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    基于層次分析法多指標(biāo)優(yōu)選三方益子方的水提工藝

    2021-12-30 03:13:58隨家寧陳海燕馮婷李芳嬋蔣林黃婉清農(nóng)麗惠廣西中醫(yī)藥大學(xué)南寧530200廣西壯瑤藥工程技術(shù)研究中心南寧530200廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室南寧530200
    中南藥學(xué) 2021年11期
    關(guān)鍵詞:原兒茶酸補(bǔ)骨脂素號(hào)峰

    隨家寧,陳海燕,馮婷,李芳嬋*,蔣林,2,3*,黃婉清,農(nóng)麗惠(.廣西中醫(yī)藥大學(xué),南寧 530200;2.廣西壯瑤藥工程技術(shù)研究中心,南寧 530200;3.廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南寧 530200)

    三方益子方由三個(gè)古代經(jīng)典名方加減化裁而來,由鹽益智、鹽補(bǔ)骨脂、烏藥、金櫻子、酒覆盆子、酒黃精、枸杞子、桑葚、芡實(shí)、酒蓯蓉和炙甘草11味藥組成,具有暖腎祛寒、溫脾養(yǎng)肝、縮尿止遺的功效。臨床以湯劑應(yīng)用多年,療效明顯,由于復(fù)方成分復(fù)雜,為保證臨床應(yīng)用湯劑能充分發(fā)揮出原有的臨床療效和安全性,將古人的臨床用藥經(jīng)驗(yàn)與現(xiàn)代工藝技術(shù)相結(jié)合[1],即以水為溶媒提取,確保安全性和臨床療效的一致性[2]。

    目前“整體觀思想”是破解中藥質(zhì)控碎片化,突破重圍的重要指導(dǎo)[1],采用多指標(biāo)成分評(píng)價(jià)提取工藝可滿足本方物質(zhì)基礎(chǔ)的整體性[3]。中藥復(fù)方有“多成分、多靶點(diǎn)”的特點(diǎn),為遵循復(fù)方制劑“整體”概念,借鑒特征圖譜分析手段,可較好地體現(xiàn)復(fù)方中各類成分與療效的相關(guān)性。得膏率和藥效成分是中藥提取最常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)[3],藥效成分是藥物發(fā)揮臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ),最大限度地提取藥效成分可保證臨床療效及提高用藥效率[4]。因此選擇特征圖譜、主要藥效成分、得膏率為考察指標(biāo),確定各項(xiàng)工藝參數(shù)。另外,對(duì)多指標(biāo)合理的綜合評(píng)價(jià),直接影響著提取工藝參數(shù)的確定,各個(gè)評(píng)價(jià)因素的權(quán)重系數(shù)的確定又是科學(xué)、合理地作出評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)[5],層次分析法(AHP)是一種主觀結(jié)合客觀的評(píng)價(jià)方式,經(jīng)其確定各指標(biāo)的權(quán)重增強(qiáng)了評(píng)價(jià)結(jié)果的合理性和科學(xué)性。

    故本研究在傳統(tǒng)水提取的基礎(chǔ)上,對(duì)三方益子方有效組分進(jìn)行提取工藝優(yōu)選并驗(yàn)證,得到最佳提取工藝參數(shù),為處方的制劑工藝奠定基礎(chǔ)。

    1 材料

    1.1 儀器

    高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司,型號(hào):Anglient 1260 Ⅱ);超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司,型號(hào):KQ-500E);SQP分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司);超純水儀一體機(jī)(廣西南寧市博美生物科技有限公司,型號(hào):Direct-Q5UV);真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司,型號(hào):DZF-6090)。

