態(tài)異常無顯著相關(guān)性，單胎的早產(chǎn)率均在10%左右，而雙胎的早產(chǎn)率高達(dá)50%左右，表明體外受精移植周期助孕的早產(chǎn)率同樣與單胎或雙胎相關(guān)，而與患者的正常形態(tài)精子百分率無明顯相關(guān)性。同樣的，三組患者所分娩的低體重嬰兒百分率、單胎嬰兒體重及雙胎嬰兒體重均無顯著性差異(P>0.05)，精子形態(tài)異常對新生兒的畸形率亦無明顯影響(P>0.05)，詳見表3。

表3 正常形態(tài)精子百分率對新生兒安全性的影響

3 討 論

與大多數(shù)其他哺乳動(dòng)物的精子相比，人類精子的大小和形狀差異很大，不僅在頭部和頂體的大小和形狀上，而且在核空泡，中段和尾部異常方面也是如此。研究表明，精子形態(tài)異常(畸形精子癥)與較低的受精能力和潛在的DNA異常有關(guān)，特別是在單純形態(tài)畸形精子癥中[5]，精子形態(tài)對IUI結(jié)局有重大影響，正常形態(tài)精子率低于4%的患者應(yīng)考慮體外受精方式[6]。多種因素對體外受精移植周期助孕結(jié)局有一定影響，包括男女方年齡、不孕年數(shù)及體重指數(shù)等[7]，本研究在排除上述其他原因后，著重探討精子形態(tài)異常對體外受精移植周期助孕結(jié)局及新生兒的影響。

國內(nèi)外報(bào)道關(guān)于精子形態(tài)異常對體外受精移植周期結(jié)局影響尚無定論。Park等通過系統(tǒng)回顧分析發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)的畸形精子癥對體外受精輔助生育妊娠結(jié)局無顯著影響[8]；劉闖等研究發(fā)現(xiàn)通過精液優(yōu)化處理后，精子形態(tài)異常對體外受精移植周期中的胚胎質(zhì)量、臨床妊娠、抱嬰率及致畸率等均無顯著的預(yù)測意義[9]。然而，也有研究表明精子形態(tài)與輔助助孕的受精率直接相關(guān)，畸形精子的頂體功能異常可直接導(dǎo)致體外受精失敗或影響受精率[10]。本研究通過回顧性分析在本生殖醫(yī)學(xué)中心首次行體外受精助孕的1820例精子形態(tài)異常患者，發(fā)現(xiàn)精子形態(tài)異常對體外受精移植周期助孕的臨床妊娠率、抱嬰率及自然流產(chǎn)率等結(jié)局無明顯影響，不同正常形態(tài)精子百分率亦不影響懷孕后先天性異常的發(fā)生率或自然流產(chǎn)率。

調(diào)查分析發(fā)現(xiàn)，造成上述現(xiàn)象的可能原因有：各個(gè)生殖中心采用的試驗(yàn)方法不同，對精子形態(tài)的分類標(biāo)準(zhǔn)存在差異；不同的技術(shù)操作人員的水平及評判標(biāo)準(zhǔn)存在差異；納入病例數(shù)不一致；體外受精過程有差異等。而本研究中納入足夠的樣本量，并均為本生殖醫(yī)學(xué)中心的病例，避免了上述因素可能導(dǎo)致的結(jié)果不一致，所得結(jié)論具有一定的可信度。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)精子形態(tài)異常對及新生兒安全性等無顯著影響，孤立的精子形態(tài)異常不應(yīng)作為體外受精移植周期助孕結(jié)局的預(yù)測指標(biāo)，為體外受精輔助生殖的安全性提供一定的參考價(jià)值。