外周血T淋巴細(xì)胞亞群與乙型肝炎患者病情程度的關(guān)聯(lián)性探究

（河南省柘城縣人民醫(yī)院 輸血科，河南 商丘 476200）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是誘發(fā)乙型肝炎的嗜肝DNA 病毒，人體感染后可發(fā)展成為無癥狀病毒攜帶者或急慢性乙型肝炎患者，病情遷延難愈，長期病毒感染可進(jìn)展為肝癌或肝硬化等嚴(yán)重疾病［1］。目前，乙型肝炎發(fā)病機(jī)制尚不明確，有學(xué)者認(rèn)為，當(dāng)HBV 進(jìn)入機(jī)體后可誘發(fā)一系列免疫應(yīng)答反應(yīng)，而免疫應(yīng)答強(qiáng)弱與HBV 所致不同臨床結(jié)果緊密相關(guān)，并在免疫應(yīng)答反應(yīng)中細(xì)胞免疫最為重要［2］。據(jù)統(tǒng)計，成人、兒童、幼兒不同免疫應(yīng)答水平人群感染HBV 后分別存在5%、30%、95%的感染者發(fā)展成為慢性乙型肝炎，說明機(jī)體免疫成熟程度是HBV 持續(xù)感染相關(guān)重要因素之一［3］。外周血T 淋巴細(xì)胞為機(jī)體主要免疫細(xì)胞，其比例、數(shù)量可反映人體免疫水平。本研究為探究T 淋巴細(xì)胞亞群能否評估乙型肝炎患者病情程度及其在HBV 感染中的作用，對72 例乙型肝炎患者進(jìn)行外周血T 淋巴細(xì)胞亞群檢測與分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過，選取本院2018 年5 月至2019 年5 月接收的乙型肝炎患者72 例為肝炎組，其中輕度18 例，中度30 例，重度24 例，男39 例，女33 例；年齡21～65 歲，平均（44.10±8.20）歲。選取同期健康體檢者52 例為對照組，男30 例，女22 例；年齡19～64 歲，平均（43.25±7.87）歲。兩組年齡、性別等資料均衡可比（P＞0.05）。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 符合2015 年版《慢性乙型肝炎防治指南》［4］中乙型肝炎相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)臨床確診為乙型肝炎；簽署本研究知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 惡性腫瘤者；感染性疾病者；無法配合完成研究者；近期接受免疫調(diào)節(jié)、保肝、抗病毒等相關(guān)治療者；其他類型肝病者；自身免疫系統(tǒng)疾病者；凝血功能障礙者；血液系統(tǒng)疾病者；先天性自身免疫缺陷者。

1.3 外周血T 淋巴細(xì)胞亞群檢測方法

采集1.5 mL 晨空腹外周靜脈血，EDTA-2Na抗凝，利用流式細(xì)胞儀（型號：FACSVia，廠家：美國BD 公司）進(jìn)行熒光標(biāo)記抗體檢測，T 淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+）水平檢測采用單克隆抗體及組合：TC-CD3/FITC-CD4/PE-CD8，同型陰性對照：Tc-IgG2a/PE-IgG2a/FITC-IgG2a，檢測所用試劑及試劑盒購自上海酶聯(lián)生物，所有操作均按照試劑說明書嚴(yán)格執(zhí)行操作。

1.4 觀察指標(biāo)

①觀察不同病情程度乙型肝炎與對照組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+） 水平；②分析T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平與乙型肝炎病情程度相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平變化

肝炎組T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平低于對照組，肝炎組中度、重度CD4+/CD8+比值低于對照組（P＜0.05），且肝炎組T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平隨病情程度加重而逐漸遞減（P＜0.05），肝炎組重度CD4+/CD8+比值低于輕度者（P＜0.05），見表1。