    1.2 試藥

    鹽益智(Alpinia oxyphyllaMiq.)、鹽補(bǔ)骨脂(Psoralea corylifoliaL.)、烏藥(Lindera aggregata(Sims)kosterm.)、酒 黃 精(Polygonatum sibiricμmRed.)、酒覆盆子(Rubus chingiiHuu)、金櫻子(Rosa LaevigataMichx.)、枸杞子(Lycium barbarumL.)、桑葚(MorusalbaL .)、芡實(shí)(Euryale feroxSalisb.)、酒蓯蓉(C.tubulosa(Schenk)Wight)、炙甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch)均購(gòu)自南寧市華泰中藥飲片有限責(zé)任公司,均由廣西中醫(yī)藥大學(xué)朱意麟老師鑒定為正品;原兒茶酸(批號(hào):RP190605,純度≥99.99%)、補(bǔ)骨脂素(批號(hào):RP190515,純度≥99.99%)、異補(bǔ)骨脂素(批號(hào):RP190423,純度≥99.95%)、甘草酸(批號(hào):RP190517,純度≥99.34%)(成都麥德生科技有限公司);乙腈(色譜級(jí),美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司);磷酸(分析純,成都金山化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):20190606);甲醇(分析純,成都市科隆化學(xué)品有限公司,批號(hào):2020102902)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 水提濃縮液樣品的制備

    按照處方比例的5倍量稱取處方藥材,按8倍、6倍、6倍加水量,2 h、1 h、1 h的提取時(shí)間,提取3次,合并藥液,濃縮至500 mL,置于4℃冰箱保存,備用。

    2.2 特征圖譜研究

    2.2.1 色譜條件 采用Agilent 5 TC-C18(2)(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱;以乙腈(B)-0.2%磷酸(A)為流動(dòng)相;梯度洗脫(0~5 min:5%~7%B;5~12 min:7%~15%B;12~26 min:15%~40%B;26~35 min:40%~50%B;35~45 min:50%~85%B;45~60 min:85%B),流 速1.0 mL·min-1,柱 溫30℃;進(jìn)樣量10 μL;檢測(cè)波長(zhǎng)(0~18.5 min:260 nm;18.5~21 min:300 nm;21~30 min:350 nm;30~60 min:252 nm)。

    2.2.2 供試品溶液的制備 取“2.1”項(xiàng)下樣品5 mL于蒸發(fā)皿中,揮干,精密加入25 mL甲醇轉(zhuǎn)移至錐形瓶中,稱定重量,超聲30 min,待冷卻后,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減少的重量,即得。

    2.2.3 各單味藥溶液的制備 按處方比例稱取各單味藥,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制得各單味藥材供試品溶液。

    2.2.4 特征圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià) 按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備10批次供試品溶液進(jìn)行測(cè)定,記錄圖譜。將10個(gè)圖譜導(dǎo)入“中藥色譜特征圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”(2012年版),以S1為參照?qǐng)D譜,時(shí)間窗寬度為0.1 s,通過多點(diǎn)校正后,采用中位數(shù)相關(guān)系數(shù)法進(jìn)行圖譜自動(dòng)匹配,生成10批次樣品共有模式圖譜,確定了19個(gè)共有峰,并建立對(duì)照?qǐng)D譜(R),結(jié)果見圖1,計(jì)算相似度,結(jié)果見表1。10批三方益子方的相似度均在0.982以上,表明不同批次間樣品相似度良好。

    表1 相似度評(píng)價(jià)結(jié)果(n=10) Tab 1 Similarity evaluation (n=10)

    圖1 10批樣品HPLC色譜疊加圖Fig 1 HPLC chromatogram stacking of 10 batches of samples

    2.2.5 共有峰的分析 通過對(duì)10批樣品圖譜進(jìn)行分析,共標(biāo)定出19個(gè)共有峰,選擇峰面積較大、保留時(shí)間居中且穩(wěn)定性好的15號(hào)峰(補(bǔ)骨脂素)為參照峰,分別計(jì)算10批樣品共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積,見表2和表3,表明不同批次間制備的三方益子方相應(yīng)色譜峰的峰面積存在差異。

    表2 10批供試品19個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間結(jié)果(n=10) Tab 2 Relative retention time of 19 common peaks of 10 batches of test samples (n=10)

    表3 10批供試品19個(gè)共有峰相對(duì)峰面積結(jié)果(n=10) Tab 3 Relative peak area of 19 common peaks of 10 batches of samples (n=10)

