板藍(lán)根中主要化學(xué)成分含量測(cè)定方法研究進(jìn)展*

黃 遠(yuǎn)，董福越，李楚源

（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州510515）

板藍(lán)根名源于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是十字花科Brassicaceae植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fortune的干燥根，適于生長(zhǎng)在山地林緣較濕潤(rùn)的環(huán)境，在全國(guó)各地均有栽培。板藍(lán)根入藥歷史悠久，臨床長(zhǎng)期用于防治感冒，特別是流感。近年來(lái)，已從板藍(lán)根中分離出近200種化合物，主要包括生物堿類、有機(jī)酸類、木脂素類、氨基酸類、核苷類及其他，分子多樣性豐富，其中不乏結(jié)構(gòu)新穎的化合物。本研究中根據(jù)近10余年的科研成果和相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)板藍(lán)根化學(xué)成分的分離和含量測(cè)定方法進(jìn)行了系統(tǒng)綜述，為板藍(lán)根的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 主要化學(xué)成分含量測(cè)定

1.1 核苷類

核苷（nucleoside）是一類糖苷胺（glycosylamine）分子，組成物為堿基加環(huán)狀核糖或脫氧核糖，如胞苷、尿苷、腺苷、鳥苷與胸腺苷。板藍(lán)根藥材中的尿苷、鳥苷、腺苷等核苷類成分能干擾病毒核酸的合成，是中成藥抗病毒的活性成分[1-2]。核苷類成分在板藍(lán)根藥材中含量較高且易溶于水，對(duì)板藍(lán)根及其制劑的療效和質(zhì)量影響較大。故核苷類成分可作為板藍(lán)根藥材及其制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。

板藍(lán)根藥材中的核苷類成分易通過(guò)水提工藝提取，其含量的高低能影響板藍(lán)根制劑的質(zhì)量和療效。肖慧等[3]以核苷類成分的總含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用正交試驗(yàn)對(duì)板藍(lán)根水提工藝的加水量、回流次數(shù)、回流時(shí)間進(jìn)行了分析，確定了最優(yōu)條件。

目前，對(duì)于核苷類成分含量測(cè)定的研究，主要基于高效液相色譜（HPLC）[4-10]和高效毛細(xì)管電泳[11]的方法。

辛敏通等[4]以水為溶劑超聲提取不同企業(yè)的板藍(lán)根顆粒中核苷類成分，以Agilent Zorbox SB C18柱為色譜柱，采用快速HPLC法以不同比例的水和甲醇為流動(dòng)相對(duì)核苷類成分進(jìn)行梯度洗脫、分離，并比較其含量差異，結(jié)果表明，不同企業(yè)或同一企業(yè)生產(chǎn)的不同批次板藍(lán)根顆粒核苷類成分含量差異較大，不同板藍(lán)根藥材及不同生產(chǎn)工藝過(guò)程對(duì)核苷類成分含量影響較大。

肖慧等[5]以20%甲醇為溶劑超聲提取板藍(lán)根藥材中的核苷類成分，以Prevail C18柱為色譜柱，采用HPLC法，以水和乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫測(cè)定核苷類成分的含量，方法簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于板藍(lán)根藥材、飲片制備、板藍(lán)根制劑生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制。

張葉等[6]以70%乙醇對(duì)不同產(chǎn)地的板藍(lán)根藥材進(jìn)行超聲提取，以Lichrocorb-C18柱為色譜柱，采用HPLC法以甲醇-水（15∶85，V/V）為流動(dòng)相對(duì)板藍(lán)根中腺苷成分進(jìn)行分離，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材中腺苷成分差異明顯，為保證其有效性和可靠性，必須嚴(yán)格控制板藍(lán)根藥材質(zhì)量。

蔣麗蓉等[7]利用15%甲醇超聲提取板藍(lán)根藥材成分，以Kromasil-C18柱為色譜柱，采用HPLC法以甲醇-水（10∶90，V/V）為流動(dòng)相測(cè)定復(fù)方板藍(lán)根顆粒中腺苷的含量，為更好地控制該制劑的質(zhì)量提供了較實(shí)用的檢測(cè)方法。

