急性髓細胞白血病患者不同細胞亞群上CD47的表達

劉春燕 王 慶 趙玉磊 沈 杰 劉 輝 張敏娟

相關(guān)醫(yī)學研究表明[1-3]，在白血病發(fā)生發(fā)展中，白血病干細胞是起始細胞。近年來，臨床不斷深入研究了白血病干細胞的細胞生物學特性，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了CD44、CD96、CD123等一些過表達于急性髓細胞白血病的白血病干細胞中的分子，近年來，相關(guān)醫(yī)學研究表明[4-6]，急性髓細胞白血病的白血病干細胞中CD47表達高，以此認為其是潛在的單克隆抗體治療靶點。本研究探討了CD47在急性髓細胞白血病干細胞中的表達。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2015年1月至2019年3月我院急性髓細胞白血病患者294例作為研究組，其中男性160例，女性134例，年齡12～78歲，平均(43.5±7.6)歲；初診骨髓原始細胞32%～99%，平均(66.2±10.5)%；在FAB分型方面，16例為M0,42例為M1,86例為M2,60例為M4,70例為M5,20例為M6。另隨機選取同期我院健康人員38例為健康組，其中男性26例，女性12例，年齡22～47歲，平均(32.5±5.4)歲；在人員類型方面，20例為體檢者，18例為骨髓抑制供者。2組人員的一般資料比較差異均不顯著(P>0.05)。

1.2 納入和排除標準

納入標準：①均具有良好的依從性；②均符合急性髓細胞白血病的診斷標準[7]；③均接受HA、DA化療方案治療。排除標準：①急性早幼粒細胞白血?。虎诤喜⑵渌麌乐丶膊?；③無法有效配合研究。

1.3 方法

采用美國BD公司生產(chǎn)的FACS CaliburTM流式細胞儀，小鼠IgG1-(FITC、PE、Percp 或APC)、CD2-FITC、CD3-FITC、CD5-FITC、CD7-FITC、CD11b-FITC、CD13-FITC、CD14-FITC、CD15-FITC、CD20-FITC、CD22-FITC、CD33-FITC、CD34-APC、CD38-Percp、CD64-FITC、CD90-FITC、CD117-FITC、CD123-PE、P170-FITC，美國eBioscience公司生產(chǎn)的CD47-FITC?；熐皩?～5 ml骨髓采集下來，用肝素鈉抗凝，將單個核細胞(MNC)常規(guī)分離出來，用磷酸鹽緩沖液將單細胞懸液制作出來備用，細胞濃度為1×107/ml。用CD34-APC/CD38-Percp 散點圖設(shè)2組人員的CD34+ CD38-細胞，然后對CD2、CCD3、CD5、D7、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD20、CD22、CD33、CD47、CD64、CD90、CD117、CD123、P170等抗原表達進行分析。采用流式細胞儀將30 000～400 000個骨髓單個核細胞獲取過來，采用Cell Quest軟件分析。用平均熒光強度(MFI)、百分率表示CD47，陽性標準為MFI≥10%。用百分率表示其余抗原，陽性標準為MFI≥20%。

1.4 觀察指標

跟蹤隨訪2組人員，對其復發(fā)、死亡情況進行統(tǒng)計，將其生存時間記錄下來。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 研究組不同F(xiàn)AB分型患者白血病干細胞中CD47表達情況比較

研究組294例患者中，白血病干細胞中CD47陽性表達224例(76.2%)，其中FAB分型M0、M1、M2、M4、M5、M6患者白血病干細胞中CD47陽性表達率分別87.5%(14/16)、76.2%(32/42)、76.7%(66/86)、70.0%(42/60)、77.1%(54/70)、80.0%(16/20),不同F(xiàn)AB分型CD47陽性表達的差異均不顯著(P>0.05)。

2.2 2組人員不同細胞亞群上CD47表達情況比較

研究組患者白血病干細胞、CD34+CD38+上CD47 MFI、陽性表達率均顯著高于健康組(t=5.164,P<0.05)，白血病干細胞上CD47 MFI、陽性表達率均顯著高于CD34+CD38+(t=3.254,P<0.05)。見表1。

表1 2組人員不同細胞亞群上CD47表達情況比較

2.3 研究組患者白血病干細胞中CD47表達和臨床特征的相關(guān)性分析

研究組有肝脾淋巴結(jié)大患者白血病干細胞中CD47陽性表達率顯著高于無肝脾淋巴結(jié)大患者(P<0.05)，WBC≥20×109/l患者白血病干細胞中CD47陽性表達率顯著高于<20×109/l患者(P<0.05)，但不同性別、年齡、原始細胞患者白血病干細胞中CD47陽性表達率之間的差異均不顯著(P>0.05)。見表2。