    2.2.6 共有峰的歸屬及指認(rèn) 將供試品溶液和處方中各單味藥溶液,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,記錄圖譜,見圖2。與對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行比較,其中鹽益智含有3、4、5號(hào)峰,補(bǔ)骨脂中含有8、9、15、16、18、19號(hào)峰,烏藥中含有2、6號(hào)峰,金櫻子中含有2、5、11號(hào)峰,覆盆子中含有2、11號(hào)峰,黃精中含有1、3、4號(hào)峰,枸杞子中含有1、3、4號(hào)峰,肉蓯蓉中含有2、3、4、7、11、12號(hào)峰,芡實(shí)中含有2號(hào)峰,桑葚中含有2、3、4、5號(hào)峰,甘草中含有3、10、11、14、17號(hào)峰。并且用對(duì)照品比對(duì)出,3號(hào)峰屬于5-羥甲基糠醛,5號(hào)峰屬于原兒茶酸,7號(hào)峰屬于松果菊苷,15號(hào)峰屬于補(bǔ)骨脂素,16號(hào)峰屬于異補(bǔ)骨脂素,17號(hào)峰屬于甘草酸。

    圖2 共有峰的指認(rèn)圖Fig 2 Identification of common peaks

    2.2.7 特征圖譜方法學(xué)考察

    ① 精密度:取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液1份,連續(xù)進(jìn)樣6針,結(jié)果19個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值均分別在0.010%~0.18%和0.10%~1.9%,證明儀器精密度良好。

    ② 重復(fù)性:按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份,進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果19個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值分別為0.010%~0.50%和0.57%~2.8%,表明方法重復(fù)性良好。

    ③ 穩(wěn)定性:取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液1份,于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣,結(jié)果19個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值分別為0.030%~0.44%和0.28%~2.8%,表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.3 三方益子方中4種成分含量測(cè)定

    2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸對(duì)照品適量,精密稱定,分別用甲醇溶解于10 mL量瓶并定容,搖勻,即得質(zhì)量濃度為0.422、0.406、0.969和0.965 mg·mL-1的原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸的對(duì)照品溶液。

    2.3.2 樣品及陰性樣品溶液的制備 供試品溶液制備同“2.2.2”項(xiàng)下方法。按處方比例分別稱取除鹽益智、金櫻子、桑葚、枸杞子外的藥材,按“2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液①。

    2.3.3 缺補(bǔ)骨脂陰性樣品溶液的制備 按處方比例分別稱取除補(bǔ)骨脂外的藥材,按“2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液②。

    2.3.4 缺炙甘草陰性樣品溶液的制備 按處方比例分別稱取除炙甘草外的藥材,按“2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備陰性樣品溶液③。

    2.3.5 專屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,結(jié)果見圖3。顯示原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸4個(gè)成分的色譜峰保留時(shí)間與樣品中相應(yīng)的色譜峰保留時(shí)間一致,各個(gè)峰分離度、對(duì)稱性較好,各陰性樣品對(duì)成分測(cè)定無影響,色譜柱理論塔板數(shù)以不低于20 000為準(zhǔn)。

    圖3 三方益子方提取工藝專屬性試驗(yàn)結(jié)果Fig 3 Specificity test of the extraction process of Sanfang Yizi prescription

    2.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取“2.3.1”項(xiàng)下各對(duì)照品溶液適量,于5 mL量瓶中,甲醇溶解并定容至刻度線,制成含原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸質(zhì)量濃度為0.041、0.0715、0.0969和0.11 mg·mL-1的 混 合 對(duì) 照品溶液,分別稀釋成系列濃度線性溶液,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄各個(gè)指標(biāo)成分的峰面積,分別以峰面積(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(μg,X)為橫坐標(biāo),得原兒茶酸線性回歸方 程 為Y=2.906×103X+4.230,R=1.000;補(bǔ)骨脂素為Y=4.844×103X+16.58,R=1.000;異補(bǔ)骨脂素為Y=6.073×103X+29.92,R=1.000;甘草酸為Y=783.9X+2.840,R=1.000。結(jié)果表明原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸分別在0.082~0.410 μg、0.143~0.715 μg、0.194~0.969 μg、0.22~1.10 μg內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

    2.3.7 方法學(xué)考察

    ① 精密度考察:精密吸取“2.3.6”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液10 μL,進(jìn)樣測(cè)定,連續(xù)進(jìn)樣6次,結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均峰面積RSD值分別為0.80%、0.60%、0.60%和0.61%,表明儀器精密度良好。

