參蘇丸中4種成分HPLC法測定

安艷蘇 許慶 張麗琴

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測定參蘇丸中葛根素（A）、柚皮苷（B）、橙皮苷（C）和新橙皮苷（D）的含量測定方法。方法：采用Hypersil ODS2色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;柱溫：35℃;流動(dòng)相：甲醇-水，線性梯度洗脫，流速：1mL/min;檢測波長：225nm。結(jié)果：4種成分均能達(dá)到基線分離，且在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率均在98%以上。結(jié)論：本法準(zhǔn)確、簡便、快捷、結(jié)果穩(wěn)定，可用于參蘇丸中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量測定。

【關(guān)鍵詞】 參蘇丸;高效液相色譜法;含量測定

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2019）16-0053-03

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of four components of Shensu pill：Puerarin（A），Method for the detemination of pomeloside（B）、orange peel glycoside（C）、 and new orange peel glycoside（D）. Methods Use hypersil ODS2 column （250 mm×4.6 mm，5 microns）;Column temperature 35 ℃;Flow phase： methanol-water;linear gradient elution，F(xiàn)low rate：1 mL/min;detection wavelength 225 nm.Results All four componentsachieve baseline separation and linear relationship within the corresponding concentration range Goog，The average recovery is above 98%.Conclusion Thismethod accurate、simple、fast，the results were stable and could be used to determine the content of puerarin， naringin，orangetin and new orangeside in shensu pill.

Keywords：Shensu Pill;HPLC;Assaying

參蘇丸是中國藥典收載的品種，由黨參、紫蘇葉、葛根、前胡、茯苓、半夏（制）、陳皮、枳殼（炒）、桔梗、甘草、木香等組成，具有益氣解表、疏風(fēng)散寒、祛痰止咳等作用，用于身體虛弱、感受風(fēng)寒所致感冒，癥見惡寒發(fā)熱、頭痛鼻塞、咳嗽痰多、胸悶呃逆、乏力氣短等[1]。葛根、陳皮和枳殼為其主藥，現(xiàn)代藥理研究表明，葛根中葛根素、大豆苷元和大豆苷等異黃酮類化合物為有效成分，對心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)的疾病有較好的治療作用，其制劑用于治療頭暈頭痛、高血壓病、心絞痛和突發(fā)性耳聾等疾患療效顯著，臨床應(yīng)用廣泛[2]。陳皮中有較高含量的陳皮苷 Hesperidin （亦稱橙皮苷、橘皮苷），具有維持血管正常滲透壓、降低血管脆性、縮短流血時(shí)間等作用。陳皮和枳殼來源于同蕓香科不同種的不同藥用部位，均含有豐富的黃酮類化合物，陳皮主要含有橙皮苷、新橙皮苷，枳殼主要含柚皮苷、新橙皮苷及少量的橙皮苷，且上述黃酮類化合物結(jié)構(gòu)非常相似。為更好地控制藥品質(zhì)量，本研究參照文獻(xiàn)[3-4]建立了高效液相色譜法測定其中4種成分-葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量測定方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 1260型高效液相色譜儀（包括G1311C型四元泵、G1329B型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱、G1314F型紫外檢測器，美國Agilent 公司）;MS205DU電子分析天平（上海梅特勒儀器有限公司）;KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）。Hypersil ODS2 C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm，大連依利特分析儀器有限公司）。

1.2 材料 葛根素（批號(hào)：110752-201514，含量：95.5%）、柚皮苷（批號(hào)：110722-201613含量：94.3%）、橙皮苷（批號(hào)：110721-201617，含量：96.1%）、新橙皮苷（批號(hào)：111857-201703，含量：99.2%）均購于中國食品藥品檢定研究院。參蘇丸（規(guī)格：6g/袋，批號(hào)：20160101、20160103、20170503，云南XX藥廠）。甲醇為色譜純;水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil ODS2色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇（A）-水（B）線性梯度洗脫（程序見表1）;柱溫：35℃;流速：1mL/min;檢測波長：225nm;進(jìn)樣量：5μL。按上述色譜條件，依次取陰性樣品溶液、混合對照品溶液和供試品溶液各5μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的保留時(shí)間依次為：15.2min、27.2min、28.8min、30.3min;理論板數(shù)依次為：13181、39115、43199、49916;4個(gè)成分均分離完全，陰性樣品溶液在與混合對照品溶液相應(yīng)峰處未見色譜峰出現(xiàn)，說明參蘇丸中的其他藥物及輔料對測定無干擾，如圖1所示。

