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    非達(dá)霉素原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢查方法研究

    2020-07-09 10:47王婭莉劉月班璐李曉露程曉昆任風(fēng)芝張雪霞
    中國(guó)藥房 2020年5期
    關(guān)鍵詞:檢測(cè)器乙腈霉素

    王婭莉 劉月 班璐 李曉露 程曉昆 任風(fēng)芝 張雪霞

    中圖分類(lèi)號(hào) R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2020)05-0581-05

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.05.15

    摘 要 目的:建立非達(dá)霉素原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。方法:分別考察正相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)對(duì)非達(dá)霉素原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢出能力,優(yōu)選出最佳色譜系統(tǒng)。建立有關(guān)物質(zhì)檢查的高效液相色譜法,色譜柱為Agilent Eclipse XDB C18,流動(dòng)相A為0.2%三乙胺緩沖液(pH 3.8)-乙腈(55 ∶ 45,V/V)、流動(dòng)相B為0.2%三乙胺緩沖液(pH 3.8)-乙腈(20 ∶ 80,V/V)(梯度洗脫),流速為1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm,柱溫為35 ℃,進(jìn)樣量為10 ?L;以不加校正因子的主成分自身對(duì)照法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。結(jié)果:非達(dá)霉素在正相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)下不能有效分離雜質(zhì)C、F,在反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)下僅能檢出雜質(zhì)C、D、E、F 4個(gè)雜質(zhì);在反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)下可檢出11個(gè)雜質(zhì),故以此系統(tǒng)進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。在方法學(xué)考察中,非達(dá)霉素檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.5~20.0 μg/mL(R2=0.999 9);檢測(cè)限為0.05 ng,定量限為0.15 ng;重復(fù)性、中間精密度試驗(yàn)的RSD均小于2.0%(n=6);平均回收率為98.4%(RSD為3.6%,n=9)。3批非達(dá)霉素原料藥中雜質(zhì)含量分別為0.53%、0.51%、0.51%。結(jié)論:非達(dá)霉素在反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)下進(jìn)行雜質(zhì)檢查效果最好;建立的有關(guān)物質(zhì)檢查方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高,可用于非達(dá)霉素原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢查。

    關(guān)鍵詞 非達(dá)霉素;高效液相色譜法;正相色譜;反相色譜;紫外檢測(cè)器;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器;主成分自身對(duì)照法;有關(guān)物質(zhì)

    Study on Detection Methods for Related Substances in Fidaxomicin Raw Material

    WANG Yali,LIU Yue,BAN Lu,LI Xiaolu,CHENG Xiaokun,REN Fengzhi,ZHANG Xuexia(New Drug Research & Development Company of NCPC/National Engineering Research Center of Microbial Medicine/Hebei Industry Microbial Metabolic Engineering &Technology Research Center, Shijiazhuang 050015, China)

    ABSTRACT? ?OBJECTIVE: To establish the method for the determination of related substances in fidaxomicin raw material. METHODS: The detection ability of NP-HPLC-UV, RP-HPLC-ELSD and RP-HPLC-UV systems for the related substances in fidamycin raw material was investigated and the best chromatographic system was selected. The HPLC detection method for the related substances was established. The detection was performed on Agilent Eclipse XDB C18 column with mobile phase A consisted of 0.2% triethylamine buffer solution (pH 3.8)-acetonitrile (55 ∶ 45, V/V), mobile phase B consisted of 0.2% triethylamine buffer solution (pH 3.8)-acetonitrile (20 ∶ 80, V/V) at the flow rate of 1.0 mL/min (gradient elution); the detection wavelength was set at 230 nm, and column temperature was 35 ℃; the sample size was 10 ?L. Calculation of the content of related substances was principal component self-control method without correction factor. RESULTS: The impurities C and F could not be separated effectively in NP-HPLC-UV system. In RP-HPLC-ELSD system, only impurities C, D, E and F could be detected. In RP-HPLC-UV system, 11 impurities could be detected. In the study of methodology, the linear ranges were 0.5-20.0 μg/mL for fidaxomicin (R2=0.999 9); the LOD was 0.05 ng, LOQ was 0.15 ng; RSDs of reproducibility and intermediate precision tests were less than 2.0% (n=6); average recovery was 98.4% (RSD=3.6%, n=9). The sum of impurities in 3 batches of raw materials were 0.53%, 0.51%, 0.51%, respectively. CONCLUSIONS: The effect of detecting impurities by RP-HPLC-UV are the best. Established method is specific and sensitive, and can be used for the determination of related substance in fidaxomicin raw material.