1.2 木脂素類

木脂素（lignan）是一類由2分子苯丙素衍生物氧化聚合而成的植物次級(jí)代謝產(chǎn)物，是板藍(lán)根、連翹、厚樸、細(xì)辛、五味子、牛蒡子等中藥的活性成分，具有抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤和保肝等功效[12-14]。木脂素類化合物中的直鐵線蓮寧B被證實(shí)具有體外抑制流感病毒復(fù)制的功效[15]，作用機(jī)制可能是抑制流感病毒的核輸出[16]，并通過(guò)抑制病毒介導(dǎo)的NF-κB通路的活化，從而抑制流感病毒誘導(dǎo)的炎性因子的釋放[17]。

制劑生產(chǎn)中，板藍(lán)根多采用傳統(tǒng)水提醇沉法提取分離，在去除一些多糖等大分子物質(zhì)的同時(shí)也去除了木脂素類等有效成分，且該工藝周期長(zhǎng)，雜質(zhì)去除不盡、易產(chǎn)生絮凝物。王盛等[18]以總木脂素含量及直鐵線蓮寧B（clemastanin B）單體含量作為篩選指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對(duì)提取過(guò)程中的微波輻照功率、提取時(shí)間、料液比、浸泡時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)選。孫東東等[19]以單體直鐵線蓮寧B提取率、總木脂素提取率等多指標(biāo)綜合加權(quán)評(píng)分為指標(biāo)，以粉碎度、加水倍數(shù)、浸泡時(shí)間、提取次數(shù)、提取時(shí)間作為考察因素，優(yōu)選板藍(lán)根提取工藝。李進(jìn)等[20]以板藍(lán)根有效部位如總木脂素等與單體含量結(jié)合作為指標(biāo)，探討應(yīng)用超濾膜分離純化板藍(lán)根有效成分的工藝。潘以琳等[21]以板藍(lán)根木脂素活性部位作為研究對(duì)象，研究了板藍(lán)根藥材經(jīng)微波提取、膜分離處理后的藥液進(jìn)行大孔樹脂吸附純化的工藝。

基于木脂素的藥用價(jià)值，有較多木脂素類化合物直鐵線蓮寧B在藥材或制劑中的含量研究。譚宇萍等[22]利用發(fā)根農(nóng)桿菌C58C1誘導(dǎo)菘藍(lán)毛狀根，探索不同懸浮培養(yǎng)時(shí)間毛狀根中直鐵線蓮寧B積累變化規(guī)律，通過(guò)超高效液相色譜（UPLC）法測(cè)定不同生長(zhǎng)期菘藍(lán)根和葉中直鐵線蓮寧B的含量，結(jié)果葉中未檢測(cè)到直鐵線蓮寧B，而根和毛狀根中均含直鐵線蓮寧B，且直鐵線蓮寧B動(dòng)態(tài)積累差異顯著，菘藍(lán)毛狀根不僅能積累直鐵線蓮寧B，且其含量穩(wěn)定，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸積累，可達(dá)板藍(lán)根含量最高值的2.5倍，表明菘藍(lán)毛狀根同樣也具有用于生產(chǎn)直鐵線蓮寧B的潛力。陳勇等[23]對(duì)不同廠家、不同批次的板藍(lán)根顆粒經(jīng)50%甲醇超聲提取、離心后取上清液水浴濃縮，以Agilent TC-C18柱為色譜柱，采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，通過(guò)甲醇和水梯度洗脫，于280 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)鐵線蓮寧B和異落葉松脂素的含量，結(jié)果表明，不同廠家、不同批次的板藍(lán)根顆粒中鐵線蓮寧B和異落葉松脂素成分含量差異較大。何立巍等[24]將板藍(lán)根粉末用60%甲醇經(jīng)超聲提取，離心后取上清液，以甲醇-乙腈-水（24∶1∶75，V/V/V）為流動(dòng)相、Lichrospher-C18柱為色譜柱，采用HPLC法，在280 nm波長(zhǎng)處測(cè)定板藍(lán)根主要產(chǎn)地藥材中直鐵線蓮寧B的量，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材直鐵線蓮寧B的量差異較大，以江蘇、吉林、安徽、河北的含量較高。

