分光光度法測定寶蓋草(酒制寶蓋草)中總環(huán)烯醚萜苷含量

趙興奎，宋 磊，李克明

(1.菏澤市中醫(yī)醫(yī)院，山東 菏澤 274035；2.山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺(tái)264199；3.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南250014)

一、儀器與方法

1.儀器

TU-1810紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；KQE-400B型超聲清洗機(jī)（昆山超聲儀器有限公司）；Metter Toledo EL2401電子天平（瑞士梅特勒公司）。

2.藥材與試劑

梓醇對(duì)照品（源葉生物科技有限公司，批號(hào)B21678，純度98%以上）；無水乙醇、氫氧化鈉、鹽酸、2，4-二硝基苯肼為分析純?cè)噭?/p>

3.試驗(yàn)方法

3.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取梓醇對(duì)照品20 mg，置10 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，配成每1 ml含有梓醇2 mg的對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液1 ml加入到100 ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度作為對(duì)照品溶液。

3.2 供試品溶液的制備：精密稱取粉碎后的藥材3 g加入至100 ml具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 ml超聲提取30 min，補(bǔ)足重量，過濾取續(xù)濾液，定容至50 ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品原液。精密吸取供試品原液0.5 ml，加入到10 ml的容量瓶中，加入70%乙醇稀釋至刻度。

3.3 測定方法：精密量取對(duì)照品溶液，供試品溶液和70%乙醇溶液各1 ml于10 ml具塞試管中，加入1 mol/L的鹽酸溶液2 ml搖勻，90oC水浴反應(yīng)15 min，放冷，加入二硝基苯肼乙醇試液0.5 ml，搖勻，90oC 水浴反應(yīng) 25 min，放冷，加入 1 mol/L氫氧化鈉70%乙醇試液3 ml，搖勻，室溫下放置1 h，以上述70%乙醇溶液為空白，在463 nm處測定吸光度。

二、結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察

圖1 梓醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別配置濃度為 4，8，12，16和 20的梓醇對(duì)照品溶液，按照3.3項(xiàng)下的方法測定吸光度。以對(duì)照品濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到梓醇的回歸方程y=0.0116x+0.0624，R2=0.9989，結(jié)果表明梓醇標(biāo)準(zhǔn)品在濃度4至20 μg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（圖1）。

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

按照3.3項(xiàng)下的方法，取1份樣品，連續(xù)測定6次吸光度，由表1可知，RSD為1.53%，表明儀器精密度良好。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取寶蓋草適量，按照3.3項(xiàng)下的方法，分別于0，1，2，4，6，12 h，測定吸光度，結(jié)果見表 2。 由表2可知，供試品溶液在室溫下12 h穩(wěn)定性良好，RSD為0.413%。

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取6份樣品，按照3.3項(xiàng)下的方法，測定吸光度，結(jié)果見表3。由表3可知，吸光度的RSD為1.56%，表明本方法重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

2.5加樣回收率實(shí)驗(yàn)

表4 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

精密稱定已知含量的寶蓋草樣品1.0 g，共六份，分別加入適量梓醇對(duì)照品，按照既定方法制備供試品溶液，測定吸光度，計(jì)算回收率。由表4可知，回收率RSD為1.11%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.6 寶蓋草中總環(huán)烯醚萜苷的含量測定

按照確定方法，對(duì)三批寶蓋草進(jìn)行了總環(huán)烯醚萜苷的含量測定，結(jié)果表明，寶蓋草中總環(huán)烯醚萜苷的平均含量為4.15±0.13 mg/g(以梓醇計(jì)算)。

三、討論

寶蓋草為唇形科野芝麻屬植物寶蓋草的干燥全草。東北、華東、華中、西北和西南等地均有分布。歷代本草記載其具有通經(jīng)活絡(luò)，接骨，平肝，消腫，散結(jié)等功效，可用于肝熱目赤，筋骨疼痛，跌打損傷，骨折，淋巴結(jié)結(jié)核等多種疾病的治療。寶蓋草也是《圣惠方》記載的“接骨草散”的主要原料。該植物資源豐富，價(jià)格低廉，藥用價(jià)值較高，應(yīng)進(jìn)行深入的開發(fā)，具有廣闊的開發(fā)前景。