電針介入時(shí)機(jī)對(duì)腰多裂肌損傷模型大鼠Foxo1、Myostatin、Myod蛋白表達(dá)的影響

張佳怡　王彤　白玉琢　李欣怡　魯曼　陳潔　許玥　張淑靜　張莉　劉通

摘要?目的：觀察不同電針介入時(shí)機(jī)對(duì)腰多裂肌損傷大鼠多裂肌叉頭蛋白（Foxo1）、肌肉生長(zhǎng)抑制素（Myostatin）、成肌分化因子（Myod）蛋白表達(dá)的影響。方法：雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、即刻電針組、24 h電針組、48 h電針組，每組8只。以多裂肌肌注0.5%布比卡因復(fù)制腰多裂肌損傷模型。各電針組分別在造模后即刻、24 h、48 h開始電針雙側(cè)“委中”“腎俞”，連續(xù)干預(yù)7 d。以Western blot檢測(cè)各組多裂肌Foxo1、Myostatin、Myod蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：與空白組比較，模型組Foxo1、Myod蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，即刻電針組、48 h電針組Foxo1、Myostatin蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01，P<0.05），24 h電針組Foxo1、Myostatin蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01），Myod蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）;與24 h電針組比較，即刻電針組Myostatin蛋白表達(dá)水平升高（P<0.05）、Myod蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01），48 h電針組Foxo1蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）、Myod蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）。結(jié)論：電針促進(jìn)多裂肌修復(fù)的最佳介入時(shí)機(jī)可能為損傷后24 h。

關(guān)鍵詞?電針;針刺時(shí)機(jī);多裂肌損傷;叉頭蛋白;肌肉生長(zhǎng)抑制素;成肌分化因子;肌衛(wèi)星細(xì)胞;骨骼肌修復(fù)

Effects of Electroacupuncture Intervention Time on the Expression of Foxo1，Myostatin and Myod in Rats with Multifidus Muscle Injury

Zhang Jiayi1，Wang Tong1，Bai Yuzhuo1，Li Xinyi1，Lu Man1，Chen Jie1，Xu Yue1，Zhang Shujing2，Zhang Li1，Liu Tong3

（1 College of Acupuncture-Moxibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 School of Preclinical Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 3 The Fifth Clinical Medical College of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510000，China）

Abstract?Objective：To observe the effects of different electroacupuncture intervention time on the expression of multifidus muscle fork protein（Foxo1），Myostatin and myoblast differentiation factor（Myod）in rats with lumbar multifidus muscle injury. Methods：Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into the blank group（BG），model group（MG），immediate/24 h/48 h electroacupuncture group（0 hG/24 hG/48 hG），with 8 rats in each group. The lumbar multifidus muscle injury model was replicated with 0.5% bupivacaine in the multifidus muscle. Each electroacupuncture group started the electroacupuncture on both sides of the Weizhong（BL40）and Shenshu（BL23）at 0 h/24 h/48 h after modeling，and continuous intervention for 7 days. Western blot was used to detect the expression levels of Foxo1，Myostatin and Myod proteins in multifidus muscles of each group. Results：Compared with the BG，the expression of Foxo1 and Myod proteins in the MG significantly increased（P<0.01）; Compared with the MG，the expression of Foxo1 and Myostatin in the 0 hG and 48 hG were decreased（P<0.01，P<0.05）. The expression of Foxo1 and Myostatin in the 24 hG significantly decreased（P<0.01），and Myod protein expression was significantly increased（P<0.01）. Compared with the 24 hG，the expression of Myostatin protein in 0 hG increased（P<0.05），and the expression of Myod protein in 0 hG significantly decreased（P<0.01）; the expression of Foxo1 protein in 48 hG was significantly increased（P<0.01），and the expression of Myod protein was significantly decreased（P<0.01）. Conclusion：The best intervention time is 24 h after injury，wich can effectively promote multifidus muscle repairing.