1.3 氨基酸類

氨基酸（amino acid）是生物學(xué)上重要的有機(jī)化合物，是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)，使其分子具有生化活性。板藍(lán)根大多以水煎方式入藥，其水溶性成分中含有多種氨基酸類成分，板藍(lán)根中的氨基酸類成分為其抗病毒的代表性有效成分。2015年版《中國(guó)藥典（一部）》中板藍(lán)根藥材及顆粒中分別針對(duì)氨基酸類成分進(jìn)行薄層色譜或化學(xué)反應(yīng)鑒別，但無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。目前常見測(cè)定中藥中氨基酸含量的方法包括氨基酸分析儀測(cè)定或衍生化法。氨基酸分析儀測(cè)定，樣品處理復(fù)雜；柱前衍生化法常有鄰苯二甲醛（OPA）法、2，4-二硝基氟苯（FDNB）法、氯甲酸芴甲酯（FMOC）法、異硫氰酸苯酯（PITC）法等。

任國(guó)萍等[25]以水超聲提取藥材中的氨基酸成分，以Inertsil ODS-3為色譜柱，采用2，4-二硝基氟苯柱前衍生法及微波水解-柱前衍生法測(cè)定板藍(lán)根藥材中含量較高、水解前后差值較大的10種游離氨基酸和水解氨基酸的含量，再通過(guò)水解氨基酸與游離氨基酸的差值計(jì)算出結(jié)合氨基酸的含量，建立了HPLC法測(cè)定板藍(lán)根藥材中10種游離氨基酸和結(jié)合氨基酸含量的方法。

劉西京等[26]以4個(gè)含量較高氨基酸蘇氨酸、脯氨酸、精氨酸、纈氨酸為指標(biāo)，以磷酸鹽緩沖液和乙腈水溶液為流動(dòng)相，采用2，4-二硝基氟苯柱前衍生化，以Eclipse XDB C18柱為色譜柱，測(cè)定游離氨基酸和酸水解后氨基酸的含量，即測(cè)定板藍(lán)根水提液、人工胃液、人工腸液和酸水解液中的氨基酸含量，結(jié)果表明，板藍(lán)根多肽經(jīng)人工胃液和人工腸液消化后，未水解為游離氨基酸。

辛敏通等[27]對(duì)5家企業(yè)生產(chǎn)的板藍(lán)根顆粒中6種常見氨基酸（精氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、纈氨酸），以Waters AccQ TagTMUltra C18柱為色譜柱，采用6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯（AQC）進(jìn)行柱前衍生化，以乙腈、甲酸和甲酸銨水溶液為流動(dòng)相，采用UPLC法測(cè)定其含量，結(jié)果表明，5家企業(yè)生產(chǎn)的板藍(lán)根顆粒中氨基酸類成分的含量存在差異。

吳家紅等[28]以70%乙醇超聲提取板藍(lán)根中氨基酸成分，以茚三酮溶液作為顯色劑，采用分光光度法在570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定藥材中總氨基酸的含量，結(jié)果表明，3%茚三酮乙二醇溶液顯色完全，且陰性無(wú)干擾，該方法測(cè)定總氨基酸適用范圍廣。

何軼等[29]以水超聲提取板藍(lán)根粗粉的成分，在醋酸-醋酸鹽作緩沖鹽作用下，以乙腈和水為流動(dòng)相，以Phenomenex ODS3柱為色譜柱，采用異硫氰酸苯醋柱前衍生法測(cè)定13批板藍(lán)根樣品中精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸和纈氨酸顯示的含量，結(jié)果顯示，河北安國(guó)中藥材市場(chǎng)的板藍(lán)根氨基酸含量明顯高于其他來(lái)源的板藍(lán)根。陳凱等[30]研究發(fā)現(xiàn)，以精氨酸為對(duì)照，利用紫外分光光度法測(cè)總氨基酸含量的方法簡(jiǎn)便易行、合理可靠。

