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    傷寒沙門菌非編碼RNA ArpH表達(dá)特征及功能初探

    2020-06-18 01:10:00熊昌艷李雪嬌黃新祥
    關(guān)鍵詞:沙門基因組質(zhì)粒

    熊昌艷,李雪嬌,黃新祥

    (江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院,江蘇 鎮(zhèn)江 212013)

    傷寒沙門菌(Salmonellaentericaserovar Typhi,S.Typhi)是一種重要的革蘭陰性人類病原菌,可通過多種毒力因子作用,引起輕度腹瀉甚至是嚴(yán)重的全身性感染.沙門氏菌毒力基因的集中區(qū)域被稱為沙門氏菌致病島(Salmonellapathogenicityislands,SPIs),可位于細(xì)菌染色體或質(zhì)粒上.S.Typhi與宿主能產(chǎn)生交互作用,有些毒力基因能保護(hù)細(xì)菌免受宿主免疫系統(tǒng)的攻擊[1-2].

    病原菌在感染過程中通過調(diào)控其毒力基因的表達(dá),可以快速適應(yīng)環(huán)境的變化.許多非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)通過堿基配對(duì)相互作用形成與DNA或蛋白質(zhì)的復(fù)合物,參與復(fù)雜的基因表達(dá)調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò).以前,許多ncRNA被認(rèn)為是不參與蛋白質(zhì)編碼的轉(zhuǎn)錄噪聲,然而近年研究已經(jīng)證實(shí),大多數(shù)ncRNA可通過調(diào)節(jié)細(xì)菌中許多基因的表達(dá)來發(fā)揮生理作用,包括ABC轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)、群體感應(yīng)、氧化應(yīng)激、耐酸性能和毒力等[3-4].

    前期本實(shí)驗(yàn)室對(duì)傷寒沙門菌野生株進(jìn)行了全基因組序列分析,獲得了基因組結(jié)構(gòu)精細(xì)圖.通過轉(zhuǎn)錄組序列分析發(fā)現(xiàn)有大量ncRNA序列位于一千余個(gè)基因的反義鏈上,有的拼接長度甚至超過了1 000 nt.ArpH就是新發(fā)現(xiàn)的ncRNA之一,前期研究確定其分子全長為3 508 nt,位于基因rpoH對(duì)側(cè)鏈,5′端位于yhhk起始密碼子上游411 nt,3′端位于rpoH起始密碼子上游238 nt,與rpoH完全重疊,為rpoH的反義RNA,因此命名為ArpH.研究發(fā)現(xiàn)ArpH高表達(dá)后能提高rpoHmRNA表達(dá)水平[5].RpoH是由rpoH基因編碼的σ32(σH),現(xiàn)已知腸道細(xì)菌的σ因子之間存在相互作用,如RpoE可促進(jìn)RpoH和RpoS的表達(dá)[6-7].RpoH能激活小RNA的伴侶分子基因hfq的表達(dá),而Hfq也可調(diào)節(jié)RpoH介導(dǎo)的環(huán)境應(yīng)答反應(yīng).在沙門菌中也發(fā)現(xiàn)RpoH和RpoE可促進(jìn)抗氧化作用[8].高滲應(yīng)激可激活大腸桿菌和鼠傷寒沙門氏菌中依賴σE和σS的基因表達(dá).σE是一種啟動(dòng)一系列基因轉(zhuǎn)錄并對(duì)應(yīng)激作出反應(yīng)的細(xì)胞外因子.而σS是極端條件下細(xì)菌生存和發(fā)揮毒力所需的主要調(diào)節(jié)因子[7].另外,原核生物體內(nèi)ncRNA的含量除了與其表達(dá)生成有關(guān),與其降解也有重要關(guān)系.細(xì)菌體內(nèi)存在多種RNase來降解RNA.本文通過研究σ因子和RNase對(duì)ArpH表達(dá)的影響,并結(jié)合全基因組芯片的結(jié)果,初步探討ArpH對(duì)細(xì)菌侵襲力和胞內(nèi)生存力的影響.