表2 研究組患者白血病干細胞中CD47表達和臨床特征的相關(guān)性分析(例,%)

2.4 研究組不同CD47表達患者的復發(fā)、死亡、平均生存時間比較

研究組CD47陽性表達患者的復發(fā)率、死亡率分別為 46.9%(105/224)、43.8%(98/224)，均顯著高于CD47表達陰性患者的24.3%(17/70)、18.6%(13/70)，平均生存時間顯著短于CD47陰性表達患者(P<0.05)。見表3。

表3 研究組不同CD47表達患者的復發(fā)、死亡、平均生存時間比較

3 討論

CD47屬于一種免疫球蛋白樣蛋白質(zhì)，在細胞膜表面廣泛表達，又稱整聯(lián)蛋白相關(guān)蛋白，是一種超分子復合物，組成成分為特定的整聯(lián)蛋白、膽固醇、G蛋白。結(jié)合其配體信號調(diào)節(jié)蛋白能夠?qū)⒁种菩孕盘柈a(chǎn)生，進而抑制免疫系統(tǒng)。CD47少量表達于正常造血干細胞表面能夠?qū)ο鄬Ψ€(wěn)定的機體內(nèi)免疫系統(tǒng)進行維護，而急性髓細胞白血病患者的白血病肝細胞中有過量的CD47表達，因此能夠?qū)奘杉毎淌勺陨磉M行抵御，從而促進機體固有免疫系統(tǒng)清除白血病干細胞的顯著降低。相關(guān)醫(yī)學研究表明[8-10]，和正常的造血干細胞相比，急性髓細胞白血病急變期白血病干細胞中具有顯著較高的CD47表達水平，而其他骨髓增殖性疾病的骨髓干/祖細胞無較高的CD47表達水平。本研究結(jié)果表明，研究組294例患者中，白血病干細胞中CD47表達陽性224例，表達陽性率為76.2%，其中FAB分型M0、M1、M2、M4、M5、M6患者白血病干細胞中CD47表達陽性率之間的差異均不顯著。研究組患者白血病干細胞、CD34+CD38+上CD47 MFI、表達百分率均顯著高于健康組，白血病干細胞上CD47 MFI、表達百分率均顯著高于CD34+CD38+，和上述相關(guān)醫(yī)學研究結(jié)果一致。

相關(guān)醫(yī)學研究表明[11-13]，急性髓細胞白血病患者白血病干細胞表面CD47普遍過表達，導致患者具有較短的生存時間、較差的預(yù)后。但是，白血病干細胞中CD47高表達也將有效依據(jù)提供給了臨床單克隆抗體靶向治療急性髓細胞白血病的工作。相關(guān)醫(yī)學研究也表明[14-15]，通常情況下，急性髓細胞白血病患者的FAB分型和白血病干細胞表面的CD47表達水平無相關(guān)性。如果核型異常患者具有較好的臨床預(yù)后，那么其就具有較低的CD47表達水平，而如果急性髓細胞白血病患者有1/3正常核型、FLT3-ITD突變，那么其就具有較高的CD47表達水平，以此認為耐藥、預(yù)后可能和CD47高表達相關(guān)。本研究結(jié)果表明，研究組有肝脾淋巴結(jié)大患者白血病干細胞中CD47表達陽性率顯著高于無肝脾淋巴結(jié)大患者，WBC≥20×109/l患者白血病干細胞中CD47表達陽性率顯著高于<20×109/l患者，但不同性別、年齡、原始細胞患者白血病干細胞中CD47表達陽性率之間的差異均不顯著，和上述相關(guān)醫(yī)學研究結(jié)果一致，說明如果急性髓細胞白血病的白血病干細胞中CD47過表達，那么其就極易髓外浸潤。相關(guān)醫(yī)學研究表明，隨訪成人急性髓細胞白血病患者8年，結(jié)果表明，如果患者白血病干細胞表面的CD47高表達，那么其無事件中位生存時間、總中位生存時間分別為6.8個月、9.1個月，而如果患者白血病干細胞表面的CD47低表達，那么其無事件中位生存時間、總中位生存時間分別為17.1個月、22.1個月，以此認為CD47低表達患者比CD47高表達患者具有顯著較長的生存時間。本研究結(jié)果表明，研究組CD47表達陽性患者的復發(fā)率、死亡率均顯著高于CD47表達陰性患者，平均生存時間顯著短于CD47表達陰性患者，和上述相關(guān)醫(yī)學研究結(jié)果一致，說明如果急性髓細胞白血病患者的白血病干細胞中CD47陽性，那么其就極易復發(fā)，具有較短的生存時間、較差的預(yù)后。

總之，急性髓細胞白血病白血病干細胞中CD47表達陽性率高，值得臨床充分重視。