1.4 生物堿類

生物堿（alkaloid）是一種主要包含堿性氮原子化合物，包括脂溶性的靛藍(lán)、靛玉紅和水溶性成分表告依春等?，F(xiàn)代藥理試驗(yàn)表明，板藍(lán)根的生物堿類成分能抗炎、抗病毒、解熱，2015年版《中國(guó)藥典（一部）》中板藍(lán)根的質(zhì)量控制指標(biāo)是表告依春，故考察優(yōu)化板藍(lán)根生物堿部位的工藝及含量測(cè)定研究較多[31-47]。

徐麗華等[31]采用色譜法對(duì)板藍(lán)根總生物堿進(jìn)行分離，得到2，4（1H，3H）喹唑二酮、表告依春、靛玉紅3個(gè)單體，采用雞胚法對(duì)其進(jìn)行了抗體外流感病毒活性測(cè)定，結(jié)果表明，抗流感病毒作用表告依春及生物堿提取物明顯有，喹唑二酮略有，靛玉紅無(wú)。馬麗娜等[32]對(duì)板藍(lán)根藥材粉末進(jìn)行水提醇沉后取其濾液，借助超濾質(zhì)譜技術(shù)，通過(guò)比對(duì)不同組別板藍(lán)根樣品超濾前后成分的變化情況，篩選并鑒定出告依春與神經(jīng)氨酸酶結(jié)合能力顯著。進(jìn)一步以體外神經(jīng)氨酸酶活性試驗(yàn)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)告依春可能是板藍(lán)根抗流感病毒的活性成分，靛藍(lán)、靛玉紅是板藍(lán)根中抑菌的主要活性成分，尤其靛玉紅是板藍(lán)根中治療慢性粒細(xì)胞白血病的有效成分，因其對(duì)腫瘤細(xì)胞生成有選擇性抑制作用[33]。

何立巍等[34]應(yīng)用溶劑法和大孔吸附樹脂法提取、分離純化板藍(lán)根生物堿，并優(yōu)選出最佳提取工藝，但發(fā)現(xiàn)總生物堿量仍偏低。

黃曉玲等[35]通過(guò)比較回流、滲漉、微波、超聲等不同提取方式的優(yōu)缺點(diǎn)，采用超聲提取法，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間、料液比對(duì)提取工藝的影響，確定了總生物堿的最佳提取工藝。

李進(jìn)等[36-37]以板藍(lán)根有效部位總生物堿等與單體表告依春等含量結(jié)合作為指標(biāo)，探討應(yīng)用超濾膜分離純化板藍(lán)根有效成分的工藝，考察了微波提取法優(yōu)選板藍(lán)根生物堿部位的工藝。該工藝能降低分離純化成本，提高有效成分保留率和雜質(zhì)去除率。

安益強(qiáng)等[40]以水為溶劑，對(duì)板藍(lán)根藥材進(jìn)行超聲提取及對(duì)其制劑（板藍(lán)根顆粒、復(fù)方板藍(lán)根顆粒、板藍(lán)根含片、板藍(lán)根糖漿）以水浴加熱方式溶解，以乙腈-水-磷酸-三乙胺（8.50∶90.72∶0.73∶0.05，V/V/V/V）為流動(dòng)相，以Zorbax SB-C18柱為色譜柱，采用RPHPLC法測(cè)定板藍(lán)根藥材及其制劑中表告依春的含量，結(jié)果該方法重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，可作為板藍(lán)根藥材及其制劑中測(cè)定表告依春的方法。

