多發(fā)性骨髓瘤患者的循環(huán)骨髓瘤細(xì)胞與髓內(nèi)瘤細(xì)胞負(fù)荷狀況研究

徐玉秀 姜 芳 馬東升 王 萌

多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一種常見的血液系統(tǒng)腫瘤，是由于免疫球蛋白異常單克隆增殖所致的惡性漿細(xì)胞病[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)MM在所有血液系統(tǒng)惡性腫瘤中約占10%，MM的發(fā)病率在許多國(guó)家中占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的第2位[2]。貧血、骨痛、高粘滯血癥、腎功能異常及溶骨性損傷是MM患者主要的臨床病理性改變[3]。MM患者預(yù)后的相關(guān)因素復(fù)雜多樣，有研究顯示骨髓中瘤細(xì)胞的檢測(cè)是反映MM患者預(yù)后的一個(gè)重要因素，但骨髓中瘤細(xì)胞檢測(cè)需要抽取患者的骨髓，而骨髓抽取過(guò)程比較復(fù)雜且其骨髓液很容易被稀釋等缺點(diǎn)，因此患者的依從性被大大降低[4]。已有文獻(xiàn)表明MM患者的外周血中可以檢測(cè)到骨髓瘤細(xì)胞，我們稱之為循環(huán)骨髓瘤細(xì)胞(circulating myeloma cells，CMCs)，而CMCs對(duì)MM患者的預(yù)后判斷具有重要的意義[5-6]。本研究選取68例多發(fā)性骨髓瘤患者為研究對(duì)象，來(lái)探討MM患者CMCs與髓內(nèi)瘤細(xì)胞負(fù)荷狀況的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集68例2015年10月至2016年12月我院確診的多發(fā)性骨髓瘤患者為研究對(duì)象。所選男性患者38例，女性患者30例；年齡32～76歲，平均年齡(56.5±1.6)歲；按DurieSalmon(DS)分期體系[7]：8例為Ⅰ期患者，11例為Ⅱ期患者，49例為Ⅲ期患者；按國(guó)際分期體系(ISS)[8]：3例為Ⅰ期患者，31例為Ⅱ期患者，34例為Ⅲ期患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：①所選患者均符合美國(guó)國(guó)家綜合癌癥網(wǎng)(NCCN)中MM的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；②所選患均為初診的MM患者；③所選患者的神志均很清醒，均能表達(dá)自己的意愿；④所選患者都沒有合并其他重要器官的疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有嚴(yán)重溶血性疾病的患者；②患有其他部位腫瘤的患者；③患有心肝腎等重要臟器功能損傷的患者；④患有嚴(yán)重感染性疾病的患者。依據(jù)CMCs的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)將所選患者分為CMCs陽(yáng)性組與陰性組。本研究中所有研究對(duì)象或其家屬均簽署了知情同意書，且本研究通過(guò)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。

1.2 方法

首次化療前1 d采取每位患者的5 ml靜脈血，進(jìn)行大生化檢查。在首次化療前1 d分別采集2 ml所選患者的外周血與骨髓，均使用EDTA-K2進(jìn)行抗凝，然后均用PBS洗液洗滌3次，最后將骨髓與外周血的細(xì)胞數(shù)均調(diào)整到(4～10)×109/l。依據(jù)歐洲骨髓瘤工作組推薦[10]來(lái)進(jìn)行抗體組合的制定；然后使用FACS CANTO II流式細(xì)胞儀及由美國(guó)BD公司提供的單克隆熒光抗體、同型對(duì)照抗體和細(xì)胞透膜液等試劑盒，嚴(yán)格按照說(shuō)明書來(lái)檢測(cè)所選患者的外周血及骨髓中瘤細(xì)胞的數(shù)量，所得數(shù)據(jù)用分析軟件FCS Express 4 Flow Research Edition來(lái)進(jìn)行處理分析。CMCs的結(jié)果采用萬(wàn)分比，髓內(nèi)瘤細(xì)胞的結(jié)果采用百分比，根據(jù)流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)MM患者微小殘留病灶定義的標(biāo)準(zhǔn)[4]，將流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)瘤細(xì)胞比值>1×10-4定義為陽(yáng)性，而<1×10-4定義為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0對(duì)本研究中的數(shù)字整理與分析，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示計(jì)量資料，而計(jì)數(shù)資料用百分率來(lái)表示，計(jì)量資料及計(jì)數(shù)資料分別用t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)來(lái)進(jìn)行比較；采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析；采用Logistic回歸分析來(lái)進(jìn)行多因素分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 分組結(jié)果