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株和質(zhì)粒 菌株:S.Typhi 野生株GIFU 10007 (WT),σE缺陷株 (ΔrpoE)[6],σS缺陷株 (ΔrpoS)[7],RNase III缺陷株(ΔRNase III)[9],RNase G缺陷株(ΔRNase G)[9],RNase E缺陷株(ΔRNase E)[9]由本實(shí)驗(yàn)室保存,缺陷株使用自殺質(zhì)粒法制備.arpH缺陷株 (ΔarpH),WT-pBAD (WT含pBAD/Myc-hisA),WT-pBAD-arpH(WT含pBAD-arpH) 由本實(shí)驗(yàn)室制備[5].

    質(zhì)粒:pBAD/Myc-hisA (Ampr)購自Invitrogen公司,pBAD-arpH(pBAD/Myc-hisA連接了arpH序列) 由本實(shí)驗(yàn)室制備[5].

    1.1.2 主要試劑DNA聚合酶Taq、T4 DNA連接酶(Takara公司);質(zhì)粒提取試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒(AXYGEN公司);RNA提取試劑盒 (QIAGEN公司);PrimeScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 (Takara公司);Cy3-dCTP、Cy5-dCTP(Amersham公司);傷寒沙門菌基因組芯片由本實(shí)驗(yàn)室制備[10].

    1.1.3 主要儀器電穿孔系統(tǒng)Gene Pulsero Ⅱ(Bio-Rad公司);PCR儀2720 Thermal Cycler (ABI公司);實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀CFX96TMReal-Time System (Bio-Rad公司);基因芯片雜交儀hydridiser HB-3d(Roller-Blot公司);基因芯片掃描分析系統(tǒng)Genepix personal 4100A (Axon Instruments公司);CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱MODEL 3111 S/N 305713-7757(Thermo公司).

    1.1.4 引物利用Oligo6軟件,根據(jù)arpH的核苷酸序列設(shè)計(jì)qRT-PCR特異性引物ArpH-qF和ArpH-qR.5S rRNA為內(nèi)參.qRT-PCR引物見表1.

    表1 本研究中所用引物序列Tab.1 The sequence of primers used in this study

    1.2 方法

    1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)及RNA提取 將單克隆細(xì)菌于LB液體37 ℃過夜培養(yǎng),按1∶100轉(zhuǎn)接于相同條件LB液體培養(yǎng)基,需要時(shí)加入0.2%L-阿拉伯糖誘導(dǎo)30 min.采用TRIzol法提取細(xì)菌總RNA后,用DNase I(RNase free)去除混雜的少量DNA,酚仿-乙醇法純化.取適量RNA用1.2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA質(zhì)量.

    1.2.2 qRT-PCR分析 各取純化的總RNA 4 μg,用PrimeScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 (Takara公司)分別反轉(zhuǎn)錄生成cDNA后,再進(jìn)行qRT-PCR.內(nèi)參基因?yàn)?S rRNA,用于qRT-PCR分析的引物序列如表1所示.每次實(shí)驗(yàn)均按照說明書進(jìn)行3次.

    1.2.3 全基因組芯片檢測 將WT-pBAD、WT-pBAD-ArpH培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期 (A600為0.4) 后加入2 g·L-1L-阿拉伯糖誘導(dǎo)30 min,然后在氧應(yīng)激下(H2O25 mmol·L-1)的LB中37 ℃振蕩(250 r·min-1)培養(yǎng)4 h,總RNA用RNA提取試劑盒提取.取上述菌株的總RNA各20 μg進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,用隨機(jī)引物N9、傷寒沙門菌GNP引物和PrimeScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,反轉(zhuǎn)錄生成cDNAs的同時(shí)摻入Cy3-dCTP或Cy5-dCTP,將cDNAs進(jìn)行相互配對(duì)并標(biāo)記,經(jīng)提純后與S.Typhi基因組DNA芯片進(jìn)行雜交,清洗后用雙通道熒光掃描,將熒光信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換并經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化處理后行統(tǒng)計(jì)分析[11].