胡曉燕等[41]對(duì)板藍(lán)根藥材以水為溶劑進(jìn)行回流提取，以甲醇-0.02%磷酸水溶液（7∶93，V/V）為流動(dòng)相，以Waters SunFire C18柱為色譜柱，采用RP-HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材表告依春的含量并建立指紋圖譜，以指紋圖譜相似度和表告依春含量為指標(biāo)，運(yùn)用SPSS軟件進(jìn)行類聚分析。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地板藍(lán)根的表告依春含量和化學(xué)指紋圖譜不盡相同，化學(xué)成分差異與產(chǎn)地呈相關(guān)性。該方法既能評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量，又能有效辨別不同產(chǎn)地藥材，可為道地藥材化學(xué)質(zhì)量控制提供借鑒。

徐小飛等[42]對(duì)板藍(lán)根粉末以水為溶劑超聲提取，以甲醇和水為流動(dòng)相，以Agilent C18柱為色譜柱，采用HPLC法對(duì)提取液進(jìn)行梯度洗脫，同時(shí)測(cè)定不同采收期的板藍(lán)根藥材中5種核苷類成分和（R，S）-告依春，可為板藍(lán)根藥材最佳采收期的確定及板藍(lán)根規(guī)范化種植提供參考。

靛藍(lán)、靛玉紅為脂溶性成分，含量測(cè)定方法已有氧化滴定法、直接比色測(cè)定法、薄層色譜（TLC）法、雙波長(zhǎng)分光光度法、RP-HPLC法，其中RP-HPLC法測(cè)定較普遍。范麗芳等[43]以氯仿回流提取20批來(lái)自不同產(chǎn)地的板藍(lán)根藥材，以乙腈-0.05%磷酸為流動(dòng)相，以Diamonsil C18柱為色譜柱，采用HPLC-UV法對(duì)提取液進(jìn)行梯度洗脫，以測(cè)定板藍(lán)根中靛藍(lán)和靛玉紅的含量，并進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，結(jié)果表明，靛藍(lán)、靛玉紅含量的高低與地域相關(guān)，但同一地區(qū)的板藍(lán)根藥材中靛藍(lán)、靛玉紅的最高濃度與最低濃度相差也較大，表明板藍(lán)根的質(zhì)量除地域因素外，還與其他因素相關(guān)。

馬莉等[44]對(duì)9批不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材及板藍(lán)根顆粒用三氯甲烷提取后經(jīng)減壓回收溶劑后用甲醇-三氯甲烷（8∶2，V/V）溶解定容，以Waters Symmetry-C18柱為色譜柱，采用HPLC法以甲醇-水（65：35，V/V）為流動(dòng)相測(cè)定板藍(lán)根藥材及制劑中靛藍(lán)和靛玉紅含量，結(jié)果表明，產(chǎn)于道地產(chǎn)區(qū)河北和安徽的板藍(lán)根藥材中靛藍(lán)和靛玉紅含量較高，在中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GAP）生產(chǎn)基地生產(chǎn)的藥材的主要成分含量明顯高于普通種植的藥材，表明道地產(chǎn)區(qū)和規(guī)范種植會(huì)影響藥材質(zhì)量。

謝友良等[45]以N，N-二甲基甲酰胺超聲提取板藍(lán)根藥材成分，以Kromasil C18柱為色譜柱，采用HPLC法以乙腈-水（70∶30，V/V）為流動(dòng)相同時(shí)測(cè)定青黛中有效成分靛藍(lán)和靛玉紅的含量。

王金鵬等[46]將復(fù)方板藍(lán)根顆粒以三氯甲烷加熱提取后，采用HPLC法以甲醇和2%磷酸為流動(dòng)相進(jìn)行含量測(cè)定，建立以HPLC法測(cè)定復(fù)方南板藍(lán)根顆粒中靛藍(lán)和靛玉紅含量的方法。

孫立新等[47]以氯仿回流提取，以Spherisorb C18柱為色譜柱，以安宮黃體酮為內(nèi)標(biāo)物，采用RP-HPLC法，以甲醇-水（62∶38，V/V）為流動(dòng)相同時(shí)測(cè)定板藍(lán)根、大青葉中靛藍(lán)、靛玉紅的含量，結(jié)果在避光條件下，24h內(nèi)板藍(lán)根、大青葉中靛藍(lán)、靛玉紅在氯仿中穩(wěn)定，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，靛藍(lán)、靛玉紅分解，故應(yīng)保證在24h內(nèi)完成試驗(yàn)。