Key Words?Electroacupuncture; Acupuncture time; Multifidus muscle injury; Fork protein; Myostatin; Myogenic differentiation factor; Muscle satellite cell; Skeletal muscle repair

中圖分類號(hào)：R274.3;R245.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.03.016

多裂肌是附著面積最大的椎旁肌，對(duì)維持腰椎穩(wěn)定以及控制脊柱活動(dòng)起到關(guān)鍵性的作用。近年來越來越多國(guó)內(nèi)外學(xué)者聚焦于多裂肌的康復(fù)和功能訓(xùn)練[1-2]，以期通過促進(jìn)多裂肌損傷后修復(fù)改善腰背功能障礙。骨骼肌損傷后修復(fù)主要依賴骨骼肌干細(xì)胞-肌衛(wèi)星細(xì)胞（Muscle Satellite Cells，MSCs）的增殖與分化。研究證明[3-4]MSCs的增殖與分化過程有多種細(xì)胞因子及蛋白的參與，其中叉頭蛋白（Foxo1）、肌肉生長(zhǎng)抑制素（Myostatin）及成肌分化因子（Myod）均與MSCs的增殖密切相關(guān)。Foxo1可調(diào)節(jié)Myostatin的表達(dá)，與MSCs的增殖呈負(fù)相關(guān);Myostatin可負(fù)調(diào)節(jié)MSCs最重要的生肌調(diào)節(jié)因子Myod的表達(dá)進(jìn)而調(diào)控肌細(xì)胞分化[5]。課題組前期研究[6-7]已證實(shí)電針可有效促進(jìn)多裂肌損傷后修復(fù)，但電針介入的最佳時(shí)機(jī)尚未明確。肌肉損傷后24 h內(nèi)為炎性反應(yīng)階段，24 h即出現(xiàn)生肌相關(guān)因子的募集，48 h后炎性反應(yīng)減退。因此本實(shí)驗(yàn)以損傷后即刻、24 h、48 h為介入時(shí)機(jī)，通過觀察在大鼠多裂肌損傷后即刻、24 h、48 h進(jìn)行電針干預(yù)對(duì)多裂肌中Foxo1、Myostatin、Myod蛋白表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討電針促進(jìn)腰多裂肌損傷后修復(fù)可能的作用機(jī)制，并篩選電針促進(jìn)多裂肌損傷后修復(fù)的最佳介入時(shí)機(jī)。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動(dòng)物?SPF級(jí)雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量280～320 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（京）2016-0002。隨機(jī)分籠飼養(yǎng)，自由飲食飲水，明暗周期12 h，環(huán)境溫度24 ℃，濕度40%～50%，適應(yīng)性喂養(yǎng)10 d。

1.1.2?試劑與儀器?主要試劑：布比卡因鹽酸鹽（Signa公司，美國(guó)，80-477-DK）;10%水合氯醛（北京歐北生物科技有限公司，批號(hào)780379）;4%多聚甲醛溶液（北京蘭博利德，批號(hào)90090525）;蛋白marker（Thermo公司，美國(guó)，批號(hào)MS-612-P1ABX）;RIPA裂解液;一抗稀釋液;電泳緩沖液;電轉(zhuǎn)緩沖液（北京普利萊基因技術(shù)有限公司，批號(hào)C1503）;TBST液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)T1081-500）;Foxo1兔抗體、Myod鼠抗體（Abcam公司，批號(hào)EP927Y）;Myostatin（Proteintech公司，美國(guó)，批號(hào)19142-1-AP）;Beta Actin抗體（Abcam公司，美國(guó)，批號(hào)mAbcam8226）;山羊抗兔二抗、山羊抗鼠二抗（北京百諾威生物科技有限公司，批號(hào)ZB-2301）;PVDF膜（MLIPLE公司，美國(guó)，批號(hào)IPVH00010）;ECL發(fā)光液（GE Healthcare公司，英國(guó)，批號(hào)RPN2232）。主要儀器：HANS穴位神經(jīng)刺激儀（北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司，型號(hào)LH202H型）;蛋白質(zhì)電泳及轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)（Bio-Rad公司，美國(guó)，型號(hào)170-4155 Trans-Blot Turbo Starter System）;凝膠成像系統(tǒng)（Alpha Innotech公司，美國(guó)，型號(hào)Fluor Chen FC2）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備?分組采用完全隨機(jī)方法將40只大鼠分為空白組、模型組、即刻電針組、24 h電針組、48 h電針組，每組8只。采用一次性肌肉局部注射0.5%布比卡因制備大鼠腰部多裂肌損傷模型。配制10%的水合氯醛（350 mg/kg），對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，背部備皮，選擇L4-L5水平，在脊柱雙側(cè)共4個(gè)點(diǎn)，使用一次性注射器緊貼脊柱進(jìn)針，針達(dá)骨面即止，回抽無血即可注射，每個(gè)點(diǎn)注射0.5%的布比卡因溶液100 μL，共400 μL，旋轉(zhuǎn)針頭拔出，操作過程保持無菌。

