蒲桃殼乙酸乙酯部位化學成分研究

向麗敏，李潔，劉嘉鑫，李娜，馮曉丹，陳小梅，周慧嫻，王淑美

(1.廣東藥科大學中藥學院，廣東 廣州 510006；2.國家中醫(yī)藥管理局中藥數(shù)字化質(zhì)量評價技術(shù)重點研究室，廣東 廣州 510006；3.廣東中藥質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510006)

蒲桃殼為桃金娘科蒲桃屬植物蒲桃(Syzygiumjambos)的干燥果皮，主要分布于廣東、廣西、海南、貴州、云南、福建以及臺灣等地[1]。蒲桃殼具有暖胃健脾、補肺止咳、破血消腫的功效，主治胃寒呃逆、脾虛泄瀉、久痢、肺虛寒嗽以及疽瘤等癥[2]。有關蒲桃殼的化學成分研究較少，目前報道的主要有揮發(fā)油類、多糖類等[3-4]。

為明確蒲桃殼的化學物質(zhì)基礎，本課題組對其化學成分進行研究，從蒲桃殼乙酸乙酯部位中分離鑒定了10個化合物，為蒲桃殼資源的進一步開發(fā)利用提供了參考依據(jù)。

1 材料與儀器

蒲桃果實于2019年6月采自廣東省廣州市廣州大學城廣東藥科大學校園，由廣東藥科大學中藥學院向麗敏博士鑒定為蒲桃(Syzygiumjambos)的果實。將上述蒲桃果實去核，烘干得蒲桃殼藥材。藥材標本(No.201906)保存于廣東藥科大學中藥學院。

薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠(100～200 目、200～300 目)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；Sephadex LH-20(瑞士GE公司)；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇(分析純，天津市致遠化學試劑有限公司)。Avance Ⅲ 500 MHz核磁共振波譜儀(德國Bruker公司，TMS為內(nèi)標)。

2 提取與分離

取干燥蒲桃殼15 kg，加入70%的乙醇60 L回流提取4次，每次2 h，減壓回收乙醇得到浸膏，加入適量水充分混懸，依次用等體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，55 ℃減壓回收各溶劑，分別得到石油醚部位(70.9 g)、乙酸乙酯部位(149.1 g)和正丁醇部位(639.0 g)。其中乙酸乙酯部位(149.1 g)經(jīng)硅膠柱層析(200～300目，2.4 kg，400 mm×150 mm)，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(體積比100∶0～0∶100)，TLC 檢識合并相同流份，共得到18個組分Fr.1～18。其中組分Fr.7(2.6 g)利用二氯甲烷進行結(jié)晶得到化合物10(2.0 g)。Fr.10(14.8 g)經(jīng)硅膠柱層析(200～300目，450 g，340 mm×70 mm)，以石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)進行梯度洗脫(體積比5∶1～1∶2)，分離得到Fr.10.1～10.12，其中Fr.10.3(22.0 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1，1 277 mm×15 mm)凝膠柱層析得到化合物9(13.0 mg)。Fr.10.5(561.1 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1，1 277 mm×15 mm)凝膠柱層析得到化合物6(16.3 mg)。Fr.10.6(738.5 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇，1 277 mm×15 mm)凝膠柱層析得到化合物5(19.4 mg)。Fr.11(10.8 g)經(jīng)硅膠柱層析(200～300目，350 g，264 mm×70 mm)，以石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)進行梯度洗脫(體積比2∶1～1∶2)，分離得到Fr.11.1～11.13，其中Fr.11.3(656.9 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇，1 277 mm×15 mm)凝膠柱層析得到化合物2(17.1 mg)和化合物7(17.6 mg)。Fr.11.5(1.0 g)利用石油醚-乙酸乙酯(體積比2∶1)進行結(jié)晶得到化合物1(23.2 mg)。Fr.11.9(835.6 mg)利用石油醚-乙酸乙酯(體積比1∶1)進行結(jié)晶得到化合物4(200.0 mg)。Fr.11.10(835.6 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1，1 345 mm×15 mm)凝膠柱層析得到化合物3(8.0 mg)。Fr.12(22.7 g)經(jīng)硅膠柱層析(200～300目，600 g，435 mm×70 mm)，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(體積比50∶1～0∶100)，分離得到Fr.12.1～12.14。取Fr.12.7(5.9 g)部分(300.0 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1，1 345 mm×15 mm)凝膠柱層析得到化合物8(45.0 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀晶體(石油醚-乙酸乙酯，體積比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:12.14(2H,br s,H-1,4),2.41(4H,s,H-1,4)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:173.7(C-1,4),28.9(C-2,3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道對照基本一致，故鑒定化合物1為琥珀酸(succinic acid)。

化合物2：白色針狀晶體(甲醇)。1H-NMR(500 MHz,Methanol-d4)δ:6.79(2H,br s,H-2,3),3.79(3H,s,OCH3);13C-NMR(125 MHz,Methanol-d4)δ:167.9(C-1),135.6(C-2),134.2(C-3),167.1(C-4),52.9(1-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道對照基本一致，故鑒定化合物2為富馬酸單甲酯(monomethyl fumarate)。

化合物3：白色針狀晶體(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,Methanol-d4)δ:8.01(1H,s,H-2)，6.55(1H,s,H-4),4.46(2H,s,H-7)；13C-NMR(125 MHz,Methanol-d4)δ:141.1(C-2),147.5(C-3),110.9(C-4),170.6(C-5),177.0(C-6),61.3(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道對照基本一致，故鑒定化合物3為flufuran。

