OSAC患者血清和腹腔積液中IL-6、IL-8、MMP-2和MMP-9水平與臨床病理分期及預(yù)后的關(guān)系*

高翠紅, 孫文杰，崔嬌姣

(唐山市婦幼保健院，河北 唐山 063000)

卵巢癌是常見的女性生殖器官的惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重威脅著女性的健康。漿液性卵巢癌(OSAC)是卵巢惡性腫瘤中最常見的病理類型，由于癌癥早期臨床癥狀不明顯,極易造成誤診，就醫(yī)時(shí)大多患者處于癌癥晚期[1]，這類患者極易出現(xiàn)腹腔積液，從而導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[2-3]。細(xì)胞因子在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，其中以白細(xì)胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白細(xì)胞介素8(interleukin-8,IL-8)的作用最為突出。IL-6和IL-8是具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,在卵巢癌血清和腹腔積液中均有較高水平的表達(dá)[4-5]。有研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)是一種可以降解細(xì)胞外基質(zhì)的分泌性或跨膜性蛋白，可對(duì)腫瘤細(xì)胞微環(huán)境進(jìn)行調(diào)節(jié)、促使細(xì)胞活性增加以及加快血管生成等參與腫瘤的侵襲過(guò)程?；|(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)，高表達(dá)于卵巢癌血清和組織中[6-7]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究細(xì)胞因子IL-6、IL-8、MMP-2和MMP-9在OSAC中的表達(dá)水平，探討其在OSAC血清和腹腔積液中的水平變化及與腫瘤病理分期和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1資料、儀器及試劑

1.1.1一般資料 選取 2015年7月— 2019年7月接受手術(shù)治療的OSAC患者(OSAC組) 56例，平均(48.3±14.2)歲；卵巢良性腫瘤(良性腫瘤組)32例，平均(45.5±12.7)歲。所有入組病例均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)，術(shù)前均未行放化療，沒有使用免疫制劑及激素類藥物。排除轉(zhuǎn)移性卵巢惡性腫瘤及其他系統(tǒng)腫瘤、婦科炎癥和免疫系統(tǒng)疾病，近期均無(wú)感染。

1.1.2病理分級(jí)和臨床分期 OSAC組臨床分期按 FIGO(2006年版)手術(shù)病理標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ和Ⅱ期 22 例，平均(46.2±10.7)歲；Ⅲ和Ⅳ期 34 例，平均(47.4±13.5)歲。組織分級(jí)分為高、中分化組 29 例，平均(44.8±15.2)歲；低分化組 27例，平均(46.4±14.1)歲。

1.1.3儀器和試劑 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定IL-6、IL-8 含量，試劑由上海圓創(chuàng)生物技術(shù)有限公司提供；MMP-2、MMP-9試劑盒由上海復(fù)星公司生產(chǎn)；采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)，具體操作按說(shuō)明書進(jìn)行，酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo公司生產(chǎn)。

1.2方法

抽取所有患者手術(shù)當(dāng)日清晨空腹靜脈血3 mL，放置于有分離膠的促凝試管中，3 500 r/min離心10 min后分離血清，置于-70 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。腹腔積液樣本均于腹腔鏡或開腹手術(shù)中獲得，并3 500 r/min離心10 min，取上清液置于-70 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用ELISA法分別測(cè)定IL-6、IL-8、MMP-2和 MMP-9的含量，按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和試劑使用說(shuō)明書操作，檢測(cè)當(dāng)日儀器狀態(tài)穩(wěn)定、質(zhì)控在控，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、溫度、濕度等均符合操作規(guī)程的要求。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1血清和腹腔積液中IL-6、IL-8、MMP-2 和 MMP-9水平

結(jié)果顯示，OSAC組血清和腹腔積液中IL-6、IL-8、MMP-2 和 MMP-9的水平均高于良性腫瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 OSAC組和良性腫瘤組患者血清和腹腔積液中IL-6、IL-8 、MMP-2 和 MMP-9水平Tab.1 Comparison of IL-6, IL-8, MMP-2 and MMP-9 levels in serum and peritoneal effusion between OSAC group and benign tumor group

2.2OSAC組患者腹腔積液中各指標(biāo)的相關(guān)性

OSAC組患者M(jìn)MP-2、MMP-9以及IL-6在血清和腹腔積液中的表達(dá)呈正相關(guān)(t=0.465，t=0.290，t=0.401，P<0.05)，見圖1。

圖1 OSAC患者血清與腹腔積液中MMP-2、MMP-9及IL-6的相關(guān)性Fig.1 Correlation of MMP-2,MMP-9 and IL-6 in serum and peritoneal effusion in OSAC patients