1.2.2?干預(yù)方法?各電針組分別從造模后即刻、24 h、48 h開始干預(yù)，將大鼠固定在操作臺(tái)上，暴露背部和后肢，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》（李忠仁，新世紀(jì)全國(guó)高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材，中國(guó)中醫(yī)藥出版社）常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位圖譜，選取雙側(cè)委中穴、腎俞穴進(jìn)行干預(yù)。于大鼠膝關(guān)節(jié)背面正中取委中穴;于大鼠第2腰椎旁開7 mm取腎俞穴。針刺前以75%乙醇消毒，選用華佗牌13 mm一次性針灸針垂直刺入穴位表面皮膚，針刺后連接韓式電針儀HANS-200A，2/100 Hz的疏密波，電流強(qiáng)度1 mA，持續(xù)20 min，1次/d，連續(xù)干預(yù)7 d后取材;模型組、空白組不做任何處理于實(shí)驗(yàn)最后1 d取材。以10%水合氯醛（350 mg/kg）進(jìn)行腹腔麻醉。使大鼠處于深度麻醉狀態(tài)后固定于鼠板上，充分暴露背部。剪開大鼠背部皮膚，以組織剪、鑷子剝離腰部筋膜，于L4、L5兩側(cè)取下大鼠的腰部多裂肌，置于-80 ℃冰箱保存。

1.2.3?檢測(cè)指標(biāo)與方法?運(yùn)用Western Blot法測(cè)定各組大鼠多裂肌中Foxo1、Myostatin、Myod蛋白含量。1）提取蛋白：將取材所得組織置于裂解液中，低溫下勻漿取上清液，并配置標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)蛋白濃度，配平后沸水煮5 min，室溫下降溫。2）電泳：將提前制好的10%丙烯酰胺凝膠置于電泳槽中，電泳緩沖液沒過膠塊，marker上樣3 μL，每組蛋白樣品上樣10 μL，先在80 V的電壓下電泳20 min，再在120 V電壓下電泳100 min;3）電轉(zhuǎn)：將電泳完畢的膠塊修切整齊，與PVDF膜利用三明治夾緊貼置于電轉(zhuǎn)槽內(nèi)，在80V的電壓下電轉(zhuǎn)70 min，之后將膜封閉搖床1 h以上;4）孵一抗：根據(jù)marker剪膜加入一抗封閉，4 ℃過夜（Foxo1、Myostatin一抗按1∶1 000稀釋;Myod一抗按1∶500稀釋）;TBST液搖床清洗3次，10 min/次;5）孵二抗：加入二抗（Foxo1、Myostatin二抗按1∶2 000稀釋;Myod二抗按1∶1 000稀釋），搖床1 h;TBST液清洗6次，5 min/次;6）曝光及灰度值分析：ECL發(fā)光液顯色并置于機(jī)器曝光，得到條帶圖像用quantity one軟件定量分析Foxo1、Myostatin、Myod的灰度值，并取指標(biāo)與Beta Actin的吸光度的比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。每組樣本數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)組間差異用單因素方差分析（One-Way ANOVA）/獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，方差齊性時(shí)兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用Welch檢驗(yàn)，不服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?Western Blot檢測(cè)各組大鼠多裂肌Foxo1表達(dá)的比較?與空白組比較，模型組Foxo1蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，即刻針刺組、48 h針刺組Foxo1蛋白表達(dá)水平均降低（P<0.01，P<0.05），24 h針刺組Foxo1蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P<0.01）;與24 h針刺組比較，即刻針刺組Foxo1蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），48 h針刺組Foxo1蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）。見表1，圖1、圖2。