    1.2.4 HeLa細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) 用含10%小牛血清的RIPM-1640于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)HeLa細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)前24 h按每孔2×105接種于24孔.將S.Typhi野生株(WT)、ArpH缺陷變異株(ΔarpH)、空質(zhì)粒對(duì)照株(WT-pBAD)和ArpH高表達(dá)菌株(WT-pBAD-ArpH)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期,按20∶1的細(xì)菌與細(xì)胞比(multiplicity of infection,MOI)分別加入24孔板,培養(yǎng)90 min(37 ℃、5% CO2),以預(yù)熱的PBS洗細(xì)胞3次后,加入0.1% PBS-DOC作用10 min破膜,將破膜液中的細(xì)菌收集起來涂抹于LB平板,經(jīng)37 ℃溫箱培養(yǎng)12 h后計(jì)算菌落數(shù)(t0);平行板每孔再加入終濃度為100 μg·mL-1的慶大霉素,再培養(yǎng)(37 ℃,5% CO2),讓細(xì)菌侵襲HeLa細(xì)胞,90 min后加入1% Triton X-100作用10 min破膜,收集破膜液中的細(xì)菌,涂LB平板,37 ℃過夜培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落數(shù)(t90).以菌落數(shù)t90/t0的比值作為細(xì)菌的侵襲力指標(biāo).

    1.2.5 巨噬細(xì)胞內(nèi)增殖試驗(yàn) 將THP-1單核細(xì)胞用含10%小牛血清的RIPM-1640培養(yǎng)基于24孔板培養(yǎng)(37 ℃,5% CO2),加100 ng·mL-1PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)培養(yǎng)24 h,誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞.將WT、ΔarpH及WT-pBAD、WT-pBAD-ArpH培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期,WT-pBAD、WT-pBAD-ArpH加入0.2% L-阿拉伯糖誘導(dǎo)1 h,按細(xì)菌與細(xì)胞比20∶1,分別加入含巨噬細(xì)胞的24孔板,感染30 min后,每孔再加入慶大霉素(終濃度100 μg·mL-1)1 h以殺死胞外菌,吸取上清,用PBS將每孔吹洗3次.一部分孔加入1 mL 0.5%(V/V)Triton裂解細(xì)胞,反應(yīng)10 min后將裂解物涂于LB平板,37 ℃過夜培養(yǎng)后的單克隆數(shù)用t0表示基礎(chǔ)細(xì)菌吞噬水平;另一部分孔細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)12或24 h后同樣以1 mL 0.5%(V/V)Triton裂解細(xì)胞,過夜培養(yǎng)后計(jì)算克隆數(shù)代表胞內(nèi)細(xì)菌增殖水平(以t12或t24表示).細(xì)菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)生存12 h及24 h的增殖力分別以t12/t0及t24/t0表示.

    1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值.利用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間差異采用方差分析,P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

    2 結(jié)果

    2.1 RpoE和RpoS在不同應(yīng)激條件下對(duì)ArpH表達(dá)的影響

    應(yīng)用qRT-PCR分析野生株和rpoE、rpoS缺陷株在等滲非應(yīng)激條件和環(huán)境酸、氧和高滲應(yīng)激下ArpH的mRNA表達(dá)水平.結(jié)果顯示(圖1),ArpH表達(dá)在酸應(yīng)激下明顯下降,在氧和高滲應(yīng)激下略有增高.在rpoE缺陷株中,ArpH的表達(dá)水平在各種條件下均有明顯下降.在rpoS缺陷株中,ArpH表達(dá)水平在氧應(yīng)激時(shí)下降較為明顯.

    No Stress:無應(yīng)激;HCl:酸應(yīng)激;H2O2:氧應(yīng)激;NaCl:高滲應(yīng)激.*為P<0.05,**為P<0.01圖1 qRT-PCR檢測在WT、ΔrpoE和ΔrpoS中不同應(yīng)激下ArpH的mRNA表達(dá)水平Fig.1 The mRNAexpression of ArpH in WT and mutants at different stresses

    2.2 RNase III、RNase G和RNase E對(duì)ArpH降解的影響

    S.Typhi野生株、RNase III、RNase G、RNase E缺陷變異株培養(yǎng)至A600=0.8后,經(jīng)利福平處理0、5、10、20 min,RNase III缺陷株中ArpH水平明顯高于野生株,而RNase G和RNase E這兩種RNA酶缺陷株中ArpH水平無明顯差異(圖2).