    ② 穩(wěn)定性考察:按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均峰面積RSD值分別為0.64%、0.73%、0.49%和0.33%,表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。 ③ 重復(fù)性考察:按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份,進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均峰面積RSD值分別為2.3%、1.9%、1.9%和2.8%,表明方法重復(fù)性良好。

    ④ 加樣回收率:精密吸取“2.1”項(xiàng)下樣品2.5 mL,共6份,分別精密加入新配制的質(zhì)量濃度為0.95、1.049、1.057、0.53 mg·mL-1的原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸對(duì)照品溶液適量,平行制備供試品溶液6份,進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均加樣回收率分別為100.58%、102.73%、98.83%和101.78%,RSD值 分 別 為1.4%、1.6%、2.0%和1.4%。

    2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化三方益子方最佳提取工藝

    2.4.1 綜合評(píng)分計(jì)算公式[6-7]

    其中,A為特征圖譜峰面積和,A=A1+A2+……+A19;B為原兒茶酸;C為補(bǔ)骨脂素;D為異補(bǔ)骨脂素;E為甘草酸;F為得膏率;Wi為指標(biāo)權(quán)重系數(shù)。

    其中,m為干膏重,M為藥材重。

    其中,i為指標(biāo),αi為指標(biāo)評(píng)分?jǐn)?shù),m為受檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)層次數(shù)。

    其中,CR為一致性比例因子;RI為一致性指標(biāo),具體參照表4。

    表4 平均隨機(jī)一致性指標(biāo)RI值 Tab 4 Average random consistency index RI value

    2.4.2 指標(biāo)權(quán)重的確定[9]根據(jù)三方益子復(fù)方中藥味的君臣佐使配伍規(guī)律、各成分藥理作用強(qiáng)弱以及有效成分所歸屬的藥味多少,本研究將特征圖譜峰面積總和,原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸峰面積和得膏率作為權(quán)重指標(biāo)予以量化,即將6項(xiàng)指標(biāo)分成5個(gè)層次,各層次評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表5,并確定優(yōu)先順序:特征圖譜峰面積總和>原兒茶酸>補(bǔ)骨脂素=異補(bǔ)骨脂素>甘草酸>得膏率,構(gòu)建優(yōu)先判斷矩陣,見表6。

    表5 各層次評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) Tab 5 Grading criteria for each level

    表6 指標(biāo)成對(duì)比較判斷優(yōu)先矩陣 Tab 6 Pairwise comparison judgment priority matrix of indicators

    按照“2.4.1”項(xiàng)下綜合評(píng)分計(jì)算公式得出特征圖譜峰面積總和,原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸和得膏率的權(quán)重系數(shù)分別為0.3939、0.2372、0.1346、0.1346、0.0655、0.0343,一致性比例因子(CR)=0.016 47<0.10,指標(biāo)優(yōu)先比較判斷矩陣具有滿意的一致性,求得的權(quán)重系數(shù)有效。

    2.4.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇影響因素為提取時(shí)間(A,2 h、2.5 h、3 h)、料液比(B,1∶12、1∶14、1∶16)、提取次數(shù)(C,1、2、3次),L9(34)為正交表進(jìn)行正交試驗(yàn),以特征圖譜峰面積總和,原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸的峰面積,以及得膏率的綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo),根據(jù)“2.4.1”項(xiàng)下方法計(jì)算綜合總評(píng)分,并進(jìn)行直觀分析與方差分析。因素與水平見表7,正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)直觀分析結(jié)果見表8,方差分析結(jié)果見表9。

    表7 因素與水平表 Tab 7 Factor and level

    表8 三方益子方提取正交試驗(yàn)直觀分析結(jié)果(n=2) Tab 8 Visual analysis of orthogonal experiment of Sanfang Yizi prescription (n=2)

    表9 三方益子方正交試驗(yàn)的方差分析結(jié)果 Tab 9 ANOVA of Sanfang Yizi prescription of orthogonal test

    直觀分析結(jié)果示3個(gè)因素的主次關(guān)系為B>C>A,方差分析結(jié)果表明B、C因素對(duì)綜合評(píng)分結(jié)果均具有顯著影響,A不顯著,正交試驗(yàn)結(jié)果表明最佳工藝為A3B2C3,即加14倍水,提取3次,每次3 h,但結(jié)合生產(chǎn)成本、經(jīng)濟(jì)效益等因素,即最佳提取工藝為加14倍水,提取3次,每次2 h。