1.5 有機(jī)酸類

有機(jī)酸（organic acid）是指一些酸性有機(jī)化合物，板藍(lán)根中的有機(jī)酸具有較強(qiáng)的抗內(nèi)毒素活性[48]。劉云海等[49]對(duì)從板藍(lán)根中分離得到的31個(gè)化合物的抗內(nèi)毒素活性進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)丁香酸、鄰氨基苯甲酸、水楊酸和苯甲酸等有抗內(nèi)毒素作用。對(duì)于板藍(lán)根總有機(jī)酸的工藝優(yōu)化研究，主要采用的是微波法[50-51]，對(duì)板藍(lán)根中各種有機(jī)酸的測(cè)定方法主要有高效毛細(xì)管電泳法[52]、HPLC法[53]、電位滴定法[54-55]和離子色譜法[56]等。

在板藍(lán)根中有機(jī)酸類的分離純化方面，湯杰等[57]將板藍(lán)根以75%乙醇（pH=2）索氏提取，以丁香酸為指標(biāo)篩選吸附樹脂，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化影響樹脂吸附的因素。結(jié)果表明，D101型樹脂對(duì)板藍(lán)根中有機(jī)酸組分的吸附與解吸性能較好，采用樹脂床體積（2BV）50%乙醇易于洗脫通過(guò)優(yōu)選樹脂洗脫液；正交試驗(yàn)結(jié)果表明，以藥液質(zhì)量濃度1.0 g/mL、pH=3.0及流速為2 BV/h的參數(shù)組合對(duì)板藍(lán)根有機(jī)酸成分的分離效果良好。王小雪等[52]采用高效毛細(xì)管電泳法，以硼砂作為緩沖液，對(duì)水楊酸、苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、丁香酸的毛細(xì)管電泳遷移行為進(jìn)行了研究，并考察了緩沖液酸度、濃度、有機(jī)添加物濃度、電壓等因素對(duì)待測(cè)物質(zhì)分離的影響，結(jié)果表明，選用乙腈-硼砂（15%乙腈，25 mmol/L，15 mmol/L β-環(huán)糊精，pH=9.10）作為運(yùn)行緩沖液，工作電壓為11.5kV時(shí)對(duì)板藍(lán)根有機(jī)酸成分的分離效果較好。

在板藍(lán)根有機(jī)酸類的含量測(cè)定方面，馬莉等[58]對(duì)板藍(lán)根中有機(jī)酸類成分進(jìn)行分析，采用酸堿滴定法測(cè)定總有機(jī)酸含量，并以Kromasil C18柱為色譜柱，以乙腈-1%醋酸水溶液（25∶75，V/V）為流動(dòng)相，采用RPHPLC法測(cè)定板藍(lán)根提取物中水楊酸含量，試驗(yàn)中樣品經(jīng)D101大孔吸附樹脂制備，提取物粉末顏色淺，避免了滴定時(shí)顏色的干擾，使用酸性流動(dòng)相抑制有機(jī)酸的離解，結(jié)果準(zhǔn)確。王文清等[59]對(duì)大青葉粉末用乙醚回流提取，經(jīng)揮干乙醚后用甲醇溶解樣品，以Lichrosorb C18柱為色譜柱，以乙腈-水-磷酸（18∶82∶0.3，V/V/V）為流動(dòng)相，采用RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定大青葉中鄰氨基苯甲酸與丁香酸的含量，該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。李培啟[60]采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定板藍(lán)根藥材中水楊酸、丁香酸、苯甲酸和鄰氨基苯甲酸的含量，并測(cè)定了3家公司的2批板藍(lán)根顆粒中的有機(jī)酸，建立了簡(jiǎn)單、快速方法，可用于控制板藍(lán)根顆粒中抗內(nèi)毒素有機(jī)酸的質(zhì)量。