    圖2 WT、RNase III、RNase G和RNase E缺陷株中不同時(shí)間的ArpH水平(**為P<0.01)Fig.2 The ArpH levels at different times in WT,RNase III,RNase G and RNase E deficient strains

    2.3 ArpH高表達(dá)菌株氧應(yīng)激下的基因表達(dá)譜分析

    將空質(zhì)粒對(duì)照株(WT-pBAD)和ArpH高表達(dá)菌株(WT-pBAD-arpH)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期(A600為0.4)后加入質(zhì)量濃度為2 g·L-1的阿拉伯糖誘導(dǎo)30 min,然后在氧應(yīng)激下的繼續(xù)培養(yǎng)4 h.提取RNA后,經(jīng)熒光標(biāo)記、逆轉(zhuǎn)錄、芯片雜交等步驟后進(jìn)行全基因組芯片分析.數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示(表2),和空質(zhì)粒對(duì)照株比較,ArpH高表達(dá)菌株中基因表達(dá)有顯著差異的基因共113個(gè),包括89個(gè)上調(diào)基因和24個(gè)下調(diào)基因.上調(diào)的基因主要涉及鞭毛相關(guān)基因flhDC、fliACJHLSZ和鞭毛基體修飾蛋白基因flgBCDEFHIJKL,超氧化物歧化酶sodB等.下調(diào)的基因主要涉及致病島1效應(yīng)蛋白prgHIK、sipACD,侵襲相關(guān)基因iagA、invAG、tviACDE、spaIKMN和營養(yǎng)代謝相關(guān)基因astB、msyB和glpD等.

    表2 空質(zhì)粒對(duì)照株和ArpH高表達(dá)菌株在氧應(yīng)激下的部分差異表達(dá)基因Tab.2 Differential genes in control strain and ArpH overexpressing strain of S.Typhi induced by H2O2

    續(xù)表2

    2.4 ArpH對(duì)細(xì)菌侵襲HeLa細(xì)胞活性的影響

    為了探討ArpH對(duì)傷寒沙門菌侵襲上皮細(xì)胞的能力,應(yīng)用S.Typhi野生株(WT)、ArpH缺陷變異株(ΔarpH)、空質(zhì)粒對(duì)照株(WT-pBAD)和ArpH高表達(dá)菌株(WT-pBAD-arpH)對(duì)HeLa細(xì)胞進(jìn)行侵襲實(shí)驗(yàn)(圖3).當(dāng)arpH基因缺失后,缺陷株的侵襲水平明顯強(qiáng)于野生株,約為野生株的1.5倍,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).與空質(zhì)粒對(duì)照株相比,ArpH高表達(dá)菌株的侵襲能力下降且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

    圖3 ArpH各菌株對(duì)HeLa上皮細(xì)胞侵襲力的影響(*為P<0.05)Fig.3 Invasion of HeLa cells by wild-type,ΔarpH,and WT-pBAD-arpH strains

    2.5 ArpH對(duì)細(xì)菌在THP-1胞內(nèi)生存力的影響

    為了觀察ArpH是否會(huì)對(duì)細(xì)菌在THP-1細(xì)胞內(nèi)生存產(chǎn)生影響,應(yīng)用WT、ΔarpH、WT-pBAD和WT-pBAD-arpH菌株進(jìn)行THP-1細(xì)胞內(nèi)生存實(shí)驗(yàn).與時(shí)間零點(diǎn)的胞內(nèi)細(xì)菌初始水平相比,野生株、空質(zhì)粒對(duì)照株在感染12 h和24 h后的細(xì)菌水平均達(dá)到3倍以上,且此兩種菌株的胞內(nèi)增殖趨勢沒有明顯差異.然而,ArpH缺陷變異株在感染12 h和24 h后,其胞內(nèi)細(xì)菌水平則分別為初始水平的1.9 ± 0.3倍和1.2 ± 0.2倍,ArpH高表達(dá)菌株在感染12 h和24 h后,其胞內(nèi)細(xì)菌水平則分別為初始水平的5.1 ± 0.5倍和3.7 ± 0.3倍(圖4).另外,細(xì)菌在感染24 h后的胞內(nèi)水平均較12 h有所下降,可能是由于細(xì)菌的感染導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡并裂解,其胞內(nèi)的細(xì)菌被釋放到胞外被慶大霉素殺死.