    KEYWORDS? ?Fidaxomicin; HPLC; Normal phase chromatogram; Reverse phase chromatogram; UV detector; ELSD; Principal component self-control method; Related substance

    非達(dá)霉素(Fidaxomicin)又名非達(dá)米星,最早于1975年發(fā)現(xiàn),是一種具有18元環(huán)復(fù)雜結(jié)構(gòu)的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素,分子式為C52H74Cl2O18,分子量為1 058.04,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性需氧及厭氧菌均具有較好的抗菌作用[1-4]。2011年被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療艱難梭菌感染(CDI),且治療CDI的效果優(yōu)于現(xiàn)在臨床常用的萬(wàn)古霉素[5-10]。

    非達(dá)霉素為微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物,非達(dá)霉素粗品可由游動(dòng)放線菌屬菌株發(fā)酵產(chǎn)生,通過(guò)過(guò)濾、浸泡、濃縮、萃取、脫色、結(jié)晶、過(guò)濾、洗滌、干燥等一系列過(guò)程制得[11-12] 。非達(dá)霉素為臺(tái)勾霉素B族的1種,其同系物多且結(jié)構(gòu)極其相似[13-15]。在非達(dá)霉素發(fā)酵產(chǎn)生過(guò)程中通過(guò)生產(chǎn)控制發(fā)現(xiàn),隨著目標(biāo)產(chǎn)物的增長(zhǎng),一些次級(jí)代謝產(chǎn)物[如雜質(zhì)A、B、C、D、E、F、G、H、I、FR1、FR2等(各雜質(zhì)結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁共振、液質(zhì)聯(lián)用確定,具體過(guò)程本文略,下同)]也會(huì)逐漸產(chǎn)生。這些次級(jí)代謝產(chǎn)物會(huì)降低目標(biāo)產(chǎn)物的純度,導(dǎo)致藥品質(zhì)量下降,再則這些雜質(zhì)的毒理藥理作用不明確,也可能影響臨床藥品的安全性、有效性。目前未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)非達(dá)霉素原料藥在發(fā)酵產(chǎn)生過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行全面監(jiān)控的報(bào)道。為了更好地控制非達(dá)霉素原料藥質(zhì)量,保證用藥的安全性和有效性,筆者依據(jù)文獻(xiàn)方法[16],對(duì)比研究了非達(dá)霉素原料藥中主要雜質(zhì)在正相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)下的分離情況,建立以高效液相色譜(HPLC)法檢查非達(dá)霉素原料藥中有關(guān)物質(zhì)的方法,并采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)含量,為控制非達(dá)霉素原料藥的質(zhì)量提供參考。非達(dá)霉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

    1 材料

    1.1 儀器

    2695型HPLC儀、2489型紫外檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司);2000ES型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(美國(guó)Alltech公司);2010-CHT型HPLC儀(日本島津公司)。

    1.2 藥品與試劑

    非達(dá)霉素粗品(批號(hào):20160601,純度:90.2%)、非達(dá)霉素精粉(批號(hào):20160801、20160802、20160803,純度分別為:98.6%、98.8%、98.5%)、非達(dá)霉素對(duì)照品(批號(hào):201510,純度:98.8%)、非達(dá)霉素雜質(zhì)C(批號(hào):201607,純度:98.6%)均由華北制藥集團(tuán)新藥研究開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司提供;乙腈、正己烷、乙醇均為色譜純,其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純,水為自制蒸餾水。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜系統(tǒng)及檢測(cè)器的選擇

    先后選用正相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)對(duì)非達(dá)霉素粗品進(jìn)行分析,建立色譜條件。

    2.1.1 正相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)檢查有關(guān)物質(zhì)

