冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病慢性心力衰竭患者血清microRNA-499水平及與心功能和心肌重構(gòu)的相關(guān)性

徐寶華，李楠，朱家庭

（大連市第三人民醫(yī)院 心內(nèi)科，遼寧 大連 116033）

慢性心力衰竭（chronic heart failure,CHF）是各種心臟疾病的終末階段，為臨床常見疾病之一。隨著人口老齡化，CHF 的發(fā)病率逐年上升。CHF 具有致殘率和病死率高的特點(diǎn)，對患者的健康和生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響，給家庭和社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)。心肌重塑和神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活是CHF 發(fā)生的重要作用機(jī)制。microRNA（miRNA）參與多種疾病的病理生理過程，在心肌梗死、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ㄒ韵潞喎Q冠心?。┑刃难芗膊〉陌l(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[1-2]。miR-499與心肌損害關(guān)系密切[3]，在心肌梗死、冠心病等心血管疾病中也發(fā)揮重要作用[4-5]。本文對冠心病CHF 患者血清miR-499 水平進(jìn)行研究，探討其在心功能和心肌重構(gòu)中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2016年1月—2018年12月在大連市第三人民醫(yī)院心內(nèi)科就診的冠心病CHF 患者90 例作為CHF組，同期本院健康體檢者90 例為對照組。CHF 組年齡（59.38±11.24）歲；男性49 例，女性41 例；美國紐約心臟病學(xué)會(huì)（NYHA）分級：Ⅱ級29 例，Ⅲ級 34 例，Ⅳ級27 例。對照組年齡（60.02±9.58）歲；男性46 例，女性44 例。兩組年齡、性別方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。CHF 患者根據(jù)左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction,LVEF）分為LVEF 降低CHF 31 例，LVEF 中間CHF 19 例，LVEF保留CHF 40 例。CHF 符合《中國心力衰竭診斷和治療指南2018》[6]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。冠心病符合《穩(wěn)定性冠心病診斷與治療指南》[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) CHF 患者均有冠心病病史、NYHA分級Ⅱ級～Ⅳ級、CHF 病史＞6 個(gè)月；兩組病例資料完整，患者均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 對照組排除急性心肌梗死、急性心肌炎、不穩(wěn)定心絞痛病史。CHF 組排除近期行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)、非冠心病所致心力衰竭。兩組均排除惡性腫瘤，嚴(yán)重肝腎功能異常，肺動(dòng)脈栓塞及阻塞性肺部疾病，合并急性心包炎、心臟瓣膜病，哺乳期及妊娠期女性，感染性疾病。

1.3 研究方法

1.3.1 標(biāo)本采集 CHF 患者于入院第2 天，對照組體檢當(dāng)天采集空腹外周靜脈血，3 000 r/min 離心10 min，分離血清備用。

1.3.2 血清miR-499 水平測定 取各研究對象血清，加入Trizol 提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)，反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性10 min，95℃變性15 s、58℃退火60 s，共42 個(gè)循環(huán)。以U6 為內(nèi)參，用2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-499 水平。PCR 儀（ABI 7500 型）及配套試劑均購自美國ABI 公司。

1.3.3 心功能和心肌重構(gòu)測定 采用Philips iE33 超聲儀（荷蘭飛利浦公司）測定心功能和心肌重構(gòu)，利用二維平面法測定心功能指標(biāo)：LVEF、心輸出量（CO）；采用二維和三維超聲心動(dòng)圖測定心肌重構(gòu)指標(biāo)：左心房內(nèi)徑（LAP）、左室舒張末內(nèi)徑（LVEDD）、左室后壁厚度（LVPW）、左室重構(gòu)指數(shù)（LVRI）、左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)或方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，相關(guān)分析用Pearson 法，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-499 水平比較

對照組和CHF 組血清miR-499 水平分別為（1.00±0.07）和（1.57±0.11），經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=41.474，P=0.000），CHF 組高于對照組。

2.2 不同心功能分級患者血清miR-499 水平比較

心功能Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級患者血清miR-499 水平分別 為（1.32±0.10）、（1.53±0.09） 和（1.71±0.12），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=100.851，P=0.000），進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，隨心功能分級升高，血清miR-499 水平升高（P＜0.05）。

2.3 不同LVEF 患者血清miR-499 水平比較

LVEF 降低、中間、保留CHF 患者血清miR-499 水平分別為（1.68±0.07）、（1.55±0.08） 和（1.43±0.10），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=72.921，P=0.000），進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，隨LVEF 降低，血清miR-499 水平升高（P＜0.05）。

2.4 兩組心功能和心肌重構(gòu)指標(biāo)比較

兩組LVEF、CO、LAP、LVEDD、LVPW、LVRI、 LVMI 比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CHF 組LVEF、CO、LVRI 低于對照組，LAP、LVEDD、LVPW、LVMI 高于對照組。見表1。

2.5 不同心功能分級患者心功能和心肌重構(gòu)指標(biāo)比較

不同心功能分級患者LVEF、CO、LAP、LVPW、LVRI、LVMI 比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，隨心功能分級升高，LVEF、CO、LVRI 降低（P＜0.05），LAP、LVPW、LVMI 升高（P＜0.05）。見表2。

2.6 CHF 患者血清miR-499 水平與其他的指標(biāo)相關(guān)性

CHF患者血清miR-499 水平與LVEF、CO、LVRI 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與LAP、LVPW、LVMI 呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表1 兩組心功能和心肌重構(gòu)指標(biāo)比較 （n =90，±s）

