基于正交試驗(yàn)法多指標(biāo)優(yōu)選紅麻凝膠膏提取工藝

劉洪盛 皮鳳娟 張慶蓮

摘要：目的優(yōu)選紅麻凝膠膏提取工藝。方法以羥基紅花黃色素A，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量以及干浸膏得率為考察指標(biāo)，考察加水量，提取時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)提取工藝的影響。結(jié)果最佳提取工藝為加10倍量水，提取3次，每次提取1 h。結(jié)論該優(yōu)化的提取工藝條件穩(wěn)定可行，重復(fù)性好，適合于該制劑的大生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：紅麻凝膠膏;正交實(shí)驗(yàn);提取工藝

中圖分類號(hào)：R2842文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2019）11-0077-03

消腫活血散為本院著名院內(nèi)制劑，它是本院一種外用散劑（俗稱糊藥）。其主要功效為活血化瘀，消腫止痛，廣泛應(yīng)用于本院骨傷科，外科等科室，其療效獨(dú)特，毒副作用小，在病員中有較高知名度[1]。但實(shí)際應(yīng)用中存在膏體粗糙不細(xì)膩，膏體不易清洗，微生物限度易檢查超標(biāo)，質(zhì)量難以控制等缺點(diǎn)[2]。現(xiàn)準(zhǔn)備將消腫活血散改進(jìn)成凝膠膏劑，應(yīng)用于閉合四肢軟組織損傷，凝膠膏的研制和臨床應(yīng)用，能克服原劑型缺點(diǎn)，使藥物有效成分透皮快速吸收，提高生物利用度，增強(qiáng)療效且攜帶方便，更容易被廣大患者接受。經(jīng)查閱文獻(xiàn)[3-4]，該散劑以紅花、麻黃為君藥，紅花中羥基紅花黃色素A，麻黃中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿具備鎮(zhèn)痛、消腫、化淤多種功效。故以羥基紅花黃色素A，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量及干膏得率為指標(biāo)，運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)篩選最佳提取工藝?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與材料

FA2004型電子天平（上海安亭電子儀器廠）;ZDHW調(diào)溫電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）;DZF-1B真空干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）;恒溫水浴鍋

鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171237-201510），鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171241-201809），羥基紅花黃色素A對(duì)照品（批號(hào)111637-201810）（中國(guó)食品藥品檢定研究院）;所用試劑均為分析純;水為純化水。

麻黃，紅花等藥材（購(gòu)自康美藥業(yè)有限公司），由瀘州市中醫(yī)醫(yī)院主任中藥師張世波鑒定為正品。

2方法與結(jié)果

21鹽酸偽麻黃堿，鹽酸麻黃堿，羥基紅花黃色素A含量測(cè)定方法的建立

211色譜條件賽分色譜柱Sepax Bio-C18（250 mm×46 mm，5 μm）;流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：乙腈，流動(dòng)相C：01%磷酸（含01%三乙胺），梯度洗脫（0～22 min，5%B，95%C;23～33 min，2%B，72%C）;流速為1 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm和403 nm;進(jìn)樣量為10 μL;柱溫30℃。

212溶液的制備麻黃混合對(duì)照品溶液：分別精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品，加甲醇制成含鹽酸麻黃堿對(duì)照品00445 mg·mL-1，鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品00430 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液：精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，加20%甲醇制成含羥基紅花黃色素A對(duì)照品01084 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：按25倍日處方量稱取藥材，其中一部分藥材提取完揮發(fā)油后過(guò)濾，濾液備用;將藥渣與剩余藥材混合，加8倍量水提取3次，每次1 h，濾過(guò)，合并濾液，經(jīng)045μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按供試品制備方法制備缺麻黃和紅花的陰性對(duì)照品溶液。

213方法學(xué)考察專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取麻黃混合對(duì)照品溶液，羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，供試品溶液，陰性對(duì)照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件檢測(cè)。結(jié)果對(duì)照品溶液和供試品溶液在相同的保留時(shí)間均有出峰，陰性對(duì)照無(wú)干擾，如圖1。說(shuō)明該測(cè)定方法專屬性強(qiáng)，無(wú)干擾[5-6]。

線性范圍考察 精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，用甲醇稀釋制成鹽酸麻黃堿對(duì)照品濃度為00223 mg/mL～02058 mg/mL，鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品濃度為00215 mg/mL～01710 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，另精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，加20%甲醇制成含羥基紅花黃色素A對(duì)照品濃度為00215 mg/mL～02168mg/mL的對(duì)照品溶液。在上述色譜條件下，分別取上述對(duì)照品溶液10 μL注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=14932x+42588（r=09999），y=17605x-20029（r=09999），y=16238x+38284（r=09999）。結(jié)果表明：鹽酸麻黃堿在02-21μg內(nèi)，鹽酸偽麻黃堿在02-17μg范圍內(nèi)，羥基紅花黃色素A在02-22μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度實(shí)驗(yàn) 吸取212項(xiàng)下樣品溶液適量，重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿，羥基紅花黃色素A峰面積的RSD值分別為075%，079%，081%，表明該方法精密度良好。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取212項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，在0，2，4，6和8h分別進(jìn)樣10 μL，記錄3個(gè)成分的峰面積，計(jì)算RSD分別為041%，051%，046%，結(jié)果表明鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿，羥基紅花黃色素A均在8h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品6份，照212項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依照上述色譜條件平行操作測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果3個(gè)成分的RSD值均小于30%，表明本方法的重復(fù)性良好。