2.2?Western Blot檢測(cè)各組大鼠多裂肌Myostatin表達(dá)的比較?與空白組比較，模型組Myostatin蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與模型組比較，即刻針刺組、48 h針刺組Myostatin蛋白表達(dá)水平均降低（P<0.01，P<0.05），24 h針刺組Myostatin蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P<0.01）;與24 h針刺組比較，即刻針刺組Myostatin蛋白表達(dá)水平升高（P<0.05），48 h針刺組Myostatin蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1，圖1、圖2。

2.3?Western Blot檢測(cè)各組大鼠多裂肌Myod表達(dá)的比較?與空白組比較，模型組Myod蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，即刻針刺組、48 h針刺組Myod蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），24 h針刺組Myod蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）;與24 h針刺組比較，即刻針刺組Myod蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01），48 h針刺組Myod蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）。見表1，圖1、圖2。

3?討論

髂肋肌、最長(zhǎng)肌及多裂肌共同維持脊柱穩(wěn)定，其中多裂肌與腰椎連接緊密且距中軸最近，在脊柱突然失衡時(shí)可預(yù)先收縮，減少腰椎節(jié)段位移，對(duì)抗腰椎旋轉(zhuǎn)及滑動(dòng)，維持脊柱正常力線。而多裂肌損傷導(dǎo)致其預(yù)激活延遲、協(xié)調(diào)能力降低，維持腰椎穩(wěn)定的功能失常[8]。大量研究已證實(shí)電針干預(yù)可促進(jìn)肌肉損傷后線粒體聚集抑制肌肉瘢痕性修復(fù)[9]、顯著上調(diào)骨骼肌結(jié)蛋白（Desmin）等成肌分化標(biāo)志蛋白的表達(dá)[10]、使損傷局部炎性反應(yīng)高峰期提前并加速其消退[11]，進(jìn)而發(fā)揮促進(jìn)肌肉損傷后修復(fù)的作用。本課題組根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，以局部、遠(yuǎn)端取穴相配，取兩側(cè)“委中”穴、“腎俞”穴為治療點(diǎn)，發(fā)揮針刺行氣活血、疏通經(jīng)絡(luò)的作用。而針刺時(shí)機(jī)作為針灸處方重要組成部分，電針干預(yù)治療骨骼肌損傷的最佳介入時(shí)機(jī)尚未見統(tǒng)一論述。炎性反應(yīng)在肌肉損傷2 h即可出現(xiàn)，首先表現(xiàn)為損傷局部中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，在6～24 h可達(dá)高峰，其后逐漸下降;24 h后Myod等生肌因子表達(dá)開始肌肉修復(fù)，并出現(xiàn)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)在48 h達(dá)到高峰，其后逐漸降低;48 h后炎性反應(yīng)逐漸消退。有研究認(rèn)為炎性反應(yīng)階段電針介入會(huì)加重炎性反應(yīng)[12]，而一些研究則認(rèn)為電針早期介入會(huì)促進(jìn)MSCs增殖高峰期提前[13]。究竟肌肉損傷后在何時(shí)開始電針介入才能達(dá)到最佳治療效果呢？本實(shí)驗(yàn)分別以多裂肌損傷后即刻、24 h、48 h為電針介入時(shí)間點(diǎn)，篩選電針治療多裂肌損傷的最佳介入時(shí)機(jī)。