    (1)色譜條件。色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-CN(250 mm×4.6 mm,5 ?m);流動(dòng)相:正己烷-乙醇-乙腈(84 ∶ 13 ∶ 3,V/V/V,含0.1%醋酸和0.05%三乙胺);流速:1.5 mL/min;柱溫:35 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):245 nm;進(jìn)樣量:20 ?L。

    (2)供試品溶液的制備。精密稱(chēng)取非達(dá)霉素粗品適量,加溶劑[乙醇-乙腈(5 ∶ 1,V/V)]溶解后,用正己烷定容并稀釋制成每1 mL中約含2 mg非達(dá)霉素的溶液,即得。

    (3)非達(dá)霉素粗品分析。取“2.1.1(2)”項(xiàng)下非達(dá)霉素粗品供試品溶液,按“2.1.1(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,記錄色譜圖,詳見(jiàn)圖2。

    由圖2可見(jiàn),在本色譜條件下,色譜系統(tǒng)基線噪音大、信噪比高,雜質(zhì)C與雜質(zhì)F保留時(shí)間相同,分離較差;另外,還有部分含量在0.1%以下的雜質(zhì)峰與噪音相當(dāng),不能檢測(cè)出來(lái)。因此,正相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)不適用于非達(dá)霉素有關(guān)物質(zhì)的檢查。

    2.1.2 反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)檢查有關(guān)物質(zhì)

    (1)色譜條件。色譜柱:Agilent Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5 ?m);流動(dòng)相:A相為0.05%冰醋酸緩沖液(用氨水調(diào)節(jié)pH至3.8)-乙腈(90 ∶ 10,V/V),B相為水-乙腈(10 ∶ 90,V/V),梯度洗脫;流速:1.0 mL/min;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:20 ?L;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度:110 ℃;氣體流速:3.0 L/min。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

    表1 反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)的梯度洗脫程序

    (2)供試品溶液的制備。精密稱(chēng)取非達(dá)霉素粗品適量,用乙腈定容并稀釋制成每1 mL中約含5 mg非達(dá)霉素的溶液,即得。

    (3)非達(dá)霉素粗品分析。取“2.1.2(2)”項(xiàng)下非達(dá)霉素粗品供試品溶液適量,按“2.1.2(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,記錄色譜圖,詳見(jiàn)圖3。

    由圖3可見(jiàn),非達(dá)霉素粗品在反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)中僅能檢出雜質(zhì)C、D、E、F,其它雜質(zhì)不能有效檢出。因此,反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)不適用于非達(dá)霉素有關(guān)物質(zhì)的檢查。

    2.1.3 反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)檢查有關(guān)物質(zhì)

    (1)色譜條件。色譜柱:Agilent Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5 ?m);流動(dòng)相:A相為2‰三乙胺緩沖液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.8)-乙腈(55 ∶ 45,V/V),B相為0.2%三乙胺緩沖液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.8)-乙腈(20 ∶ 80,V/V),梯度洗脫;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:10 ?L。梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

    表2 反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)的梯度洗脫程序

    (2)供試品溶液的制備。精密稱(chēng)取非達(dá)霉素粗品適量,用乙腈定容并稀釋制成每1 mL中約含0.5 mg非達(dá)霉素的溶液,即得。

    (3)非達(dá)霉素粗品分析。取“2.1.3(3)”項(xiàng)下非達(dá)霉素粗品供試品溶液適量,按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,記錄色譜圖,詳見(jiàn)圖4。

    由圖4可見(jiàn),非達(dá)霉素粗品在反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)下,可檢出非達(dá)霉素雜質(zhì)A、B、C、D、E、F、G、H、I、FR1、FR2共計(jì)11個(gè)雜質(zhì),與前2種色譜系統(tǒng)比較,該色譜系統(tǒng)不僅檢出雜質(zhì)個(gè)數(shù)更多,而且雜質(zhì)分離效果更好、靈敏度更高。因此,本研究選擇反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)對(duì)非達(dá)霉素有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查。