2.2 混合對照品溶液制備 分別精密稱取四種對照品（A：16.30mg;B：15.22mg;C：15.20mg;D：14.96mg）于4個(gè)10mL的量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，搖勻，分別精密量取上述四種對照品溶液2mL于同一25mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻。作為混合對照品儲(chǔ)備液（A：124.53μg/mL;B：114.82μg/mL;C：116.86μg/mL;D：118.72μg/mL）;再精密吸取2.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備 取樣品適量，研細(xì)，精密稱取約1.0g，置于100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率240W，頻率45KHz）40min，放至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液制備 取不含葛根的參蘇丸處方與不含枳殼和陳皮的參蘇丸處方，按參蘇丸[1]制法制備不含葛根與枳殼和陳皮的陰性樣品，按“2.3”項(xiàng)下的制備方法制備陰性樣品溶液，即得。2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液0.5、1、2.5、5、10mL于10mL的量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以進(jìn)樣濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表2。2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，A、B、C、D峰面積的RSD（n=5）分別為0.59%、0.51%、0.64%、0.54%。結(jié)果表明進(jìn)樣精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)20160103的樣品，研細(xì)，精密稱取約1.0g，共5份。按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，記錄色譜圖，結(jié)果A、B、C、D含量的RSD（n=5）分別為1.1%，0.82%，1.0%，0.79%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8? 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別于配制后0、4、8、12、16、24h進(jìn)樣測定，記錄峰面積、結(jié)果A、B、C、D的峰面積的RSD依次為：0.86%、0.79%、0.92%、0.77%。結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9? 加樣回收率試驗(yàn) 取準(zhǔn)確測定含量批號(hào)為“20160103”的樣品，研細(xì)，精密稱取約0.5g，共6份，分別加入對照品溶液（A：1556.6μg/mL，B：1435.2μg/mL，C：1460.7μg/mL，D：1484.0μg/mL）各1mL，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算A、B、C、D的平均回收率（n=6）和RSD，結(jié)果見表3，結(jié)果表明回收率良好。

2.10 樣品含量測定 取3批次樣品，各3份，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算各成分含量，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 試驗(yàn)中曾采用0.1%磷酸溶液，甲醇，乙腈，水作為流動(dòng)相[3-4]，但在試驗(yàn)過程中甲醇—水為流動(dòng)相峰型好，且分離效果良好，故選擇甲醇—水為流動(dòng)相。

3.2 實(shí)驗(yàn)中樣品提取 曾采用水，稀乙醇、乙醇、甲醇等溶劑，結(jié)果顯示甲醇提取效果較好。同時(shí)考察了超聲提取，加熱回流提取方式，結(jié)果兩者差異不大，但超聲提取簡便、快捷，故選擇超聲提取;試驗(yàn)過程中比較了超聲提取（功率240W，頻率45KHz）20、30、45、60、90min的提取效果，結(jié)果顯示超聲提?。üβ?40W，頻率45KHz）45、60、90min的結(jié)果一致，故選擇超聲提?。üβ?40W，頻率45KHz）45min為提取時(shí)間。

參蘇丸是中國藥典收載的品種，葛根、陳皮和枳殼均為其主藥，且葛根素、油皮苷、橙皮苷、新橙皮苷又是其主藥成分。通過該方法可以有效控制參蘇丸中葛根、陳皮、枳殼的質(zhì)與量。在測定過程中、樣品的分離度較好、陰性樣品無干擾、方法簡便，快捷，準(zhǔn)確、一法可控制該處方中多味藥材的質(zhì)與量。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2019-06-13 編輯：程鵬飛）