兩種生物藥劑對蘋果病害的室內(nèi)活性評價

白鵬華 馮友仁 劉寶生 谷希樹 胡瑞瑞 范金龍

摘 ? ?要：為評價2種生物殺菌劑對蘋果病害防控的廣譜性，本研究采用菌絲生長速率法測定了藥劑對蘋果輪紋病、炭疽病、干腐病和腐爛病的抑制效果。結(jié)果表明：3%中生菌素可濕性粉劑和0.3%四霉素水劑對4種蘋果病害均具有防治效果，其中3%中生菌素可濕性粉劑對干腐病菌和腐爛病菌有較強的抑菌活性，其EC50值分別為4.92和7.33 μg·mL-1;0.3%四霉素水劑對輪紋病菌、腐爛病菌和干腐病菌的EC50值分別為4.52，6.44和7.04 μg·mL-1。因此，3%中生菌素可濕性粉劑和0.3%四霉素水劑可作為蘋果園廣譜性生物源殺菌劑，可交替使用減少抗藥性。

關鍵詞：蘋果病害;中生菌素;四霉素;毒力測定

中圖分類號：S436.611; S482.7 ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ?DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.002.010

Antifungal Activity of 2 Biological Fungicides Against Apple Disease

BAI Penghua1， FENG Youren2， LIU Baosheng1， GU Xishu1， HU Ruirui1， FAN Jinlong3

（1. Tianjin Institute of Plant Protection， Tianjin 300384， China; 2. Tianjin Academy of Agricultural Sciences， Tianjin 300192， China; 3. Agriculture and Rural Affairs Committee of Dongli Distric Tianjin City， Tianjin 300300， China）

Abstract： In order to screen broad-spectrum biological fungicides against apple disease， inhibitory effects to ring rot disease， apple bitter rot， apple Botryosphaeria canker and rot disease of 2 kinds of biological fungicides were measured by mycelia growth rate method. The results showed that the two tested agents （3% Zhongshengmycin WP and 0.3% Tetramycin AS） displayed antifungal activity on these deiseases. 3% Zhongshengmycin WP exhibited stronger acitivity for apple Botryosphaeria canker and rot disease， the EC50 values were 4.92 μg·mL-1 and 7.33 μg·mL-1 respectively. The EC50 values of 0.3% Tetramycin AS for ring rot disease， rot disease and apple Botryosphaeria canker were 4.52， 6.44 and 7.04 μg·mL-1. Therefore， 3% Zhongshengmycin WP and 0.3% Tetramycin AS could be used as broad-spectrum and alternative biological fungicides for apple diseases to avoid fungicide resistance.

Key words： apple diseases; Zhongshengmycin; Tetramycin; toxicity test

蘋果是我國第一大水果，栽培面積和產(chǎn)量均居世界首位，其富含多種維生素和礦物質(zhì)，備受廣大消費者青睞[1]。近年來，我國蘋果種植面積越來越廣，果樹種植結(jié)構(gòu)不斷調(diào)整，病害發(fā)生程度日趨嚴重。腐爛病、輪紋病、炭疽病等真菌性病害為各蘋果產(chǎn)區(qū)最常見和嚴重病害[2]。

蘋果樹腐爛病由蘋果黑腐皮殼菌（Valsa mali Miyabe&Yamada）侵染所致，嚴重時可導致死樹或毀園，由于該病害具有反復性、破壞性和潛伏侵染等特性，已成為限制我國蘋果產(chǎn)量的重要因素之一[3]。蘋果輪紋?。˙otryosphaeria dothidea）主要危害生長期的果實和枝干，且易造成果實貯藏期的爛果情況，該病危害嚴重時可造成田間病果率高達70%～80%，嚴重影響蘋果生產(chǎn)[4-5]。蘋果炭疽病由膠胞炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）引起果實腐爛的苦腐病及引起葉片壞死的炭疽葉枯病，可造成提前落葉、落果、腐爛、貯藏期爛果等，采后果實腐爛大大縮短商品蘋果的貨架期，有時病果率可達60%以上[6]。蘋果樹干腐?。˙otryosphaeria ribis）是蘋果枝干的主要病害之一，該病的危害程度在一些地區(qū)已超過蘋果樹腐爛病，成為蘋果生產(chǎn)的一個潛在威脅。