    2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查方法的建立

    2.2.1 溶液的制備

    (1)系統(tǒng)適用性溶液。分別取非達(dá)霉素對(duì)照品及雜質(zhì)C(用于考察其與主峰的分離情況)適量,用乙腈溶解稀釋制成質(zhì)量濃度均約為2.5 μg/mL的混合溶液,作為系統(tǒng)適用性溶液。

    (2)供試品溶液。取非達(dá)霉素精粉適量,精密稱(chēng)定,加乙腈溶解并稀釋制成每1 mL中約含0.5 mg非達(dá)霉素的溶液。

    (3)對(duì)照溶液。精密量取“2.2.1(2)項(xiàng)下”供試品溶液1.0 mL,置于200 mL量瓶中,用乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照溶液。

    2.2.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

    (1)酸破壞樣品溶液。取非達(dá)霉素精粉(批號(hào):20160801,下同)25 mg,置于50 mL量瓶中,加1 mol/L 鹽酸溶液5 mL,放置15 min后,加1 mol/L 氫氧化鈉溶液5 mL中和,再加乙腈溶解,定容,搖勻,即得。

    (2)堿破壞樣品溶液。取非達(dá)霉素精粉25 mg,置于50 mL量瓶中,加0.01 mol/L 氫氧化鈉溶液1 mL,放置15 min后,加0.01 mol/L 鹽酸溶液1 mL中和,再加乙腈溶解,定容,搖勻,即得。

    (3)高溫破壞樣品溶液。取非達(dá)霉素精粉適量,置于干燥坩鍋中,放酒精燈上(外焰溫度400~500 ℃)翻炒1 min左右,至顏色變淡黃后取出放冷,取25 mg,置于50 mL量瓶中,加乙腈溶解,定容,搖勻,即得。

    (4)氧化破壞樣品溶液。取非達(dá)霉素精粉25 mg,置于50 mL量瓶中,加30%過(guò)氧化氫溶液3 mL,于95 ℃水浴放置40 min,放冷,加乙腈溶解,定容,搖勻,即得。

    (5)光照破壞樣品溶液。取非達(dá)霉素精粉適量,置于強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱[(4 500±500) lx]照射10 d后,取出放冷,取25 mg,置于50 mL量瓶中,加乙腈溶解,定容,搖勻,即得。

    取“2.2.1(2)”項(xiàng)下供試品溶液和“2.2.2(1)~(5)”項(xiàng)下酸破壞、堿破壞、高溫破壞、氧化破壞、光照破壞樣品溶液各10 μL,按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖。結(jié)果,非達(dá)霉素精粉在各破壞條件下均有不同程度的降解,降解產(chǎn)物與主峰以及雜質(zhì)峰間均能達(dá)到基線分離,提示本方法的專(zhuān)屬性較強(qiáng)。6種溶液的色譜圖見(jiàn)圖5(注:圖中RRT表示未知降解產(chǎn)物峰以主峰為基準(zhǔn)的相對(duì)保留時(shí)間)。

    2.2.3 檢測(cè)限與定量限考察

    將非達(dá)霉素精粉供試品溶液用乙腈適當(dāng)稀釋后,按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積。當(dāng)信噪比為3 ∶ 1時(shí)得檢測(cè)限;當(dāng)信噪比為10 ∶ 1時(shí)得定量限。結(jié)果,非達(dá)霉素的檢測(cè)限為0.05 ng,定量限為0.15 ng。

    2.2.4 線性關(guān)系考察

    取非達(dá)霉素對(duì)照品約50 mg,置于50 mL量瓶中,加乙腈溶解定容,然后逐級(jí)稀釋為0.5、0.8、1.0、1.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL的溶液,振蕩搖勻,按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖。以非達(dá)霉素質(zhì)量濃度(x,μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析。結(jié)果,非達(dá)霉素回歸方程為y=25 258.015 9x+238.201 9(R2=0.999 9),檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.5~20.0 μg/mL。

    2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

    精密稱(chēng)取非達(dá)霉素精粉約25 mg,平行稱(chēng)定6份,按“2.2.1(2)”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,代入回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果,非達(dá)霉素含量的RSD為1.8%(n=6),表明該方法重復(fù)性良好。

