應(yīng)用瑞舒伐他汀降血脂后的不同療效人群腸道微生態(tài)菌群差異分析

張玲 陳雪梅

[摘要]目的 分析瑞舒伐他汀治療高脂血癥后不同療效的患者腸道微生態(tài)菌群的差異。方法將本院68例行瑞舒伐他汀治療的高脂血癥患者作為研究對(duì)象，根據(jù)患者治療后2個(gè)月降脂效果的不同，分為降脂良好組（A組，n=49）與降脂欠佳組（B組，n=19）。比較兩組患者治療前后血脂水平的差異，并收集患者糞便提取腸道微生態(tài)菌群DNA，采用DNA測(cè)序技術(shù)分析患者腸道微生態(tài)菌群的差異。結(jié)果A組治療后總膽固醇（TC）、甘油三酷（TG）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）的含量較治療前均明顯下降，高密度脂蛋白-膽固醇（HDIr-C）含量較治療前明顯升高，且治療后A組與B組比較TC、TG、LDL-C的含量均明顯下降HDI}C含量明顯升高（P<0.05）。A組疣微菌門(mén)、厚壁菌門(mén)、梭桿菌門(mén)及柔壁菌門(mén)豐度較B組顯著升高，而互養(yǎng)菌門(mén)、藍(lán)細(xì)菌門(mén)、放線(xiàn)菌門(mén)及擬桿菌門(mén)豐度較B組顯著下降（P<0.05）。A組擬桿菌門(mén)中的擬桿菌科的相對(duì)豐度較B組明顯減少（P<0.05）;厚壁菌門(mén)中的乳酸桿菌科、毛螺菌科、瘤胃菌科和梭菌科的相對(duì)豐度較B組均明顯增多（P<0.05）。結(jié)論采用瑞舒伐他汀治療高脂血癥后，不同療效差異的患者在腸道微生態(tài)菌群門(mén)豐度和科數(shù)量方面存在較大差異。

[關(guān)鍵詞]瑞舒伐他汀;高脂血癥;腸道;微生態(tài)菌群

中圖分類(lèi)號(hào)：R589.2;R972⁺.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-816x（2019）05-0408-04

doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2019.05.006

近年來(lái)高脂血癥的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)，而心血管系統(tǒng)疾病已是威脅人們健康的主要公共衛(wèi)生問(wèn)題，是引起成年人死亡的主要原因[1]。他汀類(lèi)藥物是目前國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用于臨床治療高脂血癥患者的重要藥物，該類(lèi)藥物通過(guò)阻滯脂質(zhì)合成限速步驟中的HMG-CoA還原酶，進(jìn)而抑制甲基戊酸的合成。其中，瑞舒伐他汀是具有代表性的他汀類(lèi)藥物之一，其在臨床中的應(yīng)用較廣，是第三代他汀類(lèi)藥物，經(jīng)人工合成，亦是一種HMG-CoA還原酶抑制劑[2]。腸道微生態(tài)菌群與高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，高脂血癥患者多合并腸道微生態(tài)菌群失調(diào)，進(jìn)而引起機(jī)體脂代謝失調(diào)加重，造成惡性循環(huán)。本研究將本院68例行瑞舒伐他汀治療的高脂血癥患者作為研究對(duì)象，分析經(jīng)藥物治療后不同療效的患者腸道微生態(tài)菌群的差異，旨在為高脂血癥患者更好地應(yīng)用瑞舒伐他汀進(jìn)行降脂治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料：將2017年3月至2018年3月本院68例行瑞舒伐他汀治療的高脂血癥患者作為研究對(duì)象，入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）以下指標(biāo)≥1項(xiàng)：血清總膽固醇（totalcholesterol，TC）≥5.72mmol/L，甘油三醋（triglyceride，TG）≥1.70mmol/L，低密度脂蛋白-膽固醇（low-densi-ty lipoprotein cholesterol，LDL-C）≥3.64mmol/L，高密度脂蛋白-膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）≤0.91mmol/L[3]：（2）服用瑞舒伐他汀治療1-2個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有急慢性胃腸道疾病;（2胖有藥物性血脂異常、近期服用抗生素;（3）伴有惡性腫瘤、肝腎功能不全、甲狀腺功能低下、骨折、嚴(yán)重感染、腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn);（4）長(zhǎng)期服用避孕藥、類(lèi)固醇激素、甲狀腺激素治療者;（5胖有精神性疾病等。根據(jù)患者治療后2個(gè)月降脂效果的不同，其中降脂良好者為A組（49例），降脂欠佳者為B組（19例）。降脂良好定義為治療后血清TC水平下降至少10%，TG水平下降至少20%，LDL-C水平下降至少10%，HDL-C水平增加至少0.10mmol/L[4]，符合上述任一條件，即為降脂良好;反之，則為降脂欠佳。A組男29例，女20例，年齡28～73歲，平均（48.97±8.04）歲;伴有糖尿病9例，高血壓12例，冠心病11例。B組男12例，女7例，年齡31～74歲，平均（49.74±7.52）歲;伴有糖尿病4例，高血壓7例，冠心病5例。兩組患者性別、年齡及合并癥的比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法：在患者治療后1～2個(gè)月后，糞便標(biāo)本盒經(jīng)環(huán)氧乙烷消毒后，用于裝人新鮮糞便約5g，即刻密封糞便標(biāo)本后，置于-80℃下冷凍保存，時(shí)間嚴(yán)格控制在30min內(nèi)。提取并鑒定糞便細(xì)菌總DNA，制備基因組DNA模板，使用帶有Barcode特異引物，16S V3-V4區(qū)引物8068及341F序列，酶和緩沖液，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）反應(yīng)體系包括Primei（2μM）3μL（6μM），H₂O 2μL，Phusion Master Mix（2×）15μL，gDNA（1ng/μL）10μL（5～10ng）。98℃預(yù)變性60s，以相同溫度變性15s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5min。對(duì)所得PCR產(chǎn)物進(jìn)行混養(yǎng)及純化，確定產(chǎn)物回收膠濃度，上機(jī)測(cè)序，采用DNA測(cè)序技術(shù)分析患者腸道微生態(tài)菌群的差異。觀(guān)察指標(biāo)：記錄兩組患者治療前和治療后2個(gè)月血脂四項(xiàng)水平的情況，包括TC、TG、LDL-C及HDL-C;記錄兩組患者腸道微生態(tài)菌群門(mén)相對(duì)豐度和科數(shù)量的情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：將數(shù)據(jù)錄入SPSS 23.0版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較則用χ²檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后血脂四項(xiàng)的比較：A組治療后TC、TG、LDL-C的水平較治療前均明顯下降，HDL-C水平較治療前明顯升高，且治療后A組與B組比較TC、TG、LDL-C的水平均明顯下降，HDL-C水平明顯升高（P<0.05），見(jiàn)表一。