    圖4 傷寒沙門菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)的生存力比較(**為P<0.01)Fig.4 The intracellular survival ability comparison of S.Typhi in macrophages

    3 討論

    ncRNA的功能是目前ncRNA研究領(lǐng)域的熱點(diǎn).ncRNA可以在DNA水平、mRNA水平和蛋白質(zhì)水平上發(fā)揮作用[12].現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)ncRNA具有廣泛的生物學(xué)功能,包括作為信號(hào)分子、分子誘餌作用、引導(dǎo)功能和參與組成染色質(zhì)支架等4個(gè)方面[13].某些ncRNA的生成具有組織和時(shí)間特異性,它們的表達(dá)是細(xì)胞針對(duì)特定刺激(如細(xì)胞應(yīng)激和溫度等)引起反應(yīng)的產(chǎn)物[14],這些ncRNA可作為信號(hào)分子引起細(xì)胞功能的變化.在此,本文初步探討了前期發(fā)現(xiàn)的ncRNA ArpH的部分表達(dá)特征和功能.

    細(xì)菌屬原核生物,其基因表達(dá)均是由σ因子介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄起始[15].許多ncRNA表達(dá)受應(yīng)激反應(yīng)σ因子的正向調(diào)節(jié),如RpoE和RpoS、雙組分系統(tǒng)PhoP/Q[16].ncRNA通過作用于自己的調(diào)節(jié)子來進(jìn)行反饋調(diào)控[17].腸道細(xì)菌在高滲應(yīng)激或穩(wěn)態(tài)期條件下,可以誘導(dǎo)產(chǎn)生σE、σH和σS.σH是大腸桿菌中首先被發(fā)現(xiàn)的σ因子.rpoH有4個(gè)啟動(dòng)子,其中一個(gè)啟動(dòng)子rpoH3P可被σE激活[18].本研究模擬體內(nèi)酸、氧和高滲應(yīng)激,檢測了σ因子對(duì)ArpH表達(dá)的影響,結(jié)果顯示在rpoE缺陷株中,ArpH的表達(dá)在各種應(yīng)激條件下均有明顯下降.ArpH作為rpoH對(duì)側(cè)鏈的反義RNA[5],提示ArpH的轉(zhuǎn)錄可能通過RpoE激活RpoH而介導(dǎo).hfq編碼的蛋白是一種能與RNA結(jié)合的調(diào)節(jié)性蛋白,而σH能激活hfq的表達(dá).反之,Hfq也可調(diào)節(jié)σH介導(dǎo)的胞質(zhì)應(yīng)答反應(yīng).同時(shí),Hfq對(duì)于rpoS的翻譯也起決定作用.在沙門菌中也發(fā)現(xiàn),通過增加σS的水平,σH和σE可促進(jìn)抗氧化作用[19].σS主要與穩(wěn)態(tài)期和應(yīng)激條件下基因的表達(dá)相關(guān).前期研究顯示ArpH在對(duì)數(shù)晚期至穩(wěn)態(tài)期的表達(dá)量最高[5],表明ArpH的表達(dá)有可能受到σS的調(diào)控.本研究在rpoS缺陷株中發(fā)現(xiàn)ArpH的表達(dá)水平在氧應(yīng)激時(shí)下降較為明顯,這可能是由于σS表達(dá)的降低引起σH表達(dá)水平的下降,從而導(dǎo)致σH抗氧化作用的減弱,位于rpoH對(duì)側(cè)鏈的反義RNA ArpH也隨之下降.這些調(diào)控機(jī)制的深入研究可能為控制傷寒沙門菌感染提供有效的靶向基因.