    2.4.4 正交試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果 按照最佳提取工藝提取3批藥,根據(jù)建立的含量測(cè)定方法和特征圖譜方法,進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算綜合評(píng)分,結(jié)果表明工藝穩(wěn)定,重復(fù)性好,可作為該方的水提工藝(見表10)。

    表10 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 Tab 10 Verification test

    3 總結(jié)與討論

    質(zhì)量標(biāo)志物基于有效、特有、傳遞與溯源、可測(cè)和處方配伍的“五要素”為核心,既反映了與有效性(和安全性)的關(guān)聯(lián)關(guān)系,又體現(xiàn)中藥成分的專屬性、差異性特征,特別是基于方-證對(duì)應(yīng)的配伍環(huán)境,使質(zhì)量研究回歸到中醫(yī)藥理論,體現(xiàn)針對(duì)疾病的中藥有效性表達(dá)方式及其物質(zhì)基礎(chǔ)的客觀實(shí)質(zhì)[10]。中藥特征圖譜現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于整體反映中藥成分復(fù)雜性的研究中,可對(duì)某些特征成分進(jìn)行指認(rèn)及分析,是中藥的有效質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)方法[11]。三方益子復(fù)方成分繁多復(fù)雜,采用單一指標(biāo)考察工藝,一味追求個(gè)別成分含量最大,使得結(jié)果太過片面,應(yīng)全面綜合權(quán)衡,與現(xiàn)代技術(shù)特征圖譜等結(jié)合,盡可能覆蓋君臣佐使藥材中的有效成分來反映中藥復(fù)方的有效成分群體,嘗試用未知的結(jié)構(gòu)成分的模糊數(shù)據(jù)(特征色譜峰的總面積之和)相結(jié)合的方法,進(jìn)行多指標(biāo)的綜合評(píng)定[12]。

    三方益子方中質(zhì)量標(biāo)志物基于“君”藥首選原則,兼顧“臣”“佐”“使”藥的有效成分來篩選,君藥鹽益智中原兒茶酸可通過抗氧化應(yīng)激作用抗氧化應(yīng)激保肝[13],尚可改善老年大鼠的認(rèn)知能力,具神經(jīng)保護(hù)功能[14],且本方中臣藥金櫻子,佐藥桑葚、枸杞子中亦含原兒茶酸成分。君藥補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素可改善腎虛的癥狀,提升老年人的記憶力和認(rèn)知能力[15],保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞,預(yù)防阿爾茨海默病的發(fā)生[16],補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素均可抑制小鼠前列腺增生,改善夜尿增多的癥狀[17],也是治療老年人易患疾病骨質(zhì)疏松癥的活性成分[18]。佐藥炙甘草中甘草酸成分被用作炙甘草配方顆粒的評(píng)價(jià)指標(biāo),具有很好的改善肝臟功能的作用[19],對(duì)各種慢性腎臟疾病具有一定的療效,保護(hù)藥物性腎臟損傷[20],也能夠促進(jìn)腦功能恢復(fù),提升老年人的記憶力和認(rèn)知能力,降低阿爾茨海默病的發(fā)生[21],尚可提高機(jī)體免疫力[22]。 多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)的方式已成為復(fù)方制劑優(yōu)選提取工藝的重要手段,AHP是一種將評(píng)價(jià)指標(biāo)定性與定量相結(jié)合的決策分析方法,不僅考慮了主觀意識(shí)對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)的重視程度,又考慮了各項(xiàng)指標(biāo)原始數(shù)據(jù)之間的相互聯(lián)系及影響,增強(qiáng)了總體評(píng)價(jià)結(jié)果的科學(xué)性及合理性[6]。本研究采用HPLC建立三方益子水提液特征圖譜,標(biāo)定涵蓋了11味藥材的19個(gè)共有峰,建立了原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸含量測(cè)定方法,選用共有峰總面積,原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸和得膏率作為指標(biāo)進(jìn)行考察,避免了以單一指標(biāo)的局限性,與中藥復(fù)方的多組成、多靶點(diǎn)作用特點(diǎn)相吻合[9]。

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