目前針對蘋果上的這些病害的防治主要依賴化學農(nóng)藥，但由于施藥不合理而導致病原菌產(chǎn)生抗藥性。例如，蘋果腐爛病對甲基硫菌靈[7]、蘋果輪紋病菌和炭疽病菌對多菌靈[8-9]均產(chǎn)生了不同程度的抗性。生物農(nóng)藥具有無毒害、環(huán)境友好、不易產(chǎn)生抗藥性等諸多優(yōu)點，成為果樹病蟲害防治的主要安全手段之一。近年來，我國提倡化學藥劑使用量“零增長”，給生物源農(nóng)藥帶來了良好的發(fā)展機遇[10]。本研究通過測定市場上2種主要生物源殺菌劑對蘋果樹輪紋病、炭疽病、干腐病和腐爛病菌菌絲生長的抑制效果，以期明確這兩種生物藥劑對蘋果樹上的4種主要病害是否具有廣譜性，從而減少化學農(nóng)藥使用量和使用頻次，為開展蘋果病害生物防治提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試菌株及藥劑

供試菌株：蘋果樹輪紋病、炭疽病、干腐病和腐爛病菌菌株均由天津市植物保護研究所果林病蟲研究室分離并保存，按常規(guī)方法利用PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）斜面試管于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

供試藥劑：3%中生菌素可濕性粉劑由福建省福建凱立生物制品有限公司生產(chǎn)，0.3%四霉素水劑由遼寧微科生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗方法

2種生物藥劑對4種病原菌菌絲生長抑制效果采用“菌絲生長速率法”[11]，將供試藥劑用滅菌水稀釋成系列濃度梯度。每個處理吸取4 mL藥液加入冷卻至50 ℃的36 mL的PDA培養(yǎng)基中，混勻后倒入滅菌的9 cm培養(yǎng)皿中，制成含藥培養(yǎng)基平板。對照為4 mL無菌水加入36 mL的PDA培養(yǎng)基，每個處理3次重復。每種藥劑對應不同的病原菌的含藥培養(yǎng)基分別設置5個濃度梯度，見表1。待含藥培養(yǎng)基凝固后，用滅菌的直徑為5 mm的打孔器在菌落邊緣取菌餅，并倒置于各個培養(yǎng)基正中間。25 ℃黑暗培養(yǎng)3 d，采用十字交叉法測量各個處理的菌落直徑并記算抑菌率。于第7天，再次測量菌落直徑，計算出菌絲生長抑制率。

菌絲生長抑制率=[（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-菌餅直徑）]×100%

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

以藥劑濃度對數(shù)為橫坐標，相對抑制率的機率值為縱坐標，利用Excel和SPSS17.0軟件做Probit回歸分析，繪制標準曲線，計算藥劑濃度的對數(shù)與生長抑制率值之間的回歸方程的a和b值、EC50、卡方值和95%置信區(qū)間值。

2 結(jié)果與分析

2.1 2種生物藥劑對4種病菌菌絲生長的抑制效果

由表2可知，2種生物藥劑對蘋果4種病原菌防治效果良好。藥后3 d，3%中生菌素可濕性粉劑中間、高濃度對干腐病菌和腐爛病菌菌絲生長抑制率高達92%以上;高濃度（160和120 μg·mL-1）對炭疽病菌的抑制率達82%以上;3%中生菌素可濕性粉劑對輪紋病菌防效初期作用緩慢，但在第7天高濃度（80和40 μg·mL-1）防效達70%以上。藥后7 d，3%中生菌素可濕性粉劑對炭疽病菌、干腐病菌和腐爛病菌的抑菌率有所降低，高濃度（160 μg·mL-1）對炭疽病菌抑菌率為82.15%，中間、高濃度（20，40和80 μg·mL-1）對干腐病抑菌率達86%以上，高濃度（20和40 μg·mL-1）對腐爛病菌抑菌率達83%以上。

0.3%四霉素水劑對4種病原菌的抑菌活性優(yōu)于3%中生菌素可濕性粉劑。藥后3 d，0.3%四霉素水劑濃度為10，20，40，80 μg·mL-1時對輪紋病菌和腐爛病菌抑菌率達86%以上;高濃度（40和80 μg·mL-1）對干腐病菌絲和炭疽病菌絲的抑制率達80%以上。藥后7 d，高濃度（40和80 μg·mL-1）的0.3%四霉素水劑對輪紋病菌和腐爛病菌抑菌率仍保持在91%以上，對干腐病菌的抑制率為85.72%和96.14%;0.3%四霉素水劑對蘋果炭疽病抑菌活性最差，80 μg·mL-1的抑菌率為82.15%，低濃度（5和10 μg·mL-1）的抑菌率低于50%。

