益胃煎劑對萎縮性胃炎小鼠Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響

王鑫　郭秀蘭　康曉慶　郭其貞　盧雪玲　孫述棟

【摘要】 目的：觀察益胃煎劑對慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）小鼠胃黏膜病理組織學(xué)及凋亡行為的影響。方法：小白鼠60只隨機分為正常對照組、CAG模型組（模型組）、益胃煎劑干預(yù)組（干預(yù)組）。水楊酸鈉法復(fù)查萎縮性胃炎小鼠模型，觀察胃黏膜病理形態(tài)學(xué)變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)法觀察胃黏膜細(xì)胞Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。結(jié)果：對正常對照組、模型組、益胃煎劑干預(yù)組的慢性炎癥程度進(jìn)行比較，干預(yù)組與正常對照組無顯著差異，而模型組慢性炎癥程度高于正常對照組、干預(yù)組。干預(yù)組與正常對照組的Bcl-2 LI比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而模型組的Bcl-2 LI明顯高于正常對照組與干預(yù)組（P<0.01）。干預(yù)組與正常對照組的Bax LI比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而模型組的Bax LI明顯低于正常對照組與干預(yù)組（P<0.01）。干預(yù)組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而模型組的Bcl-2/Bax比值明顯高于正常對照組與干預(yù)組（P<0.01）。結(jié)論：益胃煎劑可以減輕CAG小鼠胃黏膜炎癥程度，其機制可能與其能夠下調(diào)Bcl-2表達(dá)，上調(diào)Bax表達(dá)，從而調(diào)節(jié)胃黏膜上皮細(xì)胞的凋亡行為有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 益胃煎劑; 慢性萎縮性胃炎; 凋亡; 中藥

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.13.076 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）13-0-03

慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）是消化系統(tǒng)的常見病、疑難病，屬于中醫(yī)胃脘痛、胃痞等范疇，CAG屬于胃癌的前期疾病，尤其與腸型胃癌的發(fā)病率呈顯著相關(guān)性，如果不加以控制，可能發(fā)展為胃癌[1-3]。西醫(yī)治療CAG沒有明確的特效藥。因此開展中醫(yī)藥對CAG的防治具有重要的臨床意義。本實驗旨在通過觀察益胃煎劑對CAG小鼠胃黏膜病理組織學(xué)、凋亡行為的影響，初步探討其防治CAG的機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

兔抗Bcl-2多克隆抗體，兔抗Bax單克隆抗體，即用型SABC試劑盒，PV-6001二步法免疫組化檢測試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物 SPF級雄性健康小鼠60只，鼠齡5周，體重（20±2）g。購自山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

1.2.2 藥物 益胃煎劑（太子參30 g，懷山藥25 g，白術(shù)10 g，柴胡10 g，木香10 g，香附15 g，白芍12 g，黃芩10 g，雞內(nèi)金15 g，山楂15 g，麥芽15 g，神曲12 g，砂仁6 g，法半夏10 g，生甘草6 g）由醫(yī)院中藥房提供，藥物濃煎后4 ℃冰箱保存。

1.2.3 造模方法 60只小鼠隨機分為三組，每組20只，分別為正常對照組、CAG模型組（模型組）、益胃煎劑干預(yù)組（干預(yù)組）。正常對照組：正常進(jìn)食飲水，每天上午定時給予生理鹽水1 ml灌胃，1次/d，連續(xù)84 d。模型組：正常進(jìn)食飲水，每天以2%的水楊酸鈉溶液0.5 ml灌胃，灌胃前后1 h禁食禁水，連續(xù)56 d，造成胃黏膜慢性損傷;以后28 d結(jié)合饑飽失常（單日禁食、自由飲水，雙日足量食水）。干預(yù)組：按上述方法造模56 d后，繼續(xù)制模的同時給予益胃煎劑1 ml灌胃，1次/d，連續(xù)28 d。造模84 d后處死所有小鼠，胃黏膜標(biāo)本常規(guī)固定包埋，進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)法觀察胃黏膜細(xì)胞Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 HE染色病理組織學(xué)觀察 標(biāo)準(zhǔn)參照2002《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》（試行）中胃黏膜慢性炎癥病理組織學(xué)分度標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.2 免疫組化染色結(jié)果判定 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[4]內(nèi)容，用陽性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)（labeling index，LI）評價，即LI=陽性細(xì)胞/計數(shù)細(xì)胞×100%。每張切片于高倍鏡（×400）下隨機取連續(xù)有代表性的5個以上視野，計數(shù)不少于1 000個上皮細(xì)胞著色陽性細(xì)胞所占百分比。Bcl-2檢測結(jié)果表示為Bcl-2 LI：胞漿染為棕黃色至棕褐色為陽性細(xì)胞，偶見于胞膜、胞核。Bax檢測結(jié)果表示為BaxLI：胞漿染為棕黃色至棕褐色為陽性細(xì)胞，偶見于胞核。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

計量資料的統(tǒng)計描述以（x±s）表示，使用SPSS 11.5軟件包中的One-Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計推斷，兩兩比較采用SNK法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 光鏡觀察

（1）正常對照組胃黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整，腺上皮和腺管分界清楚。模型組胃黏膜明顯萎縮變薄，腺體明顯減少，多有不同程度的排列紊亂，個別還見有腸上皮化生。干預(yù)組胃黏膜厚度適中，腺體排列較規(guī)則，大小形態(tài)較一致，見圖1～圖3。（2）各組小鼠慢性炎癥程度比較：模型組慢性炎癥程度比正常對照組和干預(yù)組高，正常對照組與干預(yù)組慢性炎癥程度比較無明顯差異。

2.2 免疫組化染色結(jié)果

（1）Bcl-2：陽性反應(yīng)物質(zhì)呈棕黃色或棕褐色，主要位于胞漿內(nèi)，偶可伴胞膜、胞核著色。正常對照組陽性細(xì)胞數(shù)較少，模型組陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，干預(yù)組陽性細(xì)胞明顯減少。正常對照組、模型組、干預(yù)組Bcl-2 LI分別為（6.10±0.42）、（9.12±1.95）、（7.04±1.49）%，干預(yù)組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而模型組與正常對照組、干預(yù)組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。（2）Bax：陽性反應(yīng)物質(zhì)呈棕黃色或棕褐色，主要位于胞漿內(nèi)，偶可伴胞膜、胞核著色。正常對照組陽性細(xì)胞數(shù)較多，模型組陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，干預(yù)組陽性細(xì)胞較模型組明顯增多。正常對照組、模型組、干預(yù)組Bax LI分別為（26.25±3.68）、（20.16±4.53）、（24.06±3.72）%，干預(yù)組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而模型組與正常對照組、干預(yù)組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。（3）Bcl-2/Bax：正常對照組、模型組、干預(yù)組Bcl-2/Bax比值分別為0.22±0.03、0.46±0.09、0.28±0.05，干預(yù)組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而模型組高于正常對照組、干預(yù)組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。