1.6 多糖類

多糖（polysaccharide）由多個(gè)單糖分子脫水聚合，以糖苷鍵連接而成，可形成直鏈或有分支的長(zhǎng)鏈，水解后得到相應(yīng)的單糖和寡糖。板藍(lán)根多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，對(duì)特異性免疫、非特異性免疫均有一定促進(jìn)作用。許益明等[61]證實(shí)，腹腔注射板藍(lán)根多糖可顯著促進(jìn)小鼠免疫功能。同時(shí)，板藍(lán)根多糖能降低細(xì)菌脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬細(xì)胞株引起的NF-κB與DNA的結(jié)合活性升高，對(duì)于抑制炎性反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)，減少炎性因子產(chǎn)生，防治炎癥性疾病有一定療效[62]，其為板藍(lán)根主要活性成分。

板藍(lán)根多糖在板藍(lán)根提取物中的質(zhì)量較高，但板藍(lán)根制劑工藝尤其是提取方法不完善，導(dǎo)致提取不完全，造成藥材資源浪費(fèi)。多糖作為生物大分子，在熱水中溶解度較大，故目前大多采用水提醇沉法進(jìn)行板藍(lán)根多糖的提取，但也存在提取溫度高、提取時(shí)間長(zhǎng)、能耗大、提取率較低的缺點(diǎn)。隨著提取技術(shù)的不斷進(jìn)步，新技術(shù)也應(yīng)用到板藍(lán)根多糖的提取中，如微波輔助、超聲波輔助和酶法輔助提取[63-69]。

國(guó)欣等[70]對(duì)80%醇沉板藍(lán)根粗多糖進(jìn)行DEAESepharose Fast Flow柱色譜、Sephacryl-200葡聚糖凝膠柱色譜及高效凝膠色譜系統(tǒng)分離純化，采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化HPLC法分離得到2種均一板藍(lán)根多糖（IRPS1A和IRPS1B）和2種均一板藍(lán)根糖蛋白（IRPS2A和IRPS3A）。其中，IRPS1A與IRPS1B的單糖組成均為甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖；IRPS2A的單糖組成為半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖；IRPS3A的單糖組成為甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖。板藍(lán)根糖蛋白IRPS2A和IRPS3A中，單糖組成以葡萄糖為主，還含有少量半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖等。

馬莉等[71]采用DEAE纖維素離子交換色譜柱，Sephadex G75凝膠色譜柱分離純化板藍(lán)根多糖，從板藍(lán)根多糖中分離純化得到4種不同的均一多糖組分PS1，PS2，PS3，PS4，并結(jié)合高效凝膠滲透色譜（HPGPC），紅外光譜（IR）、TLC、UV等方法對(duì)板藍(lán)根多糖進(jìn)行組成結(jié)構(gòu)分析及理化性質(zhì)研究，其色譜分析表明，PS1，PS2，PS3，PS4均由單一木糖組成，且多糖的活性與相對(duì)分子質(zhì)量、溶解度、黏度和糖鏈結(jié)構(gòu)有關(guān)。

張?bào)w祥等[72]采用水煮醇沉法從板藍(lán)根中提取水溶性多糖，通過(guò)正交試驗(yàn)，考察液料比、提取時(shí)間、提取溫度、醇沉?xí)r間、醇液比對(duì)多糖得率的影響，對(duì)提取的粗多糖脫蛋白，通過(guò)Sehadex G-100凝膠色譜柱進(jìn)一步分離純化。結(jié)果表明，液料比是影響提取工藝的主要因素，最佳工藝條件為液料比30∶1，提取溫度90℃，提取時(shí)間6 h，采用三氯乙酸法去蛋白的多糖得率高，脫蛋白效果好，葡聚糖凝膠柱層析分離純化后的板藍(lán)根多糖為分子大小均一的單一組分多糖。