肌衛(wèi)星細(xì)胞（Muscle Satellite Cells，MSCs）是具有增殖和自我更新能力的成肌前體細(xì)胞，骨骼肌損傷后修復(fù)主要依賴于MSCs的增殖與分化[14]。Myod是參與MSCs增殖的最重要的生肌調(diào)節(jié)因子，直接反映MSC增殖活性并促進(jìn)成肌分化。Myostatin是一種負(fù)向調(diào)節(jié)骨骼肌發(fā)育的分泌型蛋白，大量研究證實(shí)Myostatin通過下調(diào)Myod的表達(dá)抑制了肌細(xì)胞分化[15-16]，調(diào)控MSCs的增殖和分化[17]。Foxo1是調(diào)控肌肉生長(zhǎng)、代謝和細(xì)胞分化的重要轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)與MSC增殖呈負(fù)相關(guān)[18]。研究顯示Foxo1可上調(diào)Myostatin的表達(dá)，抑制MEF2C、Myod和mTOR的表達(dá)對(duì)成肌細(xì)胞的早期分化產(chǎn)生負(fù)調(diào)節(jié)作用[19]。而抑制Foxo1活性在下調(diào)Myostatin表達(dá)的同時(shí)促進(jìn)了Myod的表達(dá)，加速肌肉修復(fù)[20]。因此，本實(shí)驗(yàn)以多裂肌Foxo1、Myostatin及Myod蛋白表達(dá)為觀察指標(biāo)，結(jié)合不同的電針介入時(shí)間點(diǎn)，進(jìn)一步探討電針干預(yù)促進(jìn)多裂肌損傷后修復(fù)的最佳干預(yù)時(shí)機(jī)及起效機(jī)制。

本研究探索不同電針介入時(shí)機(jī)治療腰部多裂肌損傷的時(shí)效作用，采用Western Blot定量檢測(cè)Foxo1、Myostatin及Myod蛋白表達(dá)的變化，證實(shí)電針可下調(diào)腰部多裂肌損傷模型Foxo1、Myostatin蛋白的表達(dá)，且最佳時(shí)機(jī)針刺可上調(diào)Myod蛋白的表達(dá)，證實(shí)針刺治療可有效促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖實(shí)現(xiàn)腰多裂肌損傷后修復(fù)。劉通[21]等觀察針刺血清可上調(diào)Myod的表達(dá)促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖，均與我們的研究證實(shí)針刺通過調(diào)節(jié)Myostatin、Myod蛋白表達(dá)發(fā)揮骨骼肌保護(hù)作用相一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，多裂肌損傷后24 h針刺組其治療效果優(yōu)于即刻針刺組（P<0.05），并明顯優(yōu)于48 h針刺組（P<0.01）。結(jié)果表明多裂肌損傷后24 h針刺為最佳干預(yù)時(shí)機(jī)，對(duì)Foxo1、Myostatin蛋白的抑制作用最優(yōu)，更好的發(fā)揮針刺對(duì)肌生成抑制因子的下調(diào)作用，進(jìn)而上調(diào)Myod蛋白表達(dá)促進(jìn)多裂肌再生，實(shí)現(xiàn)肌肉損傷后修復(fù)。目前對(duì)針刺介入時(shí)機(jī)治療疾病的探討多以腦卒中、周圍性面癱為主，而對(duì)針刺治療骨骼肌損傷的介入時(shí)機(jī)研究較少。研究證實(shí)腦卒中、周圍性面癱[22]在急性期早期針刺介入療效均優(yōu)于恢復(fù)期介入效果，總體呈現(xiàn)為針刺介入越早愈后越佳的趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示肌肉損傷后即刻電針介入并非促進(jìn)肌肉損修復(fù)的最佳時(shí)機(jī)，損傷后24 h電針介入療效最優(yōu)。我們認(rèn)為其可能原因是不同疾病最佳針刺介入時(shí)機(jī)確有不同，本實(shí)驗(yàn)的開展為臨床治療骨骼肌損傷選擇針刺介入時(shí)機(jī)提供了思路及可行依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]Soundararajan LR，Thankappan SM.Efficacy of the Multifidus Retraining Program in Computer Professionals with Chronic Low Back Pain[J].Asian Spine J，2016，10（3）：450-456.

[2]Massé-Alarie H，Beaulieu LD，Preuss R，et al.Corticomotor control of lumbar multifidus muscles is impaired in chronic low back pain：concurrent evidence from ultrasound imaging and double-pulse transcranial magnetic stimulation[J].Exp Brain Res，2016，234（4）：1033-1045.

[3]Kuang S，Chargé SB，Seale P，et al.Distinct roles for Pax7 and Pax3 in adult regenerative myogenesis[J].J Cell Biol，2006，172（1）：103-113.