    2.2.6 中間精密度試驗(yàn)

    由不同分析人員使用不同儀器,按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定同一供試品溶液6次,記錄峰面積,代入回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果,非達(dá)霉素含量的RSD為3.1%(n=6),表明該方法中間精密度良好。

    2.2.7 回收率試驗(yàn)

    精密稱(chēng)取非達(dá)霉素對(duì)照品9份,各約25 mg,置于50 mL量瓶中,用乙腈溶解并稀釋至刻度,振蕩搖勻,再分別稀釋成0.1%、0.2%、0.3%濃度(非達(dá)霉素原料藥的雜質(zhì)限度是0.5%,但多批樣品檢測(cè)的雜質(zhì)限度均在0.2%左右,故以0.2%作為中間濃度)的溶液各3份,作為供試品溶液。按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

    2.2.8 非達(dá)霉素有關(guān)物質(zhì)檢查

    取非達(dá)霉素精粉3批,按“2.2.1(2)”“2.2.1(3)”項(xiàng)下方法制備供試品溶液和對(duì)照溶液,按“2.1.3(1)”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積,并按不加校正因子的主成分自身對(duì)照法計(jì)算各雜質(zhì)(其中雜質(zhì)C、E為已知結(jié)構(gòu)的雜質(zhì))的含量。有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果見(jiàn)表4。

    表4 樣品中有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果(%)

    3 討論

    3.1 色譜系統(tǒng)及檢測(cè)器的選擇

    HPLC法為藥物分析中供試品有關(guān)物質(zhì)檢查的常用方法,常用的有反相色譜系統(tǒng)和正相色譜系統(tǒng)。反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑,常用洗脫劑為乙腈、甲醇等;正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑,常用洗脫劑為正己烷、異丙醇、無(wú)水乙醇等[17-18]。HPLC法中最常用的檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器,而蒸發(fā)光散射檢測(cè)器為通用型檢測(cè)器,對(duì)所有化合物均有響應(yīng)。

    本研究比較了正相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng)、反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)對(duì)非達(dá)霉素有關(guān)物質(zhì)的檢出能力,發(fā)現(xiàn)在采用反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)檢測(cè)時(shí),其靈敏度高于反相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜系統(tǒng),可檢出的雜質(zhì)種類(lèi)更多,且非達(dá)霉素峰與各雜質(zhì)峰的分離最好,專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高。因此,選擇專(zhuān)屬性更好、靈敏度更高的反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)對(duì)非達(dá)霉素有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查。

    3.2 色譜條件選擇

    3.2.1 流動(dòng)相pH選擇

    在反相-紫外檢測(cè)器色譜系統(tǒng)中,筆者使用三乙胺、磷酸制備緩沖液調(diào)節(jié)pH,結(jié)果顯示,當(dāng)pH為4.5時(shí),主峰后僅能分離出5個(gè)雜質(zhì)峰,有1個(gè)雜質(zhì)峰不能分離;當(dāng)pH為3.0時(shí),分離效果較好,但主峰后雜質(zhì)峰的分離比略差,且色譜條件酸度較大,易損害色譜柱壽命;當(dāng)pH為3.8時(shí),分離情況好,主峰后各雜質(zhì)峰均能有效分離,滿(mǎn)足檢查要求。因此,將pH為3.8定為本色譜條件下最佳pH條件。

    3.2.2 流動(dòng)相中三乙胺緩沖液濃度選擇

    在前期試驗(yàn)中,流動(dòng)相中三乙胺緩沖液濃度分別選擇了0.1%、0.2%和0.5%的3種濃度進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)濃度為0.2%時(shí)目標(biāo)物質(zhì)分離效果最好,出峰穩(wěn)定且峰形尖銳,故選擇三乙胺緩沖液濃度為0.2%。

    綜上所述,本研究建立的非達(dá)霉素原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢查方法出峰快、峰形好、分離雜質(zhì)多,且專(zhuān)屬性好,適用于非達(dá)霉素原料藥中的有關(guān)物質(zhì)檢查。

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    (收稿日期:2019-08-21 修回日期:2019-10-24)

    (編輯:劉 萍)

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