表1 兩組心功能和心肌重構(gòu)指標(biāo)比較 （n =90，±s）

組別 LVEF/% CO/（ml/min） LAP/mm LVEDD/mm LVPW/mm LVRI/（g/ml） LVMI/（g/m2）對照組 55.37±6.28 7.34±1.76 35.67±7.68 47.31±6.02 7.95±1.24 1.21±0.19 102.16±41.35 CHF 組 45.16±6.02 5.57±1.68 49.32±8.14 73.26±9.61 9.67±1.38 1.02±0.16 132.14±37.58 t 值 11.134 6.901 11.571 21.710 8.975 7.257 5.090 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 不同心功能分級患者心功能和心肌重構(gòu)指標(biāo)比較 （±s）

表2 不同心功能分級患者心功能和心肌重構(gòu)指標(biāo)比較 （±s）

心功能分級 n LVEF/% CO/（ml/min） LAP/mm LVEDD/mm LVPW/mm LVRI/（g/ml） LVMI/（g/m2）Ⅱ級 29 49.21±5.76 6.35±1.24 42.78±8.59 72.67±10.32 8.94±1.27 1.09±0.15 117.58±11.62Ⅲ級 34 45.34±5.91 5.42±1.33 48.79±8.51 73.37±9.54 9.81±1.42 0.98±0.14 130.16±16.28Ⅳ級 27 41.06±5.73 4.85±1.27 54.73±11.02 74.04±10.51 10.63±1.19 0.90±0.12 140.02±15.69 F 值 13.765 9.820 11.416 0.129 11.715 13.486 16.332 P 值 0.000 0.000 0.000 0.879 0.000 0.000 0.000

表3 CHF 患者血清miR-499 水平與其他指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

miRNA 為單鏈、小分子、非編碼RNA，轉(zhuǎn)錄后對細(xì)胞生長發(fā)揮調(diào)控作用[8]。miRNA 除在細(xì)胞生長、分化、凋亡及集體生長發(fā)育中發(fā)揮重要作用外，在心律失常、冠心病、心力衰竭等心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中也發(fā)揮重要作用[9-10]。研究表明，miRNA在血清中表達(dá)穩(wěn)定，與組織來源的miRNA 比較，血清miRNA 敏感性高、穩(wěn)定性好、可連續(xù)監(jiān)測，故近年來血清miRNA 在心血管疾病中的意義越來越受到大家關(guān)注[11-12]。

miR-499 為miRNA 家族成員之一，為具有心臟特異性的代表成員，與多種心肌細(xì)胞的特異性基因關(guān)系密切，可通過多種信號通路對心肌細(xì)胞的生理功能進(jìn)行調(diào)控[13-14]。miR-499 在急性心肌梗死等心血管疾病中扮演重要角色，如在急性心肌梗死患者血清中升高[15]。miR-499 是急性心肌梗死的新型敏感生物標(biāo)志物[16]。血清miR-499 在急性冠脈綜合征早期診斷中具有重要價(jià)值[17]，血清miR-499 與急性冠脈綜合征患者冠狀動(dòng)脈病變程度關(guān)系密切[18]。本文對冠心病慢性心力衰竭患者血清miR-499 水平進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)患者血清miR-499 水平升高，且隨CHF 心功能分級升高，血清miR-499 水平升高，表明miR-499 可能參與CHF 的發(fā)生、發(fā)展過程。

LVEF 和CO 為反映心功能的指標(biāo)，值越高表明心功能越好[19]。心肌重構(gòu)是CHF 發(fā)生、發(fā)展的重要病理機(jī)制，心肌細(xì)胞間質(zhì)膠原沉積、心室壁增厚、心臟變形能力降低等為心肌重構(gòu)的主要體現(xiàn)[20]，LAP、LVPW、LVRI、LVMI 為反映心肌重構(gòu)的指標(biāo)[21]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CHF 患者LVEF、CO、LVRI 降低，LAP、LVPW、LVMI 升高，血清miR-499 與LVEF、CO、LVRI 呈負(fù)相關(guān)，與LAP、LVPW、LVMI 呈正相關(guān)，表明冠心病CHF 患者存在心功能異常和心肌重構(gòu)，心功能分級越高，心功能異常及心肌重構(gòu)越嚴(yán)重，血清miR-499 在一定程度上可反映CHF 患者的心功能和心肌重構(gòu)程度。miR-499 的編碼基因位于人類20 號染色體Myh7b基因內(nèi)，miR-499 與Myh7b可協(xié)同在骨骼肌纖維及心肌纖維中表達(dá)，在其他組織中只有少量表達(dá)。miR-499 具有促進(jìn)心肌增殖和分化功能，高表達(dá)miR-499 可通過促進(jìn)梗死區(qū)心肌細(xì)胞再生和分化，改善心功能；miR-499 可抑制心肌細(xì)胞凋亡，沉默miR-499 可通過促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，增加心肌肥厚和心功能不全[22]。由此可見，miR-499 可能通過影響心肌細(xì)胞增殖和凋亡，影響心功能和心肌重構(gòu)。

綜上所述，冠心病CHF 患者血清miR-499 水平升高，檢測血清miR-499 水平在其病情評估、心功能和心肌重構(gòu)判斷上具有一定指導(dǎo)價(jià)值。