高效液相色譜法應(yīng)用中常見問題與處理

包東東+努爾古麗·買買提

摘 要：文章針對(duì)HPLC使用常見故障進(jìn)行了全面的分析，如輸液泵、單向閥、色譜柱、檢測器的常見故障，并總結(jié)日常工作實(shí)際，提出一些個(gè)人的做法和解決對(duì)策，以便使用者能及時(shí)注意所述問題，做到有問題及時(shí)解決。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜 色譜柱 檢測器 問題及對(duì)策

高效液相色譜（HPLC）作為一種分離技術(shù)和方法，目前已經(jīng)發(fā)展到一個(gè)全新的階段。高精度的輸液泵，應(yīng)用廣泛的色譜分離柱，低噪音、高靈敏度的各種檢測器和功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn)，都推動(dòng)了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應(yīng)用廣泛的優(yōu)點(diǎn)倍受儀器分析工作者的青睞，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等領(lǐng)域。本人從事液相色譜分析工作十年，應(yīng)用HPLC技術(shù)在農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、色素、防腐劑測定等實(shí)際工作中，積累了許多的方法和經(jīng)驗(yàn)，在這里與大家交流，希望能對(duì)同行們有所幫助和借鑒，共同促進(jìn)液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展[1]。

1、對(duì)流動(dòng)相的要求

1.1應(yīng)使用色譜純的液體試劑配制流動(dòng)相，固體試劑至少使用優(yōu)級(jí)純。流動(dòng)相配制后應(yīng)立即使用，時(shí)間久了（超過2天），不宜再用；特別是加有緩沖鹽的流動(dòng)相，過久的貯存會(huì)導(dǎo)致其內(nèi)部生長肉眼看不見的細(xì)菌，若仍然使用它，大量的菌絲體就會(huì)附著在色譜柱內(nèi)，將大大縮短色譜柱的使用壽命。

1.2高純水也應(yīng)該使用新鮮制備的，否則回出現(xiàn)同樣的問題。高純水中若存在有機(jī)物雜質(zhì)，當(dāng)時(shí)對(duì)檢測好像也沒有什么影響，當(dāng)日積月累的雜質(zhì)吸附達(dá)到飽和時(shí)，在以后某次檢

測中就有可能發(fā)生吸附雜質(zhì)的脫落，引起“鬼峰”現(xiàn)象，如果“鬼峰”疊加到了組分的吸收峰上面，就會(huì)出現(xiàn)不準(zhǔn)確的檢測數(shù)據(jù)。

1.3流動(dòng)相在使用前均應(yīng)進(jìn)行脫氣處理，避免溶解在其中的氣體影響基線的穩(wěn)定性和檢測的靈敏度。

2、輸液泵的常見故障及對(duì)策

2.1液相色譜儀壓力過低壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。

2.2液相色譜儀壓力過高這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。

（1）首先斷開真空泵的入口處，此時(shí)PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查。

（2）打開Purge閥，使流動(dòng)相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100PSI以下，過濾白頭正常，在檢查。

（3）把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常；如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常。

3、色譜分離柱的使用與維護(hù)

色譜柱加保護(hù)柱（預(yù)柱）是保護(hù)分離柱的有效辦法。保護(hù)柱是根內(nèi)裝填料與分離柱性質(zhì)相近的短柱，接在分離柱之前，或代替流路過濾器。保護(hù)柱的作用是收集和阻塞分離柱口的化學(xué)垃圾，這些垃圾如果直接進(jìn)入分離柱會(huì)逐漸堆積在柱頭，最終降低柱效能。保護(hù)柱是消耗品，如分析含糖量較高的樣品，一般分析80個(gè)樣品后需更換新柱芯。

4、檢測器的使用與維護(hù)

當(dāng)流動(dòng)相用了緩沖鹽更換流動(dòng)相又不當(dāng)時(shí)，常會(huì)在檢測器管路中產(chǎn)生沉淀，可先用5倍柱積的水沖洗，再用10倍柱積的強(qiáng)溶劑（如乙腈）流過，再用50倍的柱體積的異丙醇沖洗，最后換上反相流動(dòng)相平衡。當(dāng)檢測器管路堵塞時(shí)，可表現(xiàn)為柱壓升高，此時(shí)，應(yīng)和柱頭堵塞相區(qū)分?？蓴嚅_柱子，直接接檢測器，如泵壓仍較高，可判斷壓力升高是由于檢測器管道堵塞造成。檢測器進(jìn)口是常發(fā)生阻塞的地方，正向沖洗效果常不明顯，我們的經(jīng)驗(yàn)是將檢測器進(jìn)出口管道對(duì)調(diào)，用6mol/L硝酸溶液反沖檢測器，能很快將阻塞沖開，但要注意用低流速?zèng)_洗，觀察壓力變化[2]。

檢測池阻塞和污染多見紫外檢測器。池阻塞也可用上述方法反沖，一般都能疏通。通常，池阻塞的故障比較少見，而池污染常發(fā)生，如不干凈的樣品在池窗上積聚等，都會(huì)造成檢測池污染。表現(xiàn)為基線噪音增大，儀器靈敏度下降?？捎米⑸淦饕来嘶爻楫惐?、6mol/L硝酸，要小心操作，將池中的污物沖洗干凈，最后用100ml純水正向沖洗檢測池。反向沖洗還可防止池滲漏。

以上只是對(duì)液相色譜常見的問題進(jìn)行了分析，當(dāng)然在實(shí)際應(yīng)用中還會(huì)遇到更多的問題，在排除故障時(shí)要遵守以下原則：一次只改變一個(gè)因素，確定假定因素與問題之間的聯(lián)系；如果通過更換組件來排查故障時(shí)要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費(fèi)；養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣，這是成功進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵?？傊?，在使用高效液相色譜儀時(shí)一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)。

參考文獻(xiàn)

[1]靳建中.如何正確使用高效液相色譜儀[J].內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟(jì)，2006，20：9～10.

[2]孫毓慶，王延琮，方群等.現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2005： 253-254.