[4]Alfaro LA，Dick SA，Siegel AL，et al.CD34 promotes satellite cell motility and entry into proliferation to facilitate efficient skeletal muscle regeneration[J].Stem Cells，2011，29（12）：2030-2041.

[5]阮井玲，甄鑫，劉娣，等.Myostatin通過Smad3下調(diào)MyoD的表達(dá)來抑制骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化[J].中國(guó)生物工程雜志，2008，28（5）：99-103.

[6]盧宗孝，晏珺，于雪，等.多時(shí)間點(diǎn)觀察電針“委中”對(duì)大鼠腰多裂肌損傷后IGF1R和IGFBP3的表達(dá)[J].世界中醫(yī)藥，2018，13（4）：954-958.

[7]鄒德輝，陳玉佩，劉通，等.電針“委中”對(duì)布比卡因致大鼠腰多裂肌損傷后形態(tài)學(xué)及CK、IL-17表達(dá)的影響[J].中國(guó)針灸，2017，37（9）：971-976.

[8]賈濤.腰椎后路經(jīng)多裂肌間隙入路治療腰椎間盤突出癥的臨床療效觀察[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，34（3）：390-393.

[9]肖響，張茜，蘇波，等.不同方法干預(yù)大鼠腓腸肌急性鈍挫傷模型的實(shí)驗(yàn)觀察[J].世界中醫(yī)藥，2013，8（9）：1091-1093.

[10]陳歡，彭博，李富運(yùn)，等.電針對(duì)兔腰肌急性鈍挫傷后組織修復(fù)與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路的影響[J].中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐，2014，20（3）：215-220.

[11]李俊華，王正珍，唐云峰，等.針刺對(duì)大鼠骨骼肌挫傷后肌肉再生的影響[J].北京體育大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35（6）：61-65.

[12]趙斌，田惠林，劉玉倩.電針對(duì)肌肉損傷修復(fù)作用的形態(tài)學(xué)研究[J].中國(guó)臨床康復(fù)，2002，6（20）：3044-3045.

[13]覃巾毓，葛運(yùn)雨.針刺對(duì)大鼠骨骼肌損傷后肌衛(wèi)星細(xì)胞的影響[J].體育研究，2012，2（12）：168-169.

[14]Sandri M.Signaling in muscle atrophy and hypertrophy[J].Physiology（Bethesda），2008，23（3）：160-170.

[15]Hennebry A，Berry C，Siriett V，et al.Myostatin regulates fiber-type composition of skeletal muscle by regulating MEF2 and MyoD gene expression[J].Am J Physiol Cell Physiol，2009，296（3）：C525-534.

[16]Gao F，Kishida T，Ejima A，et al.Myostatin acts as an autocrine/paracrine negative regulator in myoblast differentiation from human induced pluripotent stem cells[J].Biochem Biophys Res Commun，2013，431（2）：309-314.

[17]Zhang F，Deng B，Wen J，et al.PPARγ and MyoD are differentially regulated by myostatin in adipose-derived stem cells and muscle satellite cells[J].Biochem Biophys Res Commun，2015，458（2）：375-380.

[18]史新娥，吳國(guó)芳，宋子儀，等.阻斷PI3K/AKT通路通過激活FoxO1抑制豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，（1）：154-160.

[19]Xu M，Chen X，Chen D，et al.FoxO1：a novel insight into its molecular mechanisms in the regulation of skeletal muscle differentiation and fiber type specification[J].Oncotarget，2017，8（6）：10662-10674.

[20]Kitamura T，Kitamura YI，F(xiàn)unahashi Y，et al.A Foxo/Notch pathway controls myogenic differentiation and fiber type specification[J].J Clin Invest，2007，117（9）：2477-2485.

[21]劉通，于佳妮，鄒德輝，等.電針血清對(duì)多裂肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖及Pax-7、成肌分化抗原、磷酸化蛋白激酶B表達(dá)的影響[J].針刺研究，2016，41（5）：402-409.

[22]張沖，萬軍.周圍性面癱針刺時(shí)機(jī)臨床循證分析[J].中國(guó)針灸，2011，31（1）：93-96.