表1 T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平變化 （）

表1 T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平變化 （）

注：1）與對照組相比，P＜0.05；2）與輕度相比，P＜0.05；3）與中度相比，P＜0.05。

2.2 T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平與乙型肝炎病情程度相關(guān)性

經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析，T淋巴細(xì)胞亞群CD3+水平與乙型肝炎病情程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.732，P＜0.001）；T 淋巴細(xì)胞亞群CD4+水平與乙型肝炎病情程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.598，P＜0.001）；T 淋巴細(xì)胞亞群CD8+水平與乙型肝炎病情程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.682，P＜0.001）。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，HBV 感染致病機(jī)理與免疫系統(tǒng)狀態(tài)密切相關(guān)［5］，HBV 侵入機(jī)體后所致免疫應(yīng)答反應(yīng)會造成肝臟病變，而在肝細(xì)胞損害中細(xì)胞免疫占據(jù)主導(dǎo)作用［6］。T 淋巴細(xì)胞亞群是機(jī)體主要免疫細(xì)胞之一，對抗原識別、激活能力及產(chǎn)生的相關(guān)趨化與調(diào)節(jié)因子均對病情程度及轉(zhuǎn)歸存在不同程度影響。T 淋巴細(xì)胞是介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要免疫細(xì)胞，T 淋巴細(xì)胞可分為若干亞群，機(jī)體正常情況下，細(xì)胞亞群間保持動態(tài)平衡狀態(tài)，是機(jī)體發(fā)揮正常免疫功能的基礎(chǔ)，各亞群間可相互制約、相互作用，共同參與免疫應(yīng)答反應(yīng)［7-8］。有研究指出，T 淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量、比例可反映機(jī)體免疫水平，其中CD3+、CD4+除在機(jī)體免疫應(yīng)答中具有輔助、誘導(dǎo)作用外，還可促進(jìn)淋巴因子分泌，開啟遲發(fā)性超敏反應(yīng)，激發(fā)巨噬細(xì)胞活化，產(chǎn)生肝細(xì)胞損傷效應(yīng)，而其水平下降、功能衰退可直接造成細(xì)胞免疫功能低下［9］。CD8+是一種重要免疫細(xì)胞，其產(chǎn)生依賴于CD4+細(xì)胞的存在，并對病毒感染肝細(xì)胞、相關(guān)病毒具有重要清除作用，同時CD4+細(xì)胞亞型可通過直接溶解病毒感染肝細(xì)胞而間接清除病毒，從而減輕肝臟病變程度［10］。本研究發(fā)現(xiàn)，肝炎組T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平低于對照組（P＜0.05），并隨病情程度加重而逐漸遞減，提示乙型肝炎病毒感染均存在不同程度的免疫功能低下，且病情越重免疫功能越弱。此外，CD4+/CD8+比值失衡是機(jī)體多種免疫病理改變、細(xì)胞免疫系統(tǒng)紊亂的重要標(biāo)志之一，CD4+淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，CD4+/CD8+比值隨之降低，而機(jī)體細(xì)胞免疫低下是造成HBV 持續(xù)感染重要因素之一［11］。本研究發(fā)現(xiàn)，不同病情程度乙型肝炎患者CD4+/CD8+比值呈下降趨勢，但缺乏一定規(guī)律，表明T 淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8+比值變化不能完全判定乙型肝炎病情程度。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平與乙型肝炎病情程度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），表明T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平越低，乙型肝炎病情越嚴(yán)重，可為臨床選擇合理治療方案提供循證依據(jù)。

綜上所述，外周血T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平與乙型肝炎病情程度呈負(fù)相關(guān)，而T 淋巴細(xì)胞亞群水平變化、免疫功能紊亂是乙型肝炎肝細(xì)胞受損、向慢性化轉(zhuǎn)變重要機(jī)制，增強(qiáng)T 淋巴細(xì)胞免疫、提高機(jī)體免疫應(yīng)答水平，對延緩或阻止病情進(jìn)展具有重要意義。