2.3OSAC患者腹腔積液中IL-6、IL-8、MMP-2 以及MMP-9與臨床分期和組織分級(jí)的關(guān)系

由表2可見，Ⅲ、Ⅳ期OSAC患者腹腔積液中IL-6、IL-8、MMP-2和MMP-9水平均高于Ⅰ、Ⅱ期患者，高、中分化組各指標(biāo)水平低于低分化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 OSAC組腹腔積液中IL-6、IL-8、MMP-2 和 MMP-9與臨床分期和組織分級(jí)的關(guān)系Tab.2 Relationship of IL-6, IL-8, MMP-2 and MMP-9 levels in peritoneal effusion of OSAC group between clinical stage and tissue grading

3 討論

腹腔積液是臨床上一種常見的體征，其形成的原因較復(fù)雜，婦科惡性腫瘤極易產(chǎn)生腹腔積液[8]，其中以漿OSAC最為多見[9]。OSAC腹腔積液的發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，可能是卵巢腫瘤侵襲使得毛細(xì)淋巴管重吸收障礙，造成血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)增多，增加了毛細(xì)血管的通透性[10]。腹腔轉(zhuǎn)移是OSAC的特性之一[11]，腹腔積液的出現(xiàn)意味著OSAC存在腹腔轉(zhuǎn)移[12]，大量腹腔積液極易造成機(jī)體低蛋白血癥，形成惡病質(zhì)。腹腔積液中的非細(xì)胞成分例如細(xì)胞因子和基質(zhì)金屬蛋白酶在OSAC發(fā)病中起著非常重要的作用[13]，其中IL- 6、IL- 8、MMP-2和MMP-9是OSAC腹腔積液良惡性的重要指標(biāo)。

IL-6 是淋巴細(xì)胞、單核-吞噬細(xì)胞及某些腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的具有多功能的細(xì)胞因子，可刺激腫瘤生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和惡化。IL-6由卵巢上皮細(xì)胞產(chǎn)生，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。IL-8是一種具有激活和趨化作用的細(xì)胞因子，與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[14]，IL-8可通過(guò)自分泌生長(zhǎng)因子、血管發(fā)生因子和促進(jìn)Ⅳ型膠原酶的活性以及影響細(xì)胞的黏附移動(dòng),從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，OSAC血清和腹腔積液中IL-6、IL-8均高于卵巢良性腫瘤組，且腹腔積液中IL-6、IL-8水平高于血清中的水平，IL-6在OSAC血清和腹腔積液中呈正相關(guān)關(guān)系。

MMP是一類高度保守的酶[15]，MMP參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡過(guò)程并參與調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。MMP與卵巢腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切關(guān)聯(lián)，在卵巢癌中應(yīng)用最廣泛的指標(biāo)為MMP-2和MMP-9。有研究顯示，多種惡性腫瘤患者血清中MMP-2、MMP-9均明顯增高，提示惡性腫瘤的形成可能與 MMP 有關(guān)[16-17]。MMP-2又被稱為明膠酶A，它的表達(dá)與卵巢癌的進(jìn)展顯著相關(guān)，檢測(cè)MMP-2可能作為預(yù)測(cè)和評(píng)估患者預(yù)后的靈敏指標(biāo)，因此下調(diào)MMP-2的表達(dá)可能會(huì)抑制卵巢癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。MMP-9屬于Ⅳ型明膠酶，可降解Ⅳ型膠原蛋白，Ⅳ型膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的主要成分。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移很大程度上依賴于細(xì)胞外基質(zhì)的降解。細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜被降解，促使腫瘤細(xì)胞向腹膜移動(dòng)，MMP促進(jìn)新生血管形成，加速腫瘤向腹膜生成是卵巢癌腹腔積液形成的主要機(jī)制[18-19]。本研究結(jié)果表明，OSAC患者血清和腹腔積液中MMP-2、MMP-9均高于卵巢良性腫瘤組，且腹腔積液中MMP-2、MMP-9水平高于血清中的水平。腹腔積液中MMP-2、MMP-9與臨床分期成正相關(guān)[20]，與組織分級(jí)成負(fù)相關(guān)，同時(shí)腹腔積液中MMP-2、MMP-9分別與血清中各指標(biāo)呈正相關(guān)性。因此，下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)可能會(huì)抑制OSAC細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，血清和腹腔積液成分中細(xì)胞因子和MMP的表達(dá)可作為OSAC進(jìn)展和預(yù)后的標(biāo)志物，深入研究細(xì)胞因子和MMP將有助于闡明卵巢癌的發(fā)病機(jī)制,協(xié)助臨床診斷和預(yù)后評(píng)估, 并能為OSAC的早期診斷和治療提供新的線索和途徑。