其他的提取優(yōu)化試驗(yàn)，王莉等[64]采用微波技術(shù)提取板藍(lán)根多糖，反應(yīng)時(shí)間縮短12倍，多糖含量由0.81%提高到3.47%。唐志華[65]將條件設(shè)置為料液比1∶40、提取時(shí)間8 min、微波功率500 W，多糖提取率達(dá)到了6.55%。劉依等[66]用水浸泡藥材1 h后再用微波處理，多糖得率可達(dá)33.06%。

目前，對(duì)于板藍(lán)根中多糖的含量測(cè)定研究，主要是基于苯酚/蒽酮-硫酸比色法[73-76]，并制訂了相關(guān)的方法參數(shù)，為板藍(lán)根多指標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的建立提供了參考。

2 存在問(wèn)題

雖然板藍(lán)根化學(xué)成分的研究已開展多年[77]，但在分離提取等研究過(guò)程中仍有較多問(wèn)題。如靛藍(lán)、靛玉紅為脂溶性成分，用水提取幾乎提取不出，而實(shí)際生產(chǎn)中板藍(lán)根多為水提?。磺逸克{(lán)中的靛藍(lán)、靛玉紅主要存在于殘留的葉柄、葉片和根莖中，而根中含量很低，因此把靛藍(lán)、靛玉紅作為板藍(lán)根的指標(biāo)成分進(jìn)行控制仍需深入探討。提取時(shí)，受熱時(shí)間較長(zhǎng)會(huì)大量破壞生物堿和氨基酸等活性成分。另外，醇提或醇沉的醇濃度過(guò)高，也會(huì)導(dǎo)致板藍(lán)根中的多糖和氨基酸類水溶性成分損失。對(duì)于板藍(lán)根氨基酸含量測(cè)定中常以含量較高的氨基酸為指標(biāo)，并不能完全反映氨基酸的總含量，且所選氨基酸能否有效控制板藍(lán)根質(zhì)量，還有待進(jìn)一步研究。提取時(shí)，對(duì)于含量極少，但可能存在較大藥用價(jià)值的成分，需經(jīng)過(guò)濃縮、富集等方法提取，該過(guò)程損失率較大，故測(cè)量含量較低的成分，其測(cè)定誤差較大。

由于板藍(lán)根化學(xué)成分復(fù)雜，藥效物質(zhì)尚不完全明確，檢測(cè)方法未成熟，目前尚未找到合適的成分作為質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。而且板藍(lán)根內(nèi)在有效成分之間的相互作用可能是決定其藥效的因素之一，因此單純以某一有效成分或指標(biāo)成分的量作為質(zhì)量評(píng)價(jià)的依據(jù)并不全面。且板藍(lán)根藥材作為板藍(lán)根中藥提取物和復(fù)方制劑的原料，其質(zhì)量穩(wěn)定性十分重要，但因受生長(zhǎng)環(huán)境、土壤性質(zhì)、栽培技術(shù)、產(chǎn)地加工等多方面因素的影響，板藍(lán)根的成分種類、含量等有所不同，藥材質(zhì)量良莠不齊，從而表現(xiàn)出不同產(chǎn)區(qū)，甚至即使是同一產(chǎn)區(qū)的板藍(lán)根質(zhì)量存在較大差異，故必須發(fā)展道地藥材、實(shí)施板藍(lán)根GAP規(guī)范化種植，并加強(qiáng)規(guī)范化管理，以確保板藍(lán)根藥材的質(zhì)量。

3 小結(jié)

板藍(lán)根的藥效顯著，臨床應(yīng)用廣泛，但若無(wú)合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制其質(zhì)量，則難以保證其有效性和安全性。文中在結(jié)合前期板藍(lán)根主要活性成分藥理研究的基礎(chǔ)上，對(duì)板藍(lán)根主要成分的分離純化和含量測(cè)定研究的現(xiàn)狀與進(jìn)展進(jìn)行總結(jié)，旨在為板藍(lán)根及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量控制研究提供參考，為明確板藍(lán)根的藥效與物質(zhì)基礎(chǔ)的關(guān)系，建立完備的質(zhì)量控制體系，全面提升質(zhì)量控制水平，以及保障臨床療效提供參考。