子宮內(nèi)膜異位癥患者血清及腹腔液中IL-37與TNF-α、IFN-γ的關(guān)系

江昭穎，蔣建發(fā)，薛敏

中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院婦產(chǎn)科，長沙 410013

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMT)指子宮內(nèi)膜組織在子宮腔被覆內(nèi)膜及子宮肌層以外的部位生長、浸潤，并且反復(fù)出血，形成結(jié)節(jié)或包塊，具有易復(fù)發(fā)及侵襲性等特點(diǎn)，是育齡期婦女常見的婦科良性病變[1]。6%～10%的育齡期婦女有盆腔疼痛及不孕等癥狀，嚴(yán)重影響患者的身心健康及生活質(zhì)量[2]。EMT病變廣泛，形式多樣，發(fā)病率呈明顯增長趨勢[3]。目前其發(fā)病機(jī)制尚不明確，但有研究顯示，免疫機(jī)制異常在EMT的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，在EMT中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)通過影響炎癥、免疫表達(dá)參與疾病的發(fā)生發(fā)展[5]，白細(xì)胞介素-37(interhukin-37，IL-37)作為IL-1家族成員之一，在慢性炎癥疾病患者體內(nèi)通常呈高表達(dá)[6]。EMT也是一種慢性炎癥，但I(xiàn)L-37是否可能作為抗炎因子參與EMT的發(fā)生發(fā)展目前國內(nèi)尚無相關(guān)報(bào)道。本研究通過測定EMT患者血清及腹腔液中IL-37、TNF-α與IFN-γ的水平，探討IL-37與TNF-α、IFN-γ的關(guān)系及在EMT發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院婦科2018年7月－2019年1月收治的經(jīng)腹腔鏡手術(shù)及術(shù)后病理證實(shí)為EMT的36例患者為EMT組，所有患者均無盆腔及其他部位急性感染史，無免疫系統(tǒng)疾病，術(shù)前3個(gè)月無激素治療史。按1997年美國生育協(xié)會(huì)修正分期法(r-AFS)對(duì)患者進(jìn)行分期：早期(Ⅰ-Ⅱ期)13例，晚期(Ⅲ-Ⅳ期)23例。選取同期因單純性卵巢囊腫、畸胎瘤或子宮肌瘤在該院行腹腔鏡手術(shù)治療的28例患者為對(duì)照組。EMT組患者年齡為(30.6±5.6)歲，對(duì)照組為(31.1±5.5)歲，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。兩組患者均有正常的月經(jīng)周期。本研究獲得中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有入組患者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 采集標(biāo)本 于術(shù)前采集入選對(duì)象肘正中靜脈血4 ml，靜置2 h后以3000 r/min離心15 min，留取上層血清并等量分裝，標(biāo)記后放-80 ℃冰箱，待測。兩組患者均于腹腔鏡檢查時(shí)通過吸引管吸取子宮直腸陷凹和子宮膀胱陷凹腹腔液，以3000 r/min離心10 min，取上清液，-80 ℃保存待測。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定IL-37、TNF-α、IFN-γ水平 將待測血清、腹腔液標(biāo)本解凍，采用試劑盒檢測血清、腹腔液的IL-37、TNF-α、IFN-γ水平，試劑盒均購自中國臺(tái)灣Arigo公司；所有操作均嚴(yán)格參照試劑盒說明書執(zhí)行，用酶標(biāo)儀測定光密度(OD)值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本中IL-37、TNF-α、IFN-γ的水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用Games-Howell法。采用Pearson相關(guān)分析IL-37水平與TNF-α、IFN-γ的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清及腹腔液中IL-37、TNF-α、IFN-γ水平比較 EMT組患者血清及腹腔液中的IL-37、TNF-α水平均明顯高于對(duì)照組，IFN-γ水平明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，表1)。

表1 兩組血清及腹腔液中IL-37、TNF-α、IFN-γ水平比較 (pg/ml, )Tab.1 Comparison of IL-37, TNF-α and IFN-γ levels in serum and peritoneal fluid between EMT and control group(pg/ml, )

表1 兩組血清及腹腔液中IL-37、TNF-α、IFN-γ水平比較 (pg/ml, )Tab.1 Comparison of IL-37, TNF-α and IFN-γ levels in serum and peritoneal fluid between EMT and control group(pg/ml, )