2.2 兩組患者腸道微生態(tài)菌群門(mén)豐度的比較：A組疣微菌門(mén)、厚壁菌門(mén)、梭桿菌門(mén)及柔壁菌門(mén)豐度較B組顯著升高，而互養(yǎng)菌門(mén)、藍(lán)細(xì)菌門(mén)、放線(xiàn)菌門(mén)及擬桿菌門(mén)豐度較B組顯著下降（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3 兩組患者腸道微生態(tài)菌群科相對(duì)豐度的比較：A組放線(xiàn)菌門(mén)中的雙歧桿菌科、擬桿菌門(mén)中的擬桿菌科的相對(duì)豐度較B組明顯減少（P<0.05）;厚壁菌門(mén)中的乳酸桿菌科、毛螺菌科、瘤胃菌科和梭菌科的相對(duì)豐度較B組均明顯增多（P<0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

高血脂是引起動(dòng)脈粥樣硬化，進(jìn)一步誘發(fā)心、腦缺血的一項(xiàng)高危因素，其病因多種多樣，吸煙、過(guò)量進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)量少、肥胖、飲食飽和脂肪酸過(guò)高、多個(gè)遺傳基因缺陷、部分藥物的應(yīng)用等均可誘發(fā)高脂血癥，且該病的發(fā)生可引起其它疾病[5，6]。因多數(shù)高脂血癥患者無(wú)典型臨床癥狀表現(xiàn)，使得臨床容易受忽視，而此類(lèi)患者發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)性較高，亦是導(dǎo)致患者過(guò)早死亡的主要原因[7]。他汀類(lèi)藥物不僅可增強(qiáng)血漿中LDL-C受體的表達(dá)水平，抑制肝臟LDL-C的合成，而且可促進(jìn)血漿LDL-C的清除，促使高脂血癥患者的膽固醇濃度下降，故此可用于冠心病的一級(jí)和二級(jí)預(yù)防[8，9]。本研究發(fā)現(xiàn)，A組治療后TC、TG、LDL-C的水平較治療前均明顯下降，HDL-C水平較治療前明顯升高，且A組治療后TC、TG、LDL-C的水平較B組均明顯下降，HDL-C水平較B組明顯升高。作為氨基嘧啶衍生物類(lèi)，瑞舒伐他汀既有脂溶性亦有水溶性的特點(diǎn)，進(jìn)入人體后不需要進(jìn)行代謝，故此可提升該藥的降血脂效果。目前，有關(guān)他汀類(lèi)藥物對(duì)高脂血癥患者降脂效果的研究報(bào)道并不少見(jiàn)。有研究報(bào)道，高脂血癥患者應(yīng)用瑞舒伐他汀治療后6周，可使患者血清LDL-C含量下降50%[10]。但另有研究指出，20%～30%的患者降脂效果欠佳，即使增加劑量也難以改善療效，甚至?xí)鸶嗟乃幬锊涣挤磻?yīng)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，68例高脂血癥患者中，經(jīng)瑞舒伐他汀治療后，降脂效果較差者19例，占27.95%，與上述研究報(bào)道相符。