化合物4：白色針狀晶體(石油醚-乙酸乙酯，體積比1∶1)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:6.33(1H,s,H-3),8.02(1H,s,H-6),4.28(2H,d,J=5.8 Hz,H2-7),9.04(1H,s,5-OH),5.66(1H,t,J=6.1 Hz,7-OH)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:168.2(C-2),109.9(C-3),174.0(C-4),145.8(C-5),139.3(C-6),59.5(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道對照基本一致，故鑒定化合物4為曲酸(kojic acid)。

化合物5：無色方晶(甲醇)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:7.94(1H,s,H-3),8.75(1H,br s,4-OH),8.93(1H,br s,5-OH),2.22(3H,s,6-CH3)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ:168.4(C-2),138.9(C-3),144.2(C-4),149.2(C-5),141.4(C-6),14.3(6-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道對照基本一致，故鑒定化合物5為epimedokoreanone A。

化合物6：無色方晶(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:7.79(2H,d,J=8.6 Hz,H-2,6),6.82(2H,d,J=8.6 Hz,H-3,5);13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:121.4(C-1),131.5(C-2,6),115.1(C-3,5),161.6(C-4),167.2(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道對照基本一致，故鑒定化合物6為對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)。

化合物7：白色針狀晶體(甲醇)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:6.95(2H,s,H -2,6),9.25(2H,s,3,5-OH),8.92(1H,s,4-OH),4.20(2H,q,J=7.1 Hz,—OCH2),1.26(3H,t,J=7.1 Hz,-CH3)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:119.6(C-1),108.5(C-2,6),145.6(C-3,5),138.4(C-4),165.9(C=O),60.0(—OCH2),14.3(-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11-12]報道對照基本一致，故鑒定化合物7為沒食子酸乙酯(ethylgallate)。

化合物8：白色針狀晶體(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,Methanol-d4)δ:7.07(2H,s,H-2,6)；13C-NMR(125 MHz,Methanol-d4)δ:122.1(C-1),110.5(C-2,6),146.5(C-3,5),139.7(C-4),170.5(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13-4]報道對照基本一致，故鑒定化合物8為沒食子酸(gallic acid)。

化合物9：白色針狀晶體(二氯甲烷-甲醇，體積比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,chloroform-d)δ:5.33(1H,d,J=5.2 Hz,H-6),3.51(1H,m,H-24),2.32(2H,m,H-4),2.24(2H,m,H-2′),0.99(3H,s,H-19),0.90(H,m,H-21),0.86(3H,m,H-16′),0.82(3H,s,H-26),0.80(3H,m,H-29),0.78(3H,s,H-27),0.66(3H,s,H-18);13C-NMR(125 MHz,chloroform-d)δ:37.5(C-1),31.9(C-2),72.1(C-3),42.5(C-4),141(C-5),121.9(C-6),32.1(C-7),32.1(C-8),50.4(C-9),36.7(C-10),21.3(C-11),40.0(C-12),42.5(C-13),57.0(C-14),24.5(C-15),28.5(C-16),56.3(C-17),12.1(C-18),19.6(C-19),36.4(C-20),19.0(C-21),34.0(C-22),26.3(C-23),46.1(C-24),29.3(C-25),20.0(C-26),19.3(C-27),23.3(C-28),12.2(C-29),178.6(C-1′),34.2(C-2′),24.9(C-3′),29.4(C-4′),29.4(C-5′),29.5(C-6′),29.6(C-7′),29.7(C-8′),29.8(C-9′),29.9(C-10′),29.9(C-11′),29.9(C-12′),29.9(C-13′),32.1(C-14′),22.9(C-15′),14.3(C-16′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道對照基本一致，故鑒定化合物9為β-谷甾醇棕櫚酸酯(β-sitosterol palmitate)。

化合物10：白色針狀結(jié)晶(CH2Cl2)。與β-谷甾醇標準品共薄層Rf值相同，因此化合物10鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物1～10的結(jié)構(gòu)見圖1。

4 結(jié)論

本研究通過現(xiàn)代的分離手段和技術(shù)，共從蒲桃殼中分離得到了10個單體化合物：琥珀酸(1)、富馬酸單甲酯(2)、flufuran(3)、曲酸(4)、epimedokoreanone A(5)、對羥基苯甲酸(6)、沒食子酸乙酯(7)、沒食子酸(8)、β-谷甾醇棕櫚酸酯(9)、β-谷甾醇(10)，化合物1～7、9為首次從該植物中分離得到。

我國蒲桃資源較為豐富，為嶺南地區(qū)習用藥材?，F(xiàn)代藥理學研究表明，蒲桃提取物具有降血糖、抗菌、抗氧化、抑制癌細胞增殖及抗感染等作用[15-21]，具有很大的藥用價值和開發(fā)前景。但目前對其化學成分的研究依然十分有限，發(fā)揮這些藥理活性的物質(zhì)基礎仍不明確。本文初步探索了蒲桃殼化學成分組成，豐富了蒲桃植物化學成分的多樣性。但本研究內(nèi)容僅限于蒲桃殼乙酸乙酯部位的分離工作，其化學成分、生物活性、作用機制及構(gòu)效關系等方面仍需進一步深入研究，為蒲桃資源的有效利用提供科學依據(jù)。