EMT.子宮內(nèi)膜異位癥；IL-37.白細(xì)胞介素-37；TNF-α.腫瘤壞死因子-α；IFN-γ.干擾素-γ

指標(biāo) 對(duì)照組(n=28) EMT組(n=36) t P IL-37血清 63.50±14.48 101.78±31.58 -6.45 ＜0.01腹腔液 68.43±12.60 133.94±47.07 -7.99 ＜0.01 TNF-α血清 18.09±1.27 30.68±16.22 -4.64 ＜0.01腹腔液 16.63±3.13 24.23±6.12 -6.45 ＜0.01 IFN-γ血清 20.52±1.38 18.81±3.20 2.88 ＜0.01腹腔液 20.32±7.03 15.93±2.58 3.14 ＜0.01

2.2 對(duì)照組與早期、晚期EMT患者血清及腹腔液中IFN-γ、TNF-α、IL-37水平比較 晚期EMT患者血清及腹腔液中的IL-37、TNF-α水平明顯高于對(duì)照組及早期EMT患者，早期EMT患者血清及腹腔液中的IL-37、TNF-α水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；晚期EMT患者血清及腹腔液中的IFN-γ水平明顯低于對(duì)照組及早期EMT患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但早期EMT患者血清及腹腔液中的IFN-γ水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表2)。

2.3 IL-37與TNF-α、IFN-γ的相關(guān)性 在EMT組中，血清及腹腔液中IL-37水平與TNF-α呈正相關(guān)(r分別為0.338、0.518，P＜0.05)，與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.332、-0.370，P＜0.05)。在對(duì)照組中，血清及腹腔液中IL-37水平與TNF-α、IFN-γ均不存在相關(guān)關(guān)系。

表2 對(duì)照組與早期、晚期EMT患者血清及腹腔液中IL-37、TNF-α、IFN-γ水平比較 (pg/ml, )Tab.2 Comparison of IL-37, TNF-α and IFN-γ levels in serum and peritoneal fluid between control group and early stage and late stage EMT patients (pg/ml, )

表2 對(duì)照組與早期、晚期EMT患者血清及腹腔液中IL-37、TNF-α、IFN-γ水平比較 (pg/ml, )Tab.2 Comparison of IL-37, TNF-α and IFN-γ levels in serum and peritoneal fluid between control group and early stage and late stage EMT patients (pg/ml, )

與對(duì)照組比較，(1)P＜0.05；與早期EMT比較，(2)P＜0.05。

指標(biāo) 對(duì)照組(n=28) 早期EMT(n=13) 晚期EMT(n=23) F P IL-37血清 63.50±14.48 76.92±19.86(1) 115.84±28.27(1)(2) 42.44 ＜0.01腹腔液 68.43±12.60 85.19±16.39(1) 161.50±34.34(1)(2) 105.75 ＜0.01 TNF-α血清 18.09±1.27 21.43±1.69(1) 35.91±18.38(1)(2) 17.22 ＜0.01腹腔液 16.63±3.13 18.44±2.07(1) 27.51±5.11(1)(2) 56.03 ＜0.01 IFN-γ血清 20.52±1.38 20.75±2.62 17.72±3.02(1)(2) 11.12 ＜0.01腹腔液 20.32±7.03 17.67±3.37 14.95±1.27(1)(2) 7.39 ＜0.01

3 討 論

3.1 EMT與炎癥、免疫的關(guān)系 EMT為育齡期女性常見的婦科疾病，臨床常表現(xiàn)為慢性盆腔疼痛、不孕等。其發(fā)病機(jī)制目前還未完全闡明，近年來EMT患者的神經(jīng)-生殖內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)概念受到重視，有研究認(rèn)為，EMT可能是一種全身性自身免疫性疾病，EMT患者血清和腹腔液中的多種細(xì)胞因子參與機(jī)體的炎癥-免疫調(diào)節(jié)功能，使腹腔免疫功能紊亂，盆腔內(nèi)無菌性炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，從而導(dǎo)致EMT的發(fā)生發(fā)展[7]。