依據(jù)流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)MM患者微小殘留病灶定義的標(biāo)準(zhǔn)所選的68例患者中37例患者為CMCs陽(yáng)性患者，余31例患者為CMCs陰性患者，CMCs陽(yáng)性率為54.4%。

2.2 2組患者CMCs與髓內(nèi)瘤細(xì)胞比例的相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示：MM患者CMCs與髓內(nèi)瘤細(xì)胞的比例呈正相關(guān)(γ=0.498，P=0.018)，見圖1。

圖1 髓內(nèi)瘤細(xì)胞比例/%

2.3 MM患者CMCs與預(yù)后相關(guān)指標(biāo)的單因素分析

DS Ⅲ期患者、ISS Ⅲ期患者、腎功能損傷患者、骨質(zhì)破壞患者、中度以上貧血患者、β2-微球蛋白增高患者及血清肌酐增高患者的比例CMCs陽(yáng)性組均明顯高于CMCs陰性組；而年齡、性別、低白蛋白血癥患者、高鈣血癥患者及乳酸脫氫酶增高患者在CMCs陽(yáng)性與陰性2組MM患者中的差異不大，見表1。

2.4 MM患者CMCs與預(yù)后相關(guān)指標(biāo)的多因素分析

多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示：中度以上貧血與β2-微球蛋白增高是MM患者CMCs陽(yáng)性的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，詳見表2。

3 討論

MM是骨髓漿細(xì)胞惡性增殖性的一種疾病，該病的高發(fā)人群為中老年群體。MM發(fā)病早期患者的臨床癥狀不明顯，因此許多患者就診時(shí)的誤診率很高[11]。有研究結(jié)果顯示隨著年齡的增加多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病率有逐漸上升的趨勢(shì)[12]。目前，惡性腫瘤患者外周血中腫瘤細(xì)胞的存在、數(shù)量與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系已成為腫瘤生物學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)[13]。有醫(yī)學(xué)研究者提出MM患者外周血中的CMCs不僅參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)，還影響患者的治療與預(yù)后[14]。流式細(xì)胞學(xué)具有檢測(cè)結(jié)果客觀、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，能獲取大量細(xì)胞，因此能提高檢測(cè)的靈敏性，流式細(xì)胞儀近年來(lái)在MM的診斷及治療效果評(píng)價(jià)等方面均取得了很大的成效[15]。本研究選取68例經(jīng)我院確診的多發(fā)性骨髓瘤患者為研究對(duì)象，探討多發(fā)性骨髓瘤患者的循環(huán)骨髓瘤細(xì)胞(CMCs)與髓內(nèi)瘤細(xì)胞負(fù)荷狀況的相關(guān)性。

表1 單因素分析

表2 多因素分析

本研究所選68例MM患者中有37例患者為CMCs陽(yáng)性患者，CMCs陽(yáng)性患者所占的比例為54.4%，本研究結(jié)果還顯示MM患者CMCs與髓內(nèi)瘤細(xì)胞的比例呈正相關(guān)。CMCs陽(yáng)性組MM患者的DS Ⅲ期患者、ISS Ⅲ期患者、腎功能損傷患者、骨質(zhì)破壞患者、中度以上貧血患者、β2-微球蛋白增高患者及血清肌酐增高患者的比例均明顯高于CMCs陰性組。這一結(jié)果說(shuō)明CMCs與髓內(nèi)腫瘤細(xì)胞的比例及分期均存在一致性，即CMCs能很好地反映MM患者腫瘤細(xì)胞的負(fù)荷，這與Gonsalves等的研究結(jié)果[16]相符合，即CMCs不僅能很好地反映腫瘤的增殖活性和負(fù)荷，且對(duì)MM患者的分期及療效的判定均有重要的價(jià)值。本研究多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示中度以上貧血與β2-微球蛋白增高均是MM患者CMCs陽(yáng)性的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而MM患者的CMCs與髓內(nèi)瘤細(xì)胞負(fù)荷狀況呈正相關(guān)，因此對(duì)中度以上貧血與β2-微球蛋白增高的MM患者檢測(cè)CMCs對(duì)患者的病情及預(yù)后均有很重要的臨床意義。

綜上所述，CMCs能很好地反映MM患者的髓內(nèi)腫瘤細(xì)胞的負(fù)荷狀況及病情，且與髓內(nèi)腫瘤細(xì)胞相比，CMCs的檢測(cè)更便捷，而且MM患者的依從性更好，值得在臨床工作中進(jìn)行大力的推廣與應(yīng)用。