人體腸道微生態(tài)菌群作為復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)之一，其對(duì)機(jī)體新陳代謝特別是脂代謝的影響較大，且對(duì)人類(lèi)健康及疾病的發(fā)生具有重要的影響。在高脂血癥引起的慢性疾病中，腸道菌群起到重要的作用。已有研究報(bào)道，在慢性疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，腸道微生態(tài)菌群的數(shù)量、種類(lèi)及多樣性起到重要的作用[12，13]。一方面，腸道微生態(tài)菌群在人體能量代謝和物質(zhì)代謝中發(fā)揮著重要作用，另一方面在宿主的感染及免疫中亦起到主要作用。既往研究通過(guò)構(gòu)建肥胖大鼠模型，發(fā)現(xiàn)腸道微生態(tài)菌群結(jié)構(gòu)的改變，特別是厚壁菌門(mén)與擬桿菌門(mén)相對(duì)豐度的明顯改變對(duì)降脂起到重要作用，且在高脂血癥患者糞便菌群中，主要特征表現(xiàn)為產(chǎn)短鏈脂肪酸的細(xì)菌明顯減少，而革蘭陰性菌的種類(lèi)數(shù)量明顯增多[14]。另有研究指出，高脂血癥與腸道微生態(tài)菌群失調(diào)存在顯著關(guān)系，并且該菌群多樣性改變預(yù)示人體狀況改變，這對(duì)藥物療效亦會(huì)造成一定影響[15]。因此，充分分析他汀類(lèi)藥物在高脂血癥患者中的降脂效果及其與腸道微生態(tài)菌群的關(guān)系，對(duì)有效改善高脂血癥患者療效，提高生活質(zhì)量具有重要的意義。

本研究顯示A組疣微菌門(mén)、厚壁菌門(mén)、梭桿菌門(mén)及柔壁菌門(mén)豐度較B組顯著升高，而互養(yǎng)菌門(mén)、藍(lán)細(xì)菌門(mén)、放線(xiàn)菌門(mén)及擬桿菌門(mén)豐度較B組顯著下降。A組擬桿菌門(mén)中的擬桿菌科的相對(duì)豐度較B組明顯減少，可能與其具有促進(jìn)脂肪吸收的作用密切相關(guān)。B組擬桿菌門(mén)中的普雷沃氏菌科與擬桿菌科等菌可促進(jìn)內(nèi)毒素的生成，使得體內(nèi)炎癥反應(yīng)加重，進(jìn)而造成血脂異常。其次，本研究結(jié)果顯示，B組放線(xiàn)菌門(mén)的雙歧桿菌科的相對(duì)豐度較A組明顯增高的原因可能是因血脂增高使得雙歧桿菌含量增多，結(jié)果提示腸道微環(huán)境的改變會(huì)導(dǎo)致菌群結(jié)構(gòu)的改變。A組厚壁菌門(mén)中的乳酸桿菌科、毛螺菌科、瘤胃菌科和梭菌科的相對(duì)豐度較B組均明顯增多。有研究報(bào)道，益生菌具有多種生物效應(yīng)，如抗結(jié)腸癌、緩解炎癥程度和過(guò)敏反應(yīng)，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)菌群等，甚至具有調(diào)節(jié)血脂的功能[16]。本文中A組乳酸桿菌科的豐度高于B的原因可能與乳酸桿菌作為益生菌具有一定的降血脂效果。

綜上所述，采用瑞舒伐他汀治療高脂血癥后，不同療效差異的患者在腸道微生態(tài)菌群門(mén)豐度和科數(shù)量方面存在較大差異。

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（收稿日期：2019-2-19）

作者單位：723000 陜西省漢中市人民醫(yī)院心內(nèi)科

作者簡(jiǎn)介：張玲（1981-），碩士，主治醫(yī)師

通訊作者：陳雪梅，副主任醫(yī)師，E-mail：2429235829@qq.com