3.2 EMT與TNF-α的關(guān)系 TNF-α主要為巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的多功能細(xì)胞因子，具有免疫調(diào)節(jié)、炎癥介導(dǎo)等作用，在正常情況下具有抗腫瘤、抗感染等作用，但釋放過多或與其他細(xì)胞因子的關(guān)系失調(diào)時(shí)又會(huì)引起機(jī)體一系列病理損傷。本研究中EMT組血清及腹腔液中TNF-α水平明顯高于對(duì)照組，且隨著疾病發(fā)展，TNF-α水平進(jìn)一步增高?？紤]可能是異位內(nèi)膜刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的體液免疫及細(xì)胞免疫，使腹腔液中巨噬細(xì)胞數(shù)量增加，促使其產(chǎn)生大量的TNF-α，參與機(jī)體炎性反應(yīng)，進(jìn)而促使異位的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及間皮黏附，同時(shí)刺激間質(zhì)細(xì)胞增殖，從而形成異位內(nèi)膜病灶[4]，這是TNF-α參與EMT發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。

3.3 EMT與IFN-γ的關(guān)系 IFN-γ主要由Ⅰ型輔助性T細(xì)胞(Th1細(xì)胞)及自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生，具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒及抗腫瘤等特性。本研究發(fā)現(xiàn)，早期EMT組患者血清及腹腔液中的IFN-γ水平變化不明顯，晚期EMT患者的IFN-γ水平明顯下降。原因可能是當(dāng)疾病發(fā)展到晚期，異位內(nèi)膜刺激造成局部的炎性環(huán)境，減少了Th1細(xì)胞的產(chǎn)生，其分泌的IFN-γ可能作為EMT的保護(hù)因子遭到抑制，使局部腹腔中免疫功能明顯下降，機(jī)體無法識(shí)別抗原，從而使子宮內(nèi)膜細(xì)胞逃避了免疫監(jiān)視，逆流的內(nèi)膜碎片未能清除，在盆腔和腹腔中繼續(xù)存活、種植，并且再次引發(fā)腹腔液中炎癥的級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，導(dǎo)致異位內(nèi)膜的種植與生長，促進(jìn)EMT的發(fā)展[8]。

3.4 EMT與IL-37的關(guān)系 IL-37屬于IL-1家族成員，可抑制樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎性因子，從而抑制炎癥發(fā)展[9]。目前國內(nèi)外尚無研究明確IL-37在EMT中的作用機(jī)制。通常情況下，健康機(jī)體中IL-37表達(dá)很少[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，EMT組患者血清、腹腔液中IL-37水平明顯高于對(duì)照組，且隨著疾病進(jìn)一步發(fā)展，IL-37水平進(jìn)一步升高，顯示其可能參與了EMT的發(fā)生發(fā)展。本研究還發(fā)現(xiàn)，EMT患者的IL-37水平與TNF-α呈正相關(guān)，與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)，而在對(duì)照組中三者無明顯相關(guān)性，考慮原因?yàn)椋涸贓MT患者中IL-37可能通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞增生活躍產(chǎn)生大量TNF-α，抑制T細(xì)胞分泌IFN-γ，從而與TNF-α、IFN-γ互相作用，導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)紊亂及局部炎性反應(yīng)，促進(jìn)EMT的發(fā)生；且隨著疾病的發(fā)展，IL-37表達(dá)進(jìn)一步增多，使EMT患者體內(nèi)免疫失調(diào)、炎性反應(yīng)進(jìn)一步加重，從而促進(jìn)EMT的發(fā)展。此外，有研究表明，IL-37可能通過促進(jìn)腹腔局部的炎性反應(yīng)而參與EMT患者不孕的發(fā)生過程[11]。

綜上所述，EMT患者血清及腹腔液中IL-37、TNF-α表達(dá)升高，IFN-γ表達(dá)下降；隨著EMT病情的進(jìn)展，IL-37、TNF-α表達(dá)進(jìn)一步升高，IFN-γ表達(dá)進(jìn)一步下降。EMT患者血清及腹腔液中IL-37水平與TNF-α呈正相關(guān)，與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)，在EMT患者中IL-37可能通過促進(jìn)TNF-α的分泌，抑制IFN-γ的分泌，使病灶微環(huán)境中的炎癥-免疫反應(yīng)紊亂，從而參與EMT的發(fā)生發(fā)展。