2.2 2種生物藥劑對4種病菌的線性回歸分析

2種殺菌劑對蘋果4種病原菌均有明顯的抑菌作用，3%中生菌素可濕性粉劑對干腐病菌的抑菌效果最好，其EC50值為4.92 μg·mL-1，其次是腐爛病菌（7.33 μg·mL-1）和輪紋病菌（13.96 μg·mL-1），對炭疽病菌抑菌活性最差，其EC50值為52.10 μg·mL-1。0.3%四霉素水劑對輪紋病菌的抑菌活性高于其它3種病原菌，其EC50值為4.52 μg·mL-1，對腐爛病菌和干腐病菌的EC50值分別為6.44和7.04 μg·mL-1，對炭疽病菌的EC50值為15.00 μg·mL-1（表3）。

3 結(jié)論與討論

蘋果病蟲害種類多且發(fā)生普遍，目前其防治以使用化學農(nóng)藥為主[12]。2015年我國蘋果兩大主產(chǎn)區(qū)黃土高原和環(huán)渤海灣區(qū)蘋果園防治蘋果病害全年農(nóng)藥平均施用次數(shù)為7.93次，化學殺菌劑占比51.43%，而生物源和抗生素類藥劑占比僅為7.14%[13]，可見生物藥劑在蘋果病害防治上使用率仍然很低。

田間試驗表明，生物藥劑3%中生菌素可濕性粉劑和0.3%四霉素水劑對蘋果園主要病害兼具防治效果（數(shù)據(jù)未發(fā)表）?；诖耍狙芯繙y定了3%中生菌素可濕性粉劑和0.3%四霉素水劑對引起蘋果園常見病害的病原菌進行了室內(nèi)生測試驗。結(jié)果表明，2種殺菌劑對蘋果4種病原菌的均具有抑菌作用，具有廣譜性。藥后3 d，20～40 μg·mL-1的3%中生菌素可濕性粉劑對蘋果樹腐爛病和干腐病抑菌率高達92%以上，7 d后的EC50值分別為4.92和7.33 μg·mL-1。因此，3%中生菌素可濕性粉劑可有效、快速防治蘋果樹干腐病和腐爛病[14]。與以上2種病原菌相比，3%中生菌素可濕性粉劑防治蘋果輪紋病效果一般，其EC50值為13.96 μg·mL-1。但有報道表明其對輪紋病菌的持效期長，3%中生菌素可濕性粉劑稀釋500倍液對貯藏期蘋果輪紋病的防效達87.5%[15]。中生菌素除了對本試驗中的4種蘋果病菌具有防治效果，對蘋果斑點落葉也具有一定的防控效能[17]。因此，中生菌素可作為蘋果園主要病害防治的首選生物藥劑，達到1次用藥兼治多種果樹主要病害的目的，減少藥劑的使用次數(shù)和使用量，降低農(nóng)藥殘留。

0.3%四霉素水劑對蘋果樹輪紋病、炭疽病和腐爛病的防效優(yōu)于3%中生菌素可濕性粉劑的防效。藥后3 d，20，40和80 μg·mL-1的0.3%四霉素水劑對蘋果輪紋病和腐爛病抑菌率高達91%以上，尤其對腐爛病菌的防效高達97%以上，藥后7 d對輪紋病、腐爛病和干腐病的EC50值分別為4.52，6.44和7.04 μg·mL-1。田間試驗進一步證明了四霉素水劑對多種蘋果病害兼具防治效果，15%四霉素水劑稀釋600倍液對蘋果炭疽病、斑點落葉病和褐斑病7 d后的防效分別為56.2%、54.00%和45.6%[18]。

在蘋果樹病害防治中，只有根據(jù)發(fā)病癥狀明確主要病害，才能進行科學、合理、有效地用藥，避免濫用農(nóng)藥。本研究表明，3%中生菌素可濕性粉劑可有效、快速防治蘋果樹干腐病和腐爛病，0.3%四霉素水劑對防治蘋果樹輪紋病、炭疽病和腐爛病菌絲生長具有明顯的抑制作用。綜上所述，3%中生菌素可濕性粉劑和0.3%四霉素水劑可作為蘋果園廣譜性生物源殺菌劑，對開展蘋果病害生物防治具有積極的指導意義。

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