耐用性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品，照212項(xiàng)下方法制備供試品溶液，改變色譜柱溫度±5℃、流動(dòng)相比例±5%，流速±2%，進(jìn)行耐用性試驗(yàn)。結(jié)果RSD<30%，說(shuō)明本方法穩(wěn)定。

加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿，羥基紅花黃色素A含量的樣品5 mL，共9份，每3份為一組，分別精密加入含鹽酸麻黃堿對(duì)照品00445 mg·mL-1，鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品00430 mg·mL-1，羥基紅花黃色素A對(duì)照品01084 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液25 mL，5 mL，75 mL，混勻，依法制備供試品溶液。依照上述色譜條件平行操作測(cè)定，記錄峰面積，最后計(jì)算鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A的回收率和RSD。結(jié)果鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A的平均回收率分別為：982%（RSD=12%）、995%（RSD=11%）、978%（RSD=14%）。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，各成分的加樣回收率結(jié)果良好，適合用于紅麻凝膠膏中有效成分的含量測(cè)定[7-9]，見(jiàn)圖1。

22正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取工藝根據(jù)單因素考察的結(jié)果，選定提取時(shí)間、提取次數(shù)、加水量為考察因素，以鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A含量和干浸膏得率為指標(biāo)綜合評(píng)分，應(yīng)用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)。按處方量比例準(zhǔn)確稱取各味藥材，共9份，編為1-9號(hào)，提取液過(guò)濾，定容即得[10-12]。

221干浸膏得率的測(cè)定精密移取上述提取液液25 mL，置于已經(jīng)恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置烘箱中干燥至恒重，減去皿重，計(jì)算干浸膏得率。

222測(cè)定方法精密吸取麻黃混合對(duì)照品溶液，羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液和上述樣品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A的含量，方差分析采用spss100軟件，結(jié)果見(jiàn)表1-2。

223結(jié)果由表1可知，3個(gè)因素中對(duì)提取工藝的影響順序?yàn)锽（提取次數(shù)）>C（加水量）>A（提取時(shí)間），由方差分析結(jié)果可知，因素B（提取次數(shù)）對(duì)綜合評(píng)分的影響有顯著性差異，因素A（提取時(shí)間）和因素C（加水量）的影響未達(dá)到顯著性差異，由正交試驗(yàn)得出的最優(yōu)提取條件是A3B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次90 min，但考慮到能源的節(jié)約，故將最優(yōu)條件調(diào)整為A2B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次1 h，以此條件進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。

224驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按處方量比例稱取紅花，麻黃等藥材，按最佳提取工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果綜合評(píng)分分別為100，9688，9851，RSD為158%，表明該工藝穩(wěn)定可靠[13-14]。

3討論

由于本制劑為復(fù)方，藥效成分復(fù)雜，使用單一成分作為考察指標(biāo)可能會(huì)影響制劑質(zhì)量，故選擇方中兩味君藥的有效成分及干浸膏量作為考察指標(biāo)[15-16]。

在混合對(duì)照品的制備過(guò)程中，首先將鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿和羥基紅花黃色素A三個(gè)對(duì)照品精密稱定后混合溶解在甲醇中，用選定的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰對(duì)稱因子和分離度均能達(dá)到要求，但羥基紅花黃色素A峰出現(xiàn)分裂，考慮可能是對(duì)照品的原因，后按照212方法重新配制對(duì)照品后再按照選定色譜條件進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿和羥基紅花黃色素A峰對(duì)稱因子和分離度均能達(dá)到要求，說(shuō)明按照文中選定色譜條件進(jìn)行對(duì)照品檢測(cè)時(shí)，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿與羥基紅花黃色素A應(yīng)分別配制。

在進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)時(shí)，考慮到提取時(shí)間和加水量對(duì)綜合評(píng)分的影響未達(dá)到顯著性差異，在節(jié)約能源的基礎(chǔ)上，在選定最佳工藝時(shí)同時(shí)進(jìn)行了加8倍水，加6倍水和提取05小時(shí)的工藝考察，最終比較發(fā)現(xiàn)當(dāng)加水量為10倍，提取3次，每次1小時(shí)時(shí)綜合評(píng)分最佳。[KH*1D]

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（收稿日期：2019-07-16）