    RNase III是一種作用于雙鏈 RNA 的核糖核酸內(nèi)切酶,對(duì) ncRNA 和靶 mRNA 配對(duì)的雙鏈區(qū)進(jìn)行切割,可以同時(shí)降解 ncRNA 和其配對(duì)的靶 mRNA.而RNase G和RNase E一樣,主要降解單鏈,并且多水解5′末端含有單磷酸基團(tuán)的 RNA 和富含 AU 堿基的區(qū)域[20-21].ncRNA能保護(hù)靶基因mRNA來對(duì)抗RNase E的降解[22].本研究分析了RNase III,RNase G和RNase E對(duì)ArpH的降解特性.結(jié)果顯示這些RNA酶缺陷株經(jīng)利福平處理后,RNase III缺陷株中ArpH水平明顯高于野生株,而RNase G和RNase E這兩種RNA酶缺陷株中ArpH水平無明顯差異,以上表明RNase III可能是ArpH的主要降解酶.ArpH主要以ArpH/RpoH雙鏈形式被降解,提示ArpH可能參與調(diào)控RpoH mRNA的穩(wěn)定性來影響靶向mRNA的表達(dá).

    基因芯片技術(shù)可以對(duì)一些ncRNA的主要靶基因進(jìn)行鑒定[23].前期研究發(fā)現(xiàn)ArpH的高表達(dá)能促進(jìn)S.Typhi在氧應(yīng)激條件下的生長[5].因此,本研究在氧應(yīng)激下對(duì)ArpH高表達(dá)株應(yīng)用全基因組芯片技術(shù)進(jìn)行了基因表達(dá)譜分析,結(jié)果顯示超氧化物歧化酶sodB基因表達(dá)上調(diào)明顯.而sodB對(duì)S.Typhi在巨噬細(xì)胞中的生存力具有重要作用.這進(jìn)一步驗(yàn)證了ArpH直接或間接調(diào)節(jié)氧應(yīng)激環(huán)境下的某些基因表達(dá).進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)觀察了ArpH對(duì)S.Typhi在THP-1細(xì)胞內(nèi)生存力的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ArpH可以提高S.Typhi在THP-1的胞內(nèi)生存力,可能是影響S.Typhi細(xì)胞內(nèi)生存的正向調(diào)節(jié)因子,提示ArpH可促進(jìn)S.Typhi抵抗氧化損傷[24-25].另外,下調(diào)基因中包括致病島1效應(yīng)蛋白prgHIK、sipACD,侵襲相關(guān)基因如iagA、invAG、tviACDE、spaIKMN等.這提示ArpH可能是影響傷寒沙門菌侵襲的負(fù)向調(diào)節(jié)因子.為此,本研究進(jìn)行了HeLa細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn).當(dāng)arpH基因缺失后,菌株的侵襲水平高于野生株,約為野生株的1.5倍.與空質(zhì)粒對(duì)照株相比,ArpH高表達(dá)株的侵襲能力下降,這表明ArpH可以減弱S.Typhi對(duì)上皮細(xì)胞的侵襲能力,可能是影響傷寒沙門菌侵襲的負(fù)向調(diào)節(jié)因子,這與芯片分析結(jié)果一致.ArpH高表達(dá)后能提高rpoHmRNA的表達(dá)水平[5].ArpH作為rpoH對(duì)側(cè)鏈的反義RNA,ArpH對(duì)rpoH表達(dá)的影響可能通過順式作用在轉(zhuǎn)錄后水平得以實(shí)現(xiàn).σH可介導(dǎo)沙門菌SPI-1表達(dá)的負(fù)向調(diào)控,從而影響沙門菌對(duì)細(xì)胞的侵襲作用.有研究表明,σH分別在轉(zhuǎn)錄前和轉(zhuǎn)錄水平上負(fù)向調(diào)節(jié)HilD和HilA這兩種沙門菌SPI-1特異性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子[26].因此,ArpH可能通過rpoH來間接調(diào)控鞭毛、侵襲等基因的表達(dá),其具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究.基因芯片還篩選到諸多涉及營養(yǎng)代謝等功能的基因發(fā)生了變化,ArpH對(duì)這些基因的調(diào)控機(jī)制尚待研究.

    本文探討了ArpH的轉(zhuǎn)錄和降解特性,進(jìn)而分析了ArpH對(duì)傷寒沙門菌侵襲力的影響和對(duì)胞內(nèi)生存力的作用,研究結(jié)果將增強(qiáng)對(duì)傷寒沙門菌在感染環(huán)境下的基因表達(dá)調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)和致病機(jī)制的認(rèn)識(shí),也為控制細(xì)菌